Условия проведения испытания

Установка для мембранной фильтрации долж- на иметь конструкцию, из которой легко извлекается фильтр, с последующим его переносом на питатель- ные среды. Используют мембранные фильтры с диа- метром пор не более 0,45 мкм, способные эффективно задерживать микроорганизмы, что необходимо под-

твердить валидацией. Материал мембраны следует выбирать таким образом, чтобы компоненты иссле- дуемого препарата не влияли на его эффективность. Фильтры из нитрата целлюлозы используют для во- дных, масляных и разбавленных спиртовых растворов (менее 30%), из ацетата целлюлозы — для спиртовых растворов (более 30%), кислот, щелочей. Мембранную фильтрацию проводят в асептических условиях с по- мощью вакуума.

Во время выполнения испытания о бразец, как пра- вило, растворяют в буферном растворе в соотношении 1:10. В воронку фильтровальной установки вносят сначала промывную жидкость (примерно 5 мл) для смачивания фильтра. Добавляют количество раствора препарата, соответствующее 1 г испытуемого образца, и немедленно фильтруют. В случае наличия антими- кробного действия лекарственного средства для отмы- вания мембраны используют раствор натрия хлорида 0,9% или описанные ниже жидкости (№1, №2, №3), для чего через фильтр пропускают минимум три порции по 100 мл подходящей стерильной промывной жидко- сти. При необходимости к промывной жидкости мо- гут быть добавлены поверхностно-активные вещества (например, твин-80) или инактиваторы антимикробно- го действия. Через одну мембрану можно пропускать не более 500 мл жидкости. Допускается использование для отмывания мембран менее трех порций промывной жидкости при условии валидации метода.

Смыв с трансдермальных пластырей пропускают через мембранные фильтры по 50 мл (соответствует 1 пластырю) через каждую мембрану.

По окончании процесса фильтрации мембраны переносят на соответствующие питательные среды, разлитые в чашки Петри или флаконы с жидкими пи- тательными средами. Чашки с фильтрами переворачи- вают. Посевы на чашках и во флаконах инкубируют в стандартных условиях.

Подсчет колоний производят через 48-72 ч (пред- варительные результаты) и через 5 сут. (окончатель- ные результаты). Отбирают чашки, где число колоний бактерий на фильтрах не превышает 100, а грибов — 50 и рассчитывают число микроорганизмов на 1,0 г или на 1,0 мл образца или на 1 пластырь. Если на фильтре большее количество микроорганизмов, то делают ряд последовательных разведений образца и выбирают подходящее.

Учет результатов на жидких питательных средах проводят в соответствии с разделом 6.

Для того чтобы определить, полностью ли отмы- ты мембраны от фильтруемого препарата, обладаю- щего антимикробным действием, после фильтрации раствора в последнюю порцию промывной жидкости вносят по 1 мл взвеси тест-культур, соответствующих категории испытуемого образца. Количество вносимо- го каждого в отдельности микроорганизма не должно превышать 100 КОЕ в 1 мл.

Рост тест-штаммов на фильтрах подтверждает от- сутствие антимикробного действия лекарственного средства. В случае если антимикробное действие со- храняется, используют специфические или неспец- ифические инактиваторы или увеличивают объем про- мывной жидкости.

Жидкости для промывания фильтров

• Раствор натрия хлорида 0,9% стерильного рН 7,0

• Жидкость № 1: 1 г мясного пептона растворя- ют в 1000 мл воды, фильтруют или центрифугируют для осветления, разливают во флаконы и стерилизуют. рН после стерилизации 7,0±0,2

• Жидкость № 2: 1 мл твина-80 добавляют к 1000 мл жидкости № 1, разливают во флаконы и сте- рилизуют. рН после стерилизации 6,9±0,2. Жидкость

№ 2 применяют, если в составе препарата имеется масло.

• Жидкость № 3: 5 г мясного пептона, 3 г мяс- ного экстракта и 10 г твина-80 растворяют в 1000 мл воды. Разливают во флаконы и стерилизуют. рН после стерилизации 6,9±0,2.