Микробиологический состав амниотической жидкости

В последнее десятилетие из амниотической жидкости выделяют многие микроорганизмы, вызывающие интраамниальное инфици­рование. При этом обнаруживаются ассоциации, представленные аэробами, анаэробами, представителями рода Mycoplasma, Can­dida, группой стрептококков В — в 25%, Gardnerella vaginalis в — 23%, Е. coli — в 14%, реже — представители семейств Clostridi­um, Proteus, Haemophilius influenza.

Из анаэробов в 33% случаев обнаруживаются Bacteroides, Fuso-bacterium — в 18%, Peptostreptococcus — в 9% случаев.

Генитальные микоплазмы также могут быть причиной интра-амниального инфицирования. По литературным данным, у 35% пациентов с клинически выраженным хориоамнионитом опреде­ляется Mycoplasma hominis, по сравнению с 8% в контрольной группе. Часто обнаруживаются ассоциации из нескольких микро­организмов.

Специфическая интраамниальная бактериальная инфекция считается важным фактором в исходе беременности и не зависит от пути проникновения: восходящим путем из шейки и влагалища, при разрыве плодовых оболочек, гематогенным путем через пла­центу или при случайном внесении инфекции во время амниоценте-за. Инфекция несет катастрофические последствия как для плода, так и для матери. В норме околоплодные воды стерильны. Колони­зация условно-патогенной флорой АЖ ведет к возможному разви­тию инфекции при нарушении механизмов противомикробной защиты. В таблице 9.2 представлен бактериальный спектр микро­организмов, выявляемых при интраамниальных инфекциях.

------------------------ Глава 9 ----------------------------

Таблица 9.2. Видовой состав микрофлоры, выделяемой при интраамниальных инфекциях

 

	Грамположительные микроорганизмы	Грамотрицательные микроорганизмы
Кокки	Streptococcus Streptococcus A Streptococcus В Streptococcus viridans (a-haemolyticus) Streptococcus D (Enterococcus) Streptococcus pneumoniae (Diplococcus) Staphylococcus St. aureus St. epidermidis	Gardnerella vaginales Neisseria gonorrhoeae
Палочки	Listeria monocitogenes Lactobacillus species	Enterobacteriaceae Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Enterobacter aerogenes Proteus mirabilis Salmonella typhi Campylobacter species Haemophilus influensae

Грамположительные микроорганизмы

Кокки

Стрептококки имеют шаровидную форму, располагаются группами в виде цепочки. Первоначально они классифицирова­лись по болезням, источниками которых являются (например, Streptococcus scarlatinae). Свое название эти микроорганизмы по­лучили от гемолитической реакции, которую дают при росте на кровяном агаре — Streptococcus haemolyticus. В 1930 году Lancefield разделил стрептококки по группам в зависимости от на­личия групп специфичного полисахарида (карбонгидрата) в кле­точной стенке стрептококка. Эти специфичные антигены могут быть идентифицированы реакцией преципитации и распределяются по группам А, В, С и т. д. Распределение по группам важно как кли-

--------------------------------------- Глава Э -------------------------------------------

нически, так и биологически. Например, стрептококки группы А преимущественно патогенны для человека, В — вызывают масти­ты у коров. У пациенток с интранатальной инфекцией эти микро­организмы высеваются в 30-40% случаев.

Стрептококки группы A (S. pyogenes). Эти микроорганизмы
растут и культивируются на сахарном, кровяном, сывороточном
агаре при t 37 °С и рН 7,0-7,5. Специфические полисахариды и
протеин клеточной стенки определяют иммунологическую специ­
фичность и по этим признакам распределяются в специфические
серотипы. Примерно 98% стрептококков группы А при росте на
кровяном агаре продуцируют Р-гемолизин. Другим фактором,
идентифицирующим стрептококки группы А, является чувстви­
тельность к бацитроцину (95%). Стрептококки группы А, особенно
Streptococcus pyogenes, — наиболее важный возбудитель заболева­
ний для человека. За вирулентность стрептококков группы А отве­
чает тип-специфичный белок М, который первично блокируется
при фагоцитозе.

Инфекции, обусловленные стрептококками группы А, облада­ют широким спектром клинических проявлений — начиная с безвредного носительства возбудителя (которое, правда, чревато заражением окружающих) до неинвазивных инфекций и заканчи­вая тяжелыми инвазивными инфекциями, иногда с летальным ис­ходом.

Некоторые заболевания — в частности, скрытый гнойный фа­рингит (тонзиллит), скарлатину и рожистое воспаление — можно рассматривать как типичные стрептококковые инфекции. В зави­симости от локализации и инвазивности инфекции, вызванные S. pyogenes, классифицируют следующим образом:

— Неинвазивные инфекции слизистых оболочек: тонзиллит, фарингит, воспаление среднего уха, синусит; особая форма фарин­гита — скарлатина (помимо ангины, характерна мелкопятнистая экзантема).

— Неинвазивные инфекции кожи: пиодермия, рожистое воспа­ление. В большинстве случаев А-стрептококки поражают верхние дыхательные пути, причем у детей младшего школьного возраста на передний план выступает экссудативный тонзиллит с высокой температурой тела.

— Инвазивные инфекции: инфекция родильниц и новорожден­ных, хирургические раневые инфекции, менингит, пневмония, перитонит, септический артрит, остеомиелит, целлюлит, некроти-зирующий фасциит.

--------------------------------------- Глава 9 --------------------------------------------- —

При беременности в результате инфицирования этим микро­организмом развиваются:

• хориоамнионит;

• эндометрит;

• пуэрперальный сепсис;

• мастит.

Стрептококки группы А не являются нормальной флорой жен­ского полового тракта. Эти микроорганизмы выделяются в 1,9°/) из амниотической жидкости у женщин при интраамниальной инфек­ции и при преждевременном разрыве плодного пузыря. Клиника неонатальной инфекции варьирует от среднего синусита до септи­цемии.

Возможные причины неонатальной инфекции, обусловленной стрептококками группы А, связаны с вертикальной передачей в ходе родов, при заражении вследствие возможной колонизации ануса, влагалища или шейки матки этим видом стрептококков, в интра- или постнатальном заражении посредством контакта с ин­фицированными или бессимптомными носителями возбудителя (матерью, персоналом больницы, сопровождающими лицами).

При инфицировании данным видом микроорганизмов возмож­но развитие синдрома стрептококкового токсического шока (STSS). Для постановки данного диагноза необходимо выделить возбудитель и подтвердить это определенными клиническими при­знаками.

I. Выделение Streptococcus pyogenes.

A. Из обычно стерильных участков забора проб (кровь, ликвор,
плевральная или перитонеальная жидкость, операционные раны и
т. д.).

B. Из нестерильных участков забора проб (глотка, мокрота, вла­
галище, повреждения кожи и т. д.).

II. Клиническая картина.

A. Гипотензия (систолическое давление < 90 мм рт. ст. у взрос­
лых).

B. Наличие двух или более симптомов из следующих:

• почечная недостаточность: креатинин >177 мкмоль/л; ■ коагулопатия: тромбоциты (<100 г/л);

• печеночная недостаточность;

• респираторный дистресс-синдром взрослых (ARDS);

• экзантема;

• некроз соединительной ткани.

При наличии симптомов IA и НА + В речь идет о достоверном случае синдрома токсического шока, обусловленного стрептокок-

------------------------------- Глава 9 -------------------------------------

ками (STSS). Если есть симптомы IB и ПА + В, тогда речь идет о ве­роятном случае.

Осложнения стрептококковых инфекций. Одним из важнейших отдаленных последствий стрептококкового фарингита, который развивается после нелеченного заболевания, является синдром, обо­значаемый как острая ревматическая лихорадка. Помимо болез­ненного воспалительного отека больших и средних суставов наблюдается кардит с локализацией, в первую очередь в области эндокарда и клапанов сердца. Реже появляются нарушения со сто­роны ЦНС (например, малая хорея),

Материал для исследования берут посредством мазка с помо­щью тампона. Применение соответствующей транспортной среды (например, Port-A-Cul, BD) повышает эффективность анализа, если проходит более 2 часов до обработки в лаборатории. Культиви­рование на кровяном агаре должно происходить как аэробно, так и анаэробно.

Помимо собственно диагноза гемолизирующих стрептококков необходимо проводить серологическое исследование, которое за­ключается в выявлении антител к S.pyogenes. Эти исследования нужны при подозрении на острую ревматическую лихорадку, ма­лую хорею и острый гломерулонефрит, так как при этих заболева­ниях при появлении клинических симптомов сами стрептококки больше не выявляются, однако по титру антител можно сделать за­ключение об их стрептококковой этиологии. Количественное выявление антистрептолизина-0 и антидезоксирибонуклеазы В считается благоприятным сочетанием (благодаря ему частота вы­явления повышается с 80 до 95%).

Если стрептококки группы А выявляются в первый раз, то даже без клинической симптоматики, особенно в акушерстве, требуется пенициллинотерапия не менее чем 10 дней.

Терапия бывает неэффективной вследствие инактивирования этих микроорганизмов Р-лактамазами или вследствие толерантно­сти стрептококков, тогда необходимо продолжить терапию цефа-лоспоринами и макролидами.

Стрептококки группы В — S. agalactiae. До начала 60-х годов XX века стрептококки группы В рассматривались в медицине как безвредные для человека сапрофиты. Но с тех пор они преврати­лись в очень распространенных возбудителей инфекций новорож­денных. Выделяют две различные формы этих инфекций: раннюю форму («раннюю атаку») и заболевание, развивающееся позже («позднюю атаку»), которая начинается приблизительно спустя 1-6 недель после рождения. Более 40% неонатальных инфекций,

Глава 9 -----------------------------------------

развивающихся в первые 3 дня жизни, обусловлены стрептокок­ками группы В. Чаще они поражают недоношенных детей. Тече­ние инфекций бывает тяжелым, нередко ведет к септическому шоку и может обусловливать поздние неврологические нарушения. В США неонатальная смертность, связанная со стрептококками группы В, превышает 10%.

Спектр клинических симптомов, обусловленных стрептококка­ми группы В, в перинатальном периоде очень широк. Он варьирует от септического выкидыша до транзиторной, асимптоматической колонизации. Частое поражение недоношенных детей связано с хо-риоамнионитом, вызванным стрептококками группы В при преж­девременных родах. Чем незрелее плод, тем чаще стрептококковая инфекция протекает в виде сепсиса. У доношенных новорожден­ных, напротив, речь идет скорее о пневмонии, которую часто не удается отличить от синдрома одышки. Нет специфического симп­тома для инфекции, вызванной стрептококками группы В.

В тяжелых случаях заболевание начинается у ребенка сразу по­сле рождения и быстро прогрессирует. Только у доношенных ново­рожденных вначале бывает лихорадка. Как и при любом сепсисе, ранними признаками этой инфекции служат дыхательные расст­ройства (апноэ и диспноэ), изменения со стороны кожных покровов (бледность, мраморная кожа), гипотония, а также тахикардия. При дыхательной недостаточности и септическом шоке требуются, как правило, интубация и искусственная вентиляция легких. Коа-гулопатия потребления с петехиями и кожными кровоизлияниями является поздним симптомом. Летальность при таком течении за­болевания бывает очень высокой.

Из-за гематогенного метастазирования, особенно при несвоевре­менном начале терапии, могут развиться остеомиелит, септичес­кий артрит и менингит.

Поздние формы стрептококковых инфекций («поздняя атака») в возрасте от 1 до 6 недель протекают главным образом в виде ме­нингита.

Стрептококки группы В растут при t 37 °С на кровяном агаре и продуцируют серо-белые мукоидные колонии, которые окружены небольшой зоной р-гемолиза, и по размерам немного более тех, ко­торые образованы стрептококками группы А. Если стрептококки группы В растут в анаэробных условиях, то вырабатывается пиг­мент, окрашивающий среду в оранжево-красный цвет. Многие штаммы этих микроорганизмов нечувствительны к бацитроцину (до 95%).

------------------------------------- — Глава 9 ------------------------------------------

Все штаммы S.agalactiae содержат специфический для группы В полисахаридный антиген. По реакции преципитации все стреп­тококки группы В подразделяют на три типа: I, II, III. Специфиче­ский антиген I типа, в свою очередь, подразделяется на 1а, 1в, 1с. Распространенность всех трех штаммов у взрослых одинаковая. Новорожденные могут инфицироваться при прохождении через ро­довые пути, при этом чаще всего высеваются стрептококки типа 1в. Иногда переносчиком инфекции является медицинский персонал, причем если заболевание наступает сразу после родов, инфицирова­ние произошло в момент прохождения через родовые пути матери; если заболевание наступает спустя некоторое время, то источник инфекции — медицинский персонал или окружающая среда.

Чаще стрептококки группы В высеваются у молодых, прежде здоровых женщин и становятся причиной интраамниальнои инфекции (при разрыве плодного пузыря или без его разрыва), по­слеродового эндометрита, пиелонефрита, а также причиной инфек­ционной заболеваемости новорожденных.

Клиническими проявлениями инфекции являются лихорадка, отсутствие аппетита, беспокойство и гиперестезии. Впоследствии наблюдается картина менингита с напряженным родничком, лихо­радкой, летаргией (вплоть до комы) и приступами тонико-клоничес-ких судорог. Течение заболевания бывает не таким молниеносным, как при раннем сепсисе. Летальность из-за воспалительного отека головного мозга высока: она составляет по меньшей мере 25%.

После периода новорожденности стрептококки группы В также играют определенную роль в заболеваемости детей. Они вызывают эндокардит, перикардит, остеомиелит, артрит, пневмонию воспа­ление среднего уха, перитонит и инфекции мочевыводящих путей. Флегмона также бывает обусловлена стрептококками этой группы. Профилактическое применение антибиотиков значительно снижа­ет случаи смерти и заболеваемости новорожденных, вызванных этими микроорганизмами.

Чувствительность стрептококков группы В к антибиотикам (в частности, к пенициллину) ниже, чем чувствительность стрепто­кокков группы А. Для клинического применения используют большинство в-лактамных антибиотиков (амоксиклав, аугментин, флемоклав), а также эритромицин или ванкомицин в достаточных дозах. К аминогликозидам стрептококки группы В резистентны. Несмотря на это при определенных условиях наблюдается синер­гизм — например, между амоксициллином и гентамицином.

Альфа-гемолитические стрептококки, а-гемолитические стреп­тококки (Streptococcus viridans) гетерогенная группа неклассифи-

--------------------------------------- Глава 9 -----------------------------------------------

цированных микроорганизмов, которые образуют колонии, окруженные зоной гемолиза с негемолизированными эритроцита­ми во внутренней зоне и полным гемолизом во внешней зоне. Этот а-гемолиз (позеленение) кровяного aгapa традиционно описывали как формацию распада продуктов гемоглобина. Название Viridans произошло от латинского «viridis» — зеленый цвет.

Штаммы группы зеленящего стрептококка различают по фено-типическим реакциям (ферментации сахара, утилизации аргинина и т. д.). Зеленящие стрептококки обладают низкой степенью пато­генносте по сравнению с пневмококками, которые также относятся к а-гемолитическим. Наиболее значимые патогенные штаммы вы­деляют из культуры крови, они определяются при инфекционном эндокардите.

Эти микроорганизмы выделяют из гениталий у 50% асимптом-ных женщин и в 15% случаев могут быть причиной интраамниаль-ной инфекции. Казуистически эти штаммы обнаруживают при неонатальном сепсисе, менингите, эндометрите и хориоамнионите.

Большинство штаммов группы а-гемолитических стрептокок­ков чувствительны к пенициллину, однако некоторые из них рези­стентны к нему так же, как и группа D энтерококков. Поэтому целесообразно комбинировать антибиотики (пенициллин или ам­пициллин + аминогликозиды).

Стрептококки группы D. Группа микроорганизмов, которые мо­гут вызывать воспалительные реакции в организме человека. Это а-, в- или негемолитические штаммы, которые подразделяются на 2 подгруппы: энтерококки и не энтерококки. Энтерококки включа­ют Enterococcus faecalis — наиболее часто встречающийся патоген. Е. faecalis является исключительным факультативным аэробом. Он растет в среде с содержанием 0,05% содового азида, относитель­но устойчив к нагреванию, размножается в среде, содержащей 6,5% раствора хлорида натрия, что часто используется в лаборато­риях, чтобы отделить его от других стрептококков.

Эти микроорганизмы хорошо известны как этиологические агенты эндокардитов и инфекций мочевыводящих путей. Степень их вирулентности в отношении генитального тракта — предмет для дискуссий ученых. Стрептококки группы D относительно часто выделяются из культуры крови акушерских и гинекологических пациентов. В 4-20% случаев обнаруживаются при интраамниаль-ной инфекции и становятся причиной неонатального сепсиса.

Стрептококки группы D чувствительны к пенициллину или ампициллину в сочетании с аминогликозидами. Они не чувстви­тельны к цефалоспоринам ни отдельно, ни в сочетании с аминогли­козидами.

--------------------------------------- Глава 9 -------------------------------------------

Пневмококки

Streptococcus pneumoniae, Diplococcus pneumoniae — инкапсу­лированный, грамположительный ланцето-округлый диплококк. Пневмококки могут располагаться короткой цепочкой или даже отдельно, когда выделяются из гноя, серозной жидкости, тканей человека. Эти микроорганизмы нуждаются в сложной среде роста, их энергетические потребности покрываются за счет молочной кислоты, обеспечиваемой бактериями, которые ее вырабатывают. Хотя пневмококки продуцируют а-гемолизин, он отличен от других а-гемолитических стрептококков по их способности мета-болизировать инсулин. Мясной бульон, содержащий 10% или обо­гащенный кровью с рН 7,4-7,8, — наиболее применяемая среда для роста пневмококков.

Определено более 80 серологических типов пневмококков. Они иммунологически разделены антигенными характеристиками по­лисахаридов их капсул. Эти капсулярные антигены играют важ­ную роль в патогенности этих микроорганизмов. У пневмококков III типа высока частота смертельных исходов у человека.

Первичная пневмококковая инфекция в виде пневмонии, сину­сита, отита среднего уха часто встречаются как у детей, так и у взрослых. Возможно развитие септицемии, эмпиемии, менингита, эндокардита, абсцесса мозга и перитонита. Dutt и Gibbs в 1983 году описали случаи острой интраамниальной инфекции, причиной ко­торых были St.pneumoniae. Пневмококки не часто выделяются из амниотической жидкости, но могут быть фактором серьезных забо­леваний новорожденных. Описаны случаи пневмококкового сепси­са новорожденных и синдром поздней атаки, которые вызываются этими микроорганизмами.

Пенициллин — антибиотик выбора при лечении инфекций, вы­званных данным микроорганизмом. Хотя устойчивость к нему не велика — 2%, она возможна у пациентов с пневмококковой инфек­цией.

Стафилококки

Стафилококки — грамположительные кокки семейства Micro-соссасеае. Различают 3 вида стафилококков: St. aureus, St. epider-midis и St. saprophyticus.

St. aureus. Наиболее часто встречающиеся из всех неспорообра-зующих бактерий, которые растут на твердом кровяном агаре ха­рактерными клетками — кластерами, с пигментацией колоний

Глава 9 ------ —-------------------

желто-золотистого цвета. Виды пигментации различны и не могут быть использованы для дифференцированной диагностики St. aureus от St. epidermidis или St. saprophyticus. Коагулазоположи-тельные стафилококки классифицированы как St. aureus. Стафи­лококковые инфекции сопровождаются образованием гноя, формированием абсцессов. Воспалиться может любой участок те­ла, но наиболее часто поражаются поверхностные участки, и при иммунодефицитных состояниях процесс становится генерализо­ванным.

St. aureus ассоциируется с инфекцией в родах, в послеродовом периоде, инфекцией новорожденных. Этот микроорганизм может быть диагностирован при хориоамнионите, тканевой инфекции промежности, абсцессе молочной железы, бактериемии. St. aureus выделяется в 13-16% случаев интраамниальной инфекции. Золо­тисто-стафилококковая бактериемия и сепсис обнаруживаются у детей, рожденных от матерей с подтвержденной стафилококковой интраамниальной инфекцией.

В 7-17% случаев St. aureus обнаруживается в вагинальном сек­рете асимптомных женщин. 5% приходится на долю неонатального сепсиса, причиной которого является St. aureus. Культуру St. aureus можно выделить из крови новорожденного сразу после родов.

Большинство штаммов St. aureus (60-90%) продуцирует плаз-мидкодированную энзимпенициллиназу, которая образует бета-лактамные цепи пенициллиновых ядер, что ведет к устойчивости к этому препарату. Таким образом, препаратом выбора в отношении к St. aureus является пеницилинназ-устойчивые пенициллины, включая аугментин, зинацеф, диклоксацин, клоксациллин, мети-циллин, оксациллин. Возможно применение цефалоспоринов.

St. epidermidis. При культивировании на кровяном агаре они образуют белые пигментированные колонии. Эти микроорганизмы коагулазонеактивные, растут в анаэробных условиях, нежароус­тойчивые.

St. epidermidis в норме обитают на коже и часто обнаруживают­ся во влагалищных выделениях асимптомных женщин. Этот мик­роорганизм имеет низкую вирулентность, из амниотической жидкости выделяется лишь в случае интраамниальной инфекции. Казуистически считается патогенным, если его рост в средах про­должается спустя 72 часа после посева или когда высевается из 2-3 мест или из одного места неоднократно.

Инфекции St. epidermidis обычно отвечают тем же режимам на­значения антибиотиков, что и St. aureus. Пенициллин-устойчивые штаммы встречаются довольно редко и могут быть пролечены ван-комицином или гентамицином.

---------------------------- —------- Глава 9 -------------------------------------------

Палочки

Listeria monocytogenes — маленькая, макроаэрофильная грам-позитивная неспорообразующая бацилла, которая культивируется при t 20-25 °С, обладает подвижностью, тогда как при t 37 °С этого не наблюдается. Ошибочно эти микроорганизмы могут быть вос­приняты как грамположительные кокки, поскольку являются короткими, и выглядят как «палисадные разрастания». Хорошо растут на костном телурите, овечьем кровяном агаре при t 37 С.

Listeria monocytogenes — каталазпозитивны, что является их отличительным диагностическим признаком от а-стрептококков.

Листериоз у матерей вызывает аборты, внутриутробное пораже­ние плода, неиммунную водянку плода, преждевременные роды, преждевременное отхождение околоплодных вод, врожденный сепсис. Многочисленные исследования показывают значимость листериоза в заболеваемости и смертности плода/новорожденного.

Материнский листериоз может протекать бессимптомно или иметь слабо выраженные грипподобные симптомы.

Неонатальная инфекция может быть ранней и поздней. Ранняя инфекция развивается в первые 5 дней жизни и трактуется как врожденный сепсис. У этих новорожденных возможны следующие проявления: синдром дыхательных расстройств, гипотермия, пневмония, диффузная сыпь, гнойные конъюнктивиты. Уровень смертности составляет 20-50%. Поздний листериоз может встре­чаться у здоровых детей, рожденных в срок. Гнойные менингиты развиваются в первые 3 дня после родов. Listeria monocytogenes и E.coli в 75% случаях — главные причины неонатальных гнойных менингитов. Комбинации аминогликозидов и пенициллина — оп­тимальны в лечении листериоза.

Lactobacillus species. Лактобациллы — в основном грамполо­жительные, каталазнегативные, неспорообразующие, микроаэро-фильные микроорганизмы. Они растут медленно на кровяном агаре, их рост ускоряется в присутствии 5-10% углекислого газа в воздухе.

Лактобациллы — нормальная эндогенная микрофлора женско­го генитального тракта. Они выявляются в 88% влагалищных культур у 100% асимптомных женщин. Микроорганизмы не виру­лентны, хотя отмечены случаи эндокардитов, а также отофаринги-альные инфекции.

Выделяются из амниотической жидкости в 3-30% случаях ин-траамниальной инфекции.

ззо

Глава 9 -------------------------------------- —

Если обнаруживаются в биологических материалах, которые в норме стерильны, назначается лечение антибиотиками: пеницил­лин, ампициллин, цефалоспорины, флемоклав.