На микробиологическую чистоту

Каждое разведение препарата в количестве 1 мл вносят в 6 чашек Петри диаметром 90 мм, в две из ко- торых добавляют по 0,2 мл взвеси B. cereus (или спор

B. subtilis), в две другие — по 0,2 мл рабочей взвеси культуры C. albicans, в 2 последние — 0,2 мл взве- си конидий A. brasiliensis. Чашки с бактериями за- ливают 10-15 мл расплавленного и охлажденного до (42,5±2,5) °С соево-казеинового агара или среды

№ 1, чашки с культурами грибов — тем же количе- ством агара Сабуро или среды №2.

По 1,0 мл каждого разведения препарата вносят в пробирки с 10 мл жидких сред — бульона Моссе-

ля и соево-казеинового бульона (или аналогичных — среда № 3 и среда № 8). Затем по 1 мл взвеси тест- штаммов E. coli, S. аbony, P. aeruginosa, S. aureus (каждый штамм отдельно) вносят в пробирку со сре- дой, соответствующей потребностям теститруемого микроорганизма.

В контрольные чашки и пробирки вместо разве- дений препарата вносят такое же количество раство- рителя.

Посевы инкубируют в стандартных условиях в те- чение 48 ч для бактерий и 72 ч — для грибов.

Метод репликаций рекомендуется использовать для определения антимикробного действия водонера- створимых (суспензии, эмульсии и др.) или окрашен- ных лекарственных средств.

В стерильные чашки Петри вносят по 1 мл каж- дого разведения исследуемого препарата. В контроль- ные чашки вносят по 1 мл разбавителя, используемого для получения разведений. В чашки Петри, как в экс- перименте, так и в контроле, добавляют по 10-15 мл расплавленного и охлажденного до (42,5±2,5) °С со- ево-казеинового агара или среды №1, в другие — та- кое же количество среды Сабуро или среды №2 и тща- тельно перемешивают. После застывания агара чашки подсушивают в термостате или ламинарном шкафу для удаления конденсата с поверхности среды, на ко- торую затем бактериологической петлей, пипеткой или репликатором наносят рабочую взвесь каждого тест- штамма бактерий и грибов в виде бляшек. Посевы на средах инкубируют в стандартных условиях в тече- ние 48 ч для бактерий и 72 ч — для грибов.

После окончания сроков инкубации при визуаль- ном просмотре отмечают появление типичного роста тест-микроорганизмов в контрольных чашках и про- бирках (без препарата) и испытуемых (с различными разведениями препарата). В случаях, затрудняющих учет результатов (помутнения или изменения окра- ски жидкой среды в результате взаимодействия ле- карственного средства с питательной средой), делают пересевы на агаризованные среды.

При наличии роста E. coli, S. abony, P. aeruginosa,

S. аureu s на питательных средах отмечают отсутствие антимикробного действия исследуемого препарата.

Наличие в испытуемых чашках и пробирках роста тест-микроорганизмов, аналогичного кон- трольным, обозначают знаком «+», отсутствие роста знаком «-». Если на средах с препаратом наблюда- ют уменьшение количества колоний на чашках или отсутствие роста тест-микроорганизмов, делают заключение о наличии антимикробного действия. Первое из последовательных разведений препарата, в котором отсутствует антимикробное действие, ис- пользуют для посева на соответствующую питатель- ную среду.

Для устранения антимикробного действия ЛС мо- гут быть использованы следующие методы:

• увеличение разведения препарата, за счет большего объема разбавителя или питательной среды в пределах норм допустимой микробной загрязнен- ности (в качестве разбавителя вместо стандартного фосфатного буферного раствора используют нейтра- лизующую жидкость (п. 9) лабораторного или про- мышленного изготовления);

• применение специфических инактиваторов (например, β-лактамазу для некоторых антибиотиков и парааминобензойную кислоту (ПАБК) для сульфа- ниламидных препаратов), нейтрализующих антими- кробное действие препарата, но не угнетающие рост микроорганизмов, контаминирующих ЛС;

• для препаратов с консервантами рекоменду- ется использование неспецифических инактиваторов. После проведения валидации в буферный раствор и (или) в питательные среды могут быть добавлены твин-80, соевый или яичный лецитин и др.

• для препаратов, растворимых в воде или в изо- пропилмиристате (ИПМ), применяется метод мем- бранной фильтрации с последующим промыванием фильтров.