Организация рабочих мест и особенности методических приемов при посеве инфицированного материала

Безопасность работ с возбудителями особо опасных инфекций обеспечивается строгим соблюдением правил работы, требованием к лабораторным помещениям и их оснащению (см. выше), обучением и тренировкой персонала, а также диспансерным наблюдением за состоянием здоровья сотрудников. К работе с ПБА допускаются лица не моложе 18 лет с высшим и средним медицинским, биологическим, ветеринарным образованием, которые окончили соответствующие курсы профессиональной переподготовки и не имеют противопоказаний к лечению специфическими препаратами и к работе в СИЗ. Сотрудников лаборатории, работающих с ПБА (кроме возбудителя холеры) и посещающих помещения «заразной» зоны, где ведутся исследования с заразным материалом, вакцинируют, предварительно проведя оценку уровня иммунитета одним из стандартных методов до и после вакцинации (ревакцинации). В исключительных случаях (наличие эффективных специфических средств лечения и длительный опыт работы с ООИ) к работе допускают лиц, имеющих медицинские противопоказания. Сотрудник лаборатории обязан немедленно сообщать руководителю подразделения о появлении симптомов заболевания, вызываемого возбудителем, с которым проводились исследования. В этом случае руководитель учреждения решает вопрос о необходимости изоляции и проведении специфического лечения.

Микробиологические лаборатории, в зависимости от их назначения, имеют тот или иной набор помещений: боксы с предбоксниками, комнаты для проведения серологических исследований и люминесцентной микроскопии, помещение для ПЦР-диагностики и др.

Боксы с предбоксами, где проводятся манипуляции с ПБА, должны быть достаточно просторны, оснащены только необходимыми лабораторной мебелью и приборами. У входной двери помещают смоченный дезинфицирующим раствором коврик. Входная дверь бокса и все объекты с ПБА обозначены знаком биологической безопасности. В предбоксах, оснащенных водопроводом и раковиной для мытья рук, желательно с краном ножного управления, персонал одевает и снимает СИЗ. На случай аварии в предбоксах предусмотрены емкости с дезинфицирующим средством и гидропульт.

Оснащение бокса должно способствовать предупреждению контакта исследователя с инфицированным материалом. Оборудование (в том числе лабораторные столы) изготавливается из материалов, непроницаемых для жидкостей, устойчивых к коррозирующему действию дезинфицирующих средств.

Некоторые виды лабораторной работы и использование того или иного оборудования могут создавать опасность заражения бактериолога. Обычная проволочная бактериологическая петля, являясь традиционным лабораторным инструментом, при неправильном и невнимательном использовании может приводить к образованию аэрозоля. При быстром прожигании петли с жидким инфицированным материалом происходит его вскипание, пленка лопается и образуется бактериальный аэрозоль. Для предотвращения этого явления предложены газовые и электрические приспособления для прожигания петли в экранированном пространстве. Безопасной альтернативой является применение пластиковых петель одноразового использования.

Предотвратить образование аэрозолей при обжиге бактериологической петли может применение правильной техники обеззараживания. Петлю подносят к пламени горелки так, чтобы между ней и оператором находилось пламя горелки. Осторожно нагревают сначала иглодержатель, затем саму петлю в нижней части пламени (где наиболее низкая температура) и постепенно переводят петлю в верхнюю часть пламени спиртовки. Таким образом, петлю прокаливают докрасна 2-3 раза.

Образованию аэрозолей при работе с бактериологической петлей способствует оставленное при изготовлении незамкнутым проволочное кольцо петли. Стандартная бактериологическая петля имеет диаметр замкнутого кольца 3 мм и, так называемый, хвостик, не превышающий 6 см.

Аварийная ситуация возникает, когда экспериментатор неправильно (без предварительного осторожного подсушивания) обжигает петлю с остатком агаровой бактериальной культуры: материал может обуглиться, отскочить от петли и упасть на стол. В этом случае необходимо прекратить работу, осмотреть поверхность стола, найти упавший комочек и убрать его с помощью пинцета и ватного тампона, смоченного в дезинфицирующем растворе, т.к. внутри комочка микроорганизмы остаются жизнеспособными. На место падения патогена накладывают свежий тампон с дезсредством на 1 час, а находящиеся на столе предметы обрабатывают дезинфицирующим раствором. Ватные тампоны, бывшие в употреблении, опускают в емкость для отбросов с дезраствором.

Не исключается образование бактериальных аэрозолей при посевах жидкой культуры и отборе с чашек Петри колоний микроорганизмов, если пользоваться не остывшей петлей. Во избежание этого достаточно работать одновременно двумя бактериологическими петлями, одна из которых остывает после прожигания, или применять одноразовый инструмент. Не рекомендуется остужать петлю о поверхность плотного агара с посевом во избежание разбрызгивания или гибели патогена, а также возможности его загрязнения посторонней микрофлорой, не заметной невооруженным глазом. Остудить петлю можно прикосновением её к внутренней поверхности крышки чашки Петри.

Образование бактериальных аэрозолей возможно также при изготовлении мазков на предметных стеклах, постановке ориентировочной реакции агглютинации на стекле, смывах бактериальной культуры с поверхности агара, пипетировании инфицированного материала и других манипуляциях, наиболее часто применяемых в практике бактериологических исследований.

До начала работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп патогенности, следует подготовить всё необходимое.

На лабораторном столе справа от центра (условно «заразная» зона) размещают: фиксатор для мазков (банка с притертой или плотно закрывающейся крышкой с фиксирующей жидкостью), ёмкости с дезинфицирующими растворами для погружения отработанных предметных стекол, инфицированных отбросов, обработки рук, большой стерилизатор или высокий стеклянный цилиндр в металлическом корпусе для погружения использованных пипеток; от центра слева (условно «чистая» зона) помещают банки с предметными стеклами в 96 º спирте, банку со стерильными и нестерильными ватными тампонами, чашки Петри с ватными тампонами, смоченными 70 º спиртом (для текущей дезинфекции), бактериологические петли и иглы, пастеровские и градуированные пипетки, пинцет анатомический и скальпель, карандаш (ручка) по стеклу, спички. Все предметы на лабораторном столе расставляют таким образом, чтобы исключить перекрещивание рук в процессе работы и тем самым обеспечить удобство и безопасность манипуляций (рис. 7).

 

Рис.7. Оборудование лабораторного стола

 

В центре стола на расстоянии не менее 30 см от края со стороны оператора размещают спиртовку на устойчивой подставке или горелку. Между работающим и спиртовкой на расстоянии не менее 10 см от края стола должна находиться широкая низкая кювета с дезинфицирующим раствором, над которой проводят все манипуляции с жидким материалом.

При работе с агаровой культурой и постановке некоторых лабораторных тестов вместо кюветы используют многослойные марлевые салфетки, смоченные дезинфицирующим средством.

Около бактериологического стола устанавливают бак с педалью или ведро для сбора незаразных отходов. Все ёмкости, используемые в работе, маркируют.

На специальном столике организуют покраску мазков.

Все виды работ с ПБА проводят по принципу парности (не менее двух человек, один из которых врач или научный сотрудник).

В зависимости от целей и задач исследования врач (научный сотрудник) и лаборант заранее готовят всё необходимое для практических занятий. Для проведения посевов отбирают и тщательно осматривают лабораторную посуду, поскольку незамеченный дефект может стать причиной инфицирования посуды, рук, окружающих предметов. Каждую бактериологическую пробирку осторожно простукивают о твердую поверхность, чтобы исключить невидимые трещины. Пробирки выбраковывают, если в стекле видны трещины, царапины, пузырьки воздуха. Колбы и флаконы также подлежат осмотру. Не используют сосуды со сколом в области горлышка. Тщательно осматривают посуду со средами. Если крышка чашки Петри с плотной средой запотела, её заменяют на новую, взяв со стерильной чашки. Визуально просматривают все среды на наличие посторонней микрофлоры. Пробирки со средами предварительно проверяют на целостность и размещают в штативы. Пробирки должны входить в штативы без усилий. Рекомендуют на дно штатива класть фильтровальную бумагу, что позволит быстро обнаружить нарушение целости пробирки при неосторожной работе. Если пробирки помещают в банку или стакан, то обязательно дно емкости выстилают слоем ваты или марли. Можно взять кружочек поролона. Все объекты, используемые для посева, маркируют: указывают название микроорганизма (материала), номер штамма (анализа), дату (при необходимости – время) проведения работы. В отдельных случаях указывают особенности штамма (антибиотикоустойчивость, вирулентность и др.). Надписи делают таким образом, чтобы они не мешали в работе: на пробирках – в средней части, флаконах и колбах – ниже горлышка, на чашках Петри – на донышке чашки по краю. Надписи должны быть четкими.

Необходимые для работы объекты с незаразным материалом (физиологический раствор, дистиллированная вода, бакпрепараты, реактивы) также маркируют. Если посуда с питательными средами подписана, но ещё не засеяна и остаётся на лабораторном столе на какой-то срок, необходимо положить записку: «Подписано, но не засеяно».

Перед работой поверхность лабораторного стола протирают ватным тампоном, смоченным 70º спиртом. С левой стороны стола, отступив от края, помещают среды и исследуемый материал. При необходимости засеять большое количество объектов на стол не ставят всё сразу.

Техника посева зависит от характера высеваемого материала, консистенции питательной среды и цели исследования. Жидкий материал берут петлей или пипеткой. Пипеткой пользуются в том случае, когда материал засевают в большом количестве или точно отмеряемом объеме.

При посеве жидкого материала в жидкие среды обжигают петлю, большим, указательным и средним пальцами левой руки берут пробирку с исследуемым содержимым ниже горлышка так, чтобы рука была сверху, но не мешала наблюдению за движением петли. Пробирку подносят к пламени спиртовки. Безымянным пальцем и мизинцем правой руки захватывают пробку и, прижимая её к ладони, вынимают. После забора материала горлышко пробирки обжигают, пробкуют и возвращают на прежнее место. Применяя такую же технику, проводят посев в пробирку материала, находящегося на петле. Аналогичным образом засевают флаконы и колбы.

Все манипуляции с заразным материалом проводят у пламени горелки строго над кюветой с дезинфектантом. При посеве в жидкие среды пробирку слегка наклоняют так, чтобы избежать выливания жидкости.

Во время работы бактериологическая петля должна постоянно находиться под визуальным наблюдением, чтобы исключить инфицирование верхней внутренней части пробирки или каких-либо предметов. Желательно оставлять остаток посевного материала прикосновением петли к внутренней стенке пробирки, флакона или колбы ближе к поверхности жидкости. При посеве агаровой культуры в жидкие среды необходимо тщательно растирать комочек посевного материала о внутреннюю стенку пробирки (флакона, колбы), постепенно смывая петлей микробную массу.

В случае попадания материала на внутреннюю верхнюю часть пробирки (флакона, колбы) перед пробкованием необходимо обжечь (прокалить) горлышко посуды, остудить и запробковать. Если пробка при этом обгорит, её следует заменить на новую стерильную. При малейшем подозрении на прикосновение петли с заразным материалом к наружной поверхности посуды её обеззараживают, погружая в дезинфицирующий раствор.

При посеве исследуемого материала на пластинчатый агар чашку Петри держат в левой руке таким образом, что дно её лежит на ладони, а крышка слегка приподнята большим, указательным и средним пальцами (рис. 8). Крышку открывают с таким расчетом, чтобы можно было, не задевая края чашки и внутреннюю поверхность крышки, произвести посев петлей, пипеткой или шпателем. Таким образом, все манипуляции проводят под защитой крышки. Засеянную бактериологической петлей или шпателем чашку сразу переворачивают крышкой вниз и ставят на стол.

 

Рис.8. Посев заразного материала на пластинчатый агар