Специфические (цветные) реакции

Специфические реакции служат для обнаружения отдельных алкалоидов или какой- либо группы алкалоидов. Реакции окрашивания обычно проводят с чистыми (индивидуальными) алкалоидами или с очищенной суммой алкалоидов. Эти реакции основаны либо на отнятии воды в присутствии серной кислоты, либо на конденсации с альдегидами в присутствии серной кислоты, поглощающей воду, либо на окислении алкалоидов, также в присутствии концентрированной серной кислоты.

Так, например, реакция на стрихнин - концентрированная серная кислота с бихроматом калия дает фиолетовое окрашивание. Реактив Марки (концентрированная серная кислота с формальдегидом) с морфином дает пурпурное, переходящее в сине-фиолетовое, окрашивание. Реакция Витали-Морена - на тропановые алкалоиды. К сухому остатку прибавляют 1 мл концентрированной азотной кислоты и выпаривают на водяной бане досуха. Затем прибавляют несколько капель 0,5 н спиртового раствора КОН и ацетона. Наблюдается фиолетовое окрашивание, исчезающее при стоянии.

Для обнаружения определенных алкалоидов служат микрокристаллоскопические реакции с пикриновой, пикролоновой и др. кислотами.

Хроматографический анализ

Хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента используется как для обнаружения и идентификации алкалоидов, так и для контроля степени очистки и разделения суммы алкалоидов.

Бумажная хроматография

Для БХ чаще используют следующие системы растворителей:

Н-БУТАНОЛ - УКСУСНАЯ КИСЛОТА - ВОДА (5:1:4);

Н-БУТАНОЛ - УКСУСНАЯ КИСЛОТА - ВОДА (10:2:5);

ЭТИЛАЦЕТАТ - УКСУСНАЯ КИСЛОТА - ВОДА (11:21:85) и др.

Для обнаружения алкалоидов высушенную хроматограмму обрабатывают реактивом Драгендорфа, появляются оранжевые или оранжево-красные пятна алкалоидов на желтом фоне. Для обнаружения алкалоидов можно использовать пары йода (образуются бурые пятна).

Для обнаружения стероидных алкалоидов можно использовать насыщенный хлороформный раствор треххлористой сурьмы с последующим нагреванием при 105°С. Появляется кирпично-красное окрашивание.

Хроматография в тонком слое сорбента

Хроматографирование проводят на пластинках с закрепленным и незакрепленным слоем сорбента. В качестве сорбента используют оксид алюминия для тонкослойной хроматографии, силикагель марки КСК и др.

Используют следующие системы растворителей:

ХЛОРОФОРМ - АЦЕТОН - ДИЭТИЛАМИН (5:4:1);

ХЛОРОФОРМ - МЕТИЛОВЫЙ СПИРТ - УКСУСНАЯ КИСЛОТА (18:1:1);

БЕНЗОЛ - МЕТИЛОВЫЙ СПИРТ (19:1);

ХЛОРОФОРМ - ЭТИЛОВЫЙ СПИРТ (8:2) и др.

После высушивания ТС хроматограммы обрабатывают теми же реактивами, что и хроматограммы на бумаге.

Количественное определение алкалоидов в ЛРС

Весь процесс определения содержания алкалоидов в РС можно разделить на 3 этапа.

1. Извлечение алкалоидов из ЛРС.

2. Очистка полученных извлечений.

3. Определение содержания алкалоидов.

Извлечение алкалоидов из РС. При количественном определении алкалоиды из растительного сырья так же, как и при их выделении, извлекают в виде оснований или солей.

Очистка извлечения достигается поочередным переведением алкалоидов из органического растворителя в воду и наоборот.

Определение содержания алкалоидов можно провести различными методами.

1. Гравиметрическим (аконит).

2. Титриметрическим (проводят прямое или обратное титрование, потенциометрическое титрование).

Этот метод часто используется при количественном определении алкалоидов (тропанового ряда, эфедры, сферофизы, термопсиса, софоры толстоплодной и др.). ГФ ХI (вып. 2, ст. 13) предусмотрено определение алкалоидов в листьях красавки титриметрическим методом (схема 18).

 

Схема 18

Поэтапная схема количественного определения алкалоидов в листьях красавки

 

Подготовка ЛРС (измельчение, просеивание, взятие навески)

 

 

Извлечение алкалоидов в виде оснований

(+NH4OH + хлороформ)

 

Перевод алкалоидов-оснований в соли (1% раствор HCl)

 

 

Перевод алкалоидов-солей в основания

(+NH4OH + хлороформ)

 

Отгонка хлороформа досуха

 

 

Обратное титрование

(к сухому остатку + определенный объем (15 мл)

0,02 М хлористоводородной кислоты,

избыток которой оттитровывают 0,02 М раствором

едкого натра)

 

 

Расчет результатов (в пересчете на гиосциамин)

 

3. Колориметрическим.

Этот метод позволяет определить как сумму алкалоидов, так и содержание отдельных алкалоидов, подобрав реактив, дающий окрашивание с определенным алкалоидом (в рожках спорыньи); хромато-колориметрический метод определения глауцина в траве мачка желтого.

4. Спектрофотометрическим.

Хромато-спектрофотометрическим методом проводится определение содержания берберина в корнях барбариса.

5. Поляриметрическим методом определяют содержание секуринина в побегах секуринеги.

6. Полярографическим. Количественное определение цитизина в семенах термопсиса ланцетовидного.

7. ГЖХ (газо-жидкостной хроматографией).

При определении содержания алкалоидов в РС могут быть использованы флюориметрический и нефелометрический методы.