Исследование материала от больного и почвы и кожсырья на обнаружение возбудителя сибирской язвы

Занятие 4

Исследование содержимого карбункула больного

· Приготовление мазков для окраски по Граму и сибиреязвенной люминесцирующей сывороткой.

· Посев исследуемого материала на 2 чашки МПА с целью получения изолированных колоний.

· Постановка пробы на белых мышах (ввести подкожно двум белым мышам по 0,3 мл содержимого карбункула).

Исследование почвы

· Приготовление взвеси почвы в 0,9 % растворе хлористого натрия (1:10).

· Обработка ½ части полученной взвеси термическим методом:

Прогревание проводят на водяной бане при 65 °С в течение 30 мин. Прогретый материал является исходным для посева на питательные среды и заражения биопробных животных.

· Посев обработанной и необработанной почвы на 2 чашки МПА, 2 чашки 5 % кровяного агара и 2 чашки МПА с 0,01 % ФФФ с целью получения изолированных колоний.

· Постановка биопробы на белых мышах (введение подкожно двум белым мышам по 0,3 мл суспензии термически обработанной почвы).

Занятие 5

Продолжение исследования содержимого карбункула больного: выделение чистой культуры

· Просмотр роста на чашках МПА.

· Отбор подозрительных колоний, проверка их мазком с окраской по Граму, посев на сектора чашки с 5 %-ным кровяным агаром и в МПБ.

· Вскрытие павших биопробных животных, зараженных содержимым карбункула больного.

а) описание патологоанатомической картины, заполнение протокола;

б) посев органов (печень, лимфатический узел, селезенка) на чашку МПА, кровь - в МПБ;

в) приготовление трех мазков: для окраски по Граму, люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой, для обнаружения капсулы по методу Бурри-Гинса.

Продолжение исследования почвы: выделение чистой культуры

· Просмотр роста на чашках с посевами нативного материала.

· Отбор подозрительных колоний под контролем мазка с окраской по Граму.

· Посев колоний на сектора 5 % кровяного агара и в МПБ.

· Вскрытие павших биопробных животных, зараженных суспензией обработанной почвы:

а) описание патологоанатомической картины, заполнение протокола;

б) посев органов (печень, селезенка) и лимфатического узла на чашку с МПА, кровь - в МПБ;

в) приготовление трех мазков для окраски по Граму, люминесцирующей сибиреязвенной сывороткой, для обнаружения капсулы одним из методов.

Примечание: при отсутствии роста культур в посевах из нативного материала провведение выделения чистой культуры от биопробных животных.

Занятие 6.

Идентификация культур, выделенных из карбункула больного и почвы

• Просмотр посевов на секторах 5 % кровяного агара и МПБ. Проверка культуры на чистоту роста в мазках, окрашенных по Граму.
• Проверка выделенных культур на чувствительность к сибиреязвенному бактериофагу.
• Посев каждой культуры в желатин уколом, в 0,3 % ПЖА, на жидкую среду с желтком или на чашку МПА с желтком, на среду Леффлера, на чашку МПА с ФФФ, на МПА, содержащий 10 и 50 ЕД/мл пенициллина, на скошенный МПА.
• Постановка теста «жемчужное ожерелье» (приложение):

а) на плотной питательной среде с пенициллином 0,5 и 0,05 ЕД/мл;

б) методом Груз (приложение).

• Изучение чувствительности культуры, выделенной из карбункула больного, к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков (табл. 20).

Таблица 20

Пограничные критические значения диаметров зон задержки роста

для определения чувствительности к антибиотикам методом диффузии

в агар с использованием дисков

 

Антибиотик	Содержание антибиотиков в диске в мкг	Пограничные значения диаметров зон задержки роста штаммов (мм)
резистентных	промежуточных	чувствительных
Бензилпенициллин		≤ 10	11-16	≥ 17
Гентамицин		≤ 15	-	≥16
Тетрациклин		≤ 16	17-21	≥ 22
Эритромицин		≤ 17	18-21	≥ 22

Примечания:

- посевы культур в желатине - при комнатной температуре;

- за 3 ч до предлагаемой работы отсев изучаемых культур на МПБ и МПБ с пенициллином.