Определение активности антибиотиков методом диффузии в агар

Этот метод точнее, чем метод серийных разведе- ний, поэтому его чаще используют на практике. Однако методу диффузии присущи определенные недостатки. Критерии для оценки данных, полученных с быстро- растущими микроорганизмами, не применимы к мед- леннорастущим штаммам. Поэтому если в качестве тест-культуры необходимо использовать медленнора- стущий микроорганизм, применяют метод разведений или условия испытания отрабатывают в специальных экспериментах. То же можно сказать и о медленно- диффундирующих антибиотиках.

В чашки Петри разливают питательный агар, смешанный с тест-культурой. Количество послед- ней берут из расчета 20 млн. клеток на 1 мл среды. После застывания агара на его поверхность наносят цилиндры, в которые вносят по 0,1 мл испытуемого раствора антибиотика параллельно со стандартным раствором. Вместо цилиндров можно использовать лунки, которые делают в агаре с помощью специаль- ного приспособления. После этого чашки помещают в термостат при 37°C на 16-18 часов. По истечении этого времени измеряют размеры зон задержки роста тест-микроба.

Расчет активности антибиотика по размеру зон за- держки может быть произведен на основании расчет- ных таблиц В. С. Дмитриевой (ГФ) или по стандарт- ным кривым.

Определение чувствительности микробов к ан- тибиотикам методом дисков проводят прежде всего для оценки эффективности антибиотиков в клиниче- ских условиях. Клинический материал или микроб- ную культуру, выделенную от больного, засевают на поверхность питательного агара сплошным газо- ном, накладывают бумажные диски, пропитанные раствором антибиотика (используют коммерческие образцы, содержащие определенные концентрации). После инкубации при 37°C в течение времени, необ- ходимого для роста выделенного возбудителя, опре- деляют диаметр зоны торможения роста. Полученные величины сравнивают с размерами зон задержки ро- ста, указанными в инструкциях, прилагаемых к дис- кам, после чего выделенные микроорганизмы отно- сят к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным. Прежде чем предложить к реализации любой антимикробный препарат, производитель обя- зан определить спектр его активности по отноше- нию к тысячам штаммов различных микроорганиз- мов, учитывая, что фармакокинетические свойства соединения должны поддерживать концентрации в сыворотке, в 2-4 раза превышающие минимальную ингибирующую концентрацию. При выделении кон- кретных возбудителей используют определенные на- боры дисков (табл. 25).

 

Ферментные методы

13.4.1 Ускоренный метод определения чувствительности микроорганизма

К антибиотику

В чашку Петри наливают 15 мл питательного ага- ра. После застывания агара на него наносят смесь 4 мл такого же агара, 1 мл взвеси тест-культуры, приготов- ленной по стандарту 1 млрд. клеток в 1 мл, и 1 мл 0,2% водного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола (pH 7,2-7,3). Вместо тест-культуры можно использовать клинический материал. Затем на застывший агар яр-

косинего цвета наносят диски, пропитанные антибио- тиками, и чашки ставят в термостат при 37°C. Через 2-4 часа учитывают результаты по диаметру синих зон отсутствия роста. Резистентные к антибиотику микро- бы восстанавливают краситель, обесцвечивая его или трансформируя в желтый цвет.

Данный краситель задерживает рост стафило- кокков, поэтому при работе с этим микроорганизмом раствор индикатора наливают на поверхность чашки в количестве 2-3 мл уже после выдерживания чашки с дисками в термостате. Избыток индикатора сливают через 5-7 мин. и учитывают результаты.

 

Наборы дисков для определения чувствительности некоторых микроорганизмов

Таблица 25.

Бактерии                      Диски с XTB