Пипетирование заразного материала

При посеве бактериальной взвеси, титровании сывороток и проведении других исследований пользуются различными пипетками. Работа с пипеткой, как упоминалось выше, создает целый ряд возможностей образования бактериальных аэрозолей. В ряде случаев бактериолог может заразиться в результате ранения острыми краями или концами разбитой инфицированной пипетки. Наибольшую опасность представляет пипетирование ртом. Вместе с тем строгое соблюдение технических приёмов при проведении лабораторных исследований с помощью пипеток предупреждает или сводит до минимума наиболее распространенные аварийные ситуации. Основное правило при пипетировании – пользоваться специальными устройствами даже при работе с незаразным материалом (розлив физиологического раствора, титрование диагностических сывороток и др.).

Для работы с пипетками разработано и введено в практику много специальных приспособлений. Однако наибольше распространение получил резиновый баллон, герметично соединенный с резиновым шлангом, состоящим из трех отрезков (два по 80-90 см и один 30-40 см). Резиновые трубки соединены между собой двумя так называемыми контрольками из пастеровского стекла (4-5 см), рыхло заполненными серой ватой. Они способны задержать исследуемый материал при случайном его засасывании дальше пипетки. В просвет третьего отрезка шланга в 7-15 см от его конца вставлен хорошо опаянный равномерно круглый стеклянный шарик. Его диаметр строго соответствует просвету резиновой трубки. Для удобства работы баллон можно, но необязательно, поместить в деревянную оправу в виде ножной педали. Вместо резиновой груши рекомендуют брать помпу для надувания резиновых изделий.

Перед непосредственной работой смонтированное или не использованное в течение 2-3 дней пипетирующее устройство проверяют на незаразном материале (вода, физиологический раствор).

При пипетировании применяют различную лабораторную посуду, в том числе пипетки: стеклянные градуированные и неградуированные, одноразового использования, пастеровские, изготовленные в лабораторных условиях из стеклянных трубок (дрота) различного диаметра. Для особо точной мерной работы необходимы градуированные пипетки с указанием ГОСТа.

Пипетки должны быть абсолютно чистыми и хорошо обезжиренными. На стекле плохо обезжиренной пипетки при выливании содержимого остается большое количество капель, вследствие чего слитый объем жидкости не будет соответствовать тому количеству, которое указано на шкале деления.

Перед стерилизацией верхнее отверстие пипетки, которое должно быть равномерно оплавлено и не иметь сколов, рыхло заполняют ватой на 10-15 мм. Это необходимо, чтобы задержать заразный материал при случайном засасывании его до конца пипетки. Пипетки упаковывают в специальные металлические пеналы или заворачивают в бумагу индивидуально или по 5-10 штук, делая пометку на пакетах о расположении верхней части пипеток, и стерилизуют.

Необходимую для работы лабораторную посуду тщательно просматривают (см. выше), маркируют и расставляют на столе слева. Слева помещают пипетки, разводящую жидкость, исследуемый материал и др. Правая часть стола остается свободной. Перед работой открывают стерилизатор с дезинфектантом.

Для того чтобы начать пипетирование необходимо нажатием ногой на баллон выпустить из него часть воздуха. При этом одновременно большим и указательным пальцами правой руки сдавливают стенку резинового шланга у бусинки, и в образовавшийся просвет воздух выходит из груши. После этого убирают ногу с резинового баллона. На пипетку надевают конец шланга и располагают ее между средним и безымянным пальцами правой руки. Между большим и указательным пальцами находится шланг с бусинкой, при этом мизинец и безымянный пальцы остаются свободными (рис.9). Левой рукой берут пробирку с жидким содержимым (исследуемый материал, сыворотка и др.), мизинцем и безымянным пальцами правой руки распробковывают её у пламени горелки. Конец пипетки опускают в жидкость и слегка нажимают большим и указательным пальцами на бусинку. В образовавшееся пространство поступает воздух, увлекая за собой материал. После того, как достаточное количество жидкости набрано, шланг над бусиной опускают и она закрывает просвет трубки. Воздух в неё больше не поступает, а жидкость в пипетке удерживается на нужном уровне. Осторожно, не касаясь внутренней стенки пробирки, вынимают пипетку и, после обжигания горлышка пробирки и последующего пробкования, ставят ее в штатив, далее берут ту пробирку, в которую переносят исследуемый материал. Осторожно, не касаясь стенок пробирки, вводят в неё пипетку. Кончик пипетки опускают ниже уровня жидкости в пробирки и начинают осторожно выпускать содержимое пипетки. Можно сливать материал по внутренней стенке сосуда, надавливая ногой на резиновый баллон и одновременно расслабляя резиновый шланг у бусины. В результате давления на баллон воздух из него поступает в шланг и через щель над бусиной в пипетку, выдавливая из неё жидкость. После посева одновременно убирают ногу с баллона и отпускают бусину. Осторожно вынимают пипетку, обжигают, пробкуют пробирку и возвращают её в штатив. После этого конец пипетки опускают в дезинфектант, находящийся в стерилизаторе, выпускают содержимое и набирают в пипетку на 2/3 объёма дезинфицирующего раствора. Затем осторожно двумя руками снимают шланг пипетирующего устройства и легким движением руки затапливают пипетку.

 

Рис.9. Пипетирование

 

Аналогичным образом засевают флаконы и колбы.

При посеве исследуемого материала с помощью пипетки на пластинчатый агар применяют метод раскатывания или рассева шпателем. После внесения материала чашку Петри, не переворачивая, необходимо поставить на салфетку, смоченную дезраствором, и погрузить пипетку в дезинфектант. Только после этого, держа чашку двумя руками, инокулированный материал осторожно раскатывают по поверхности среды до полного впитывания или распределяют его стерильным шпателем. Стерилизацию шпателя можно провести непосредственно перед рассевом. Шпатель помещают в стакан со спиртом и обжигают его перед непосредственной манипуляцией.

Очевидно, что технически сложно проводить посев пипеткой в пробирки, флаконы, колбы, поскольку в правой руке необходимо держать пипетку и пробку и одновременно работать левой.

Работа в паре более безопасна и удобна. Врач, проводящий пипетирование, садится справа, а помощник, распробковывающий пробирки, флаконы, колбы, распределяющий материал по агару, слева.

При работе с пипеткой надо внимательно следить за тем, чтобы заразный конец пипетки не пачкал горлышко посуды, чтобы с пипетки не падали капли заразного материала на стол и окружающие предметы. Необходимо, чтобы правая рука бактериолога всегда находилась в фиксированном неподвижном положении, а конец пипетки – над центром кюветы с дезраствором. Категорически запрещается подносить пипетку с инфицированным материалом к огню или проводить её через пламя горелки.

В процессе пипетирования не допускаются резкие движения, чрезмерное оттягивание стенки шланга над бусиной, сильное нажатие ногой на баллон.

После окончания пипетирования конец шланга, в который вставлялась пипетка, протирают 70 º спиртом, дезинфектантом или обрабатывают обжиганием после опускания в 96 º спирт. Периодически всю систему обеззараживают кипячением.

Для работы ножным пипетирующим устройством необходим определенный навык, который обычно приобретается быстро. Ручное пипетирующее устройство более простое и кажется более удобным. Однако ручной баллон более опасен в работе, чем ножное устройство. Поскольку в нем нет предохранителя (бусины), очень трудно во время различных манипуляций с пипеткой, содержащей заразный материал, удерживать грушу в одной и той же степени сжатия. При малейшем нарушении этого условия заразный материал попадает в баллон или выпрыскивается наружу, образуя бактериальный аэрозоль.