Подсчет форменных элементов крови

 

Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывают в 1 мм³ крови, число кровяных пластинок — на тысячу эритроцитов и методом Годри в 1 мм³.

Кровь для подсчета берут как из мелких артерий, так и из вены ушной раковины. Произведенное Д. Ф. Даниловым сравнение количественных «показателей крови, взятой из артерии и вены у сельскохозяйственных животных, показало, что между ними нет существенной количественной разницы.

В капле крови форменные элементы тесно прилегают друг к другу, делая не-«возможным их подсчет. Поэтому предва­рительно их необходимо разъединить, уве­личить промежутки между ними настоль­ко, чтобы форменные элементы не налега­ли один на другой. С этой целью исполь­зуются изотопические растворы, в которых эти элементы сохраняют свою форму, из­мерительные трубки, позволяющие отме­ривать небольшое, но точное количество крови и растворителя. Разведенную кровь помещают затем в специальные счетные камеры, в которых и производится под­счет.

Смесители, или меланжеры, представ­ляют собой капиллярные трубочки около 10 см длиной, с шаровидным или груше-дидным расширением, внутри которого на­ходится стеклянный шарик, способствую­щий при встряхивании лучшему смешиванию. На капиллярную часть смесителя нанесены деления, обозначенные цифрами 0,5 и 1,0, а за расширением на трубочке — 101 или 11. Смеситель с меткой 101 предназначается для подсчета эритроцитов, а с меткой 11 — для лейко­цитов. Емкость расширения эритроцитарных смесителей, таким образом, в 10 раз больше, чем у смесителей лейкоцитарных. На смеситель надевают резиновую трубочку с костяным или стеклянным мундштуком.

Разведение для подсчета эритроцитов готовят из расчета 1: 100 или 1: 200, а для лейкоцитов — 1: 10 или 1: 20.

При подсчете эритроцитов используют 0,9% раствор поваренной соли, 3% раствор хлористого натрия (Фрейфельд) или жидкость Гайема (сулемы 0,1; хлористого натрия 1,0; сернокислого натрия 5,0 и дистиллированой воды 500,0), а также жидкость ИПК (хлористого натрия 7,0; хлористого калия 0,2; лимоннокислого натрия 5,0; сернокислой магнезии 0,04 и дистиллированной воды 100,0).

Для разведения лейкоцитов употребляют 1 % раствор уксусной кислоты с примесью 3—4 капель 1% раствора генцианвиолета.

Кровь и растворяющую жидкость набирают точно до соответствующей отметки. При наполнении смесителя Необходимо следить за тем, чтобы во время насасывания в кровь или разводящую жидкость не попадали пузырьки воздуха.

После наполнения смесителя концы его зажимают между большим, ауказательным пальцами и плавными движениями кисти руки смешивают жровь с жидкостью. Равномерному перемешиванию способствует перекатывание стеклянной бусинки в расширении смесителя. Жидкость перемеши­вают повторно перед заряжением камеры до получения равномерной гомо­генной мутной взвеси.

 

Рис. 172. Смесители: 1—для эритроцитов; 2—для лейкоцитов.

 

 

Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло с укреплен­ными на нем тремя стеклянными пластинками (имеются камеры из цельного стекла, без приклеенных частей). Средняя пластинка разделена желобком на две половины, на каждой из которых выгравировано по сетке.

Средняя пластинка ниже боковых на ОД мм. Если на боковые пла­стинки положить покровное стекло, то между ним и средней пластин­кой образуется щель, равная 0,1 мм. В эту щель и вводят взвесь для под­счета форменных элементов крови.

Чтобы высота камеры не изменялась, покровное стекло или притирается, или же прижимается при помощи специальных клемм. Критерием плотного прилегания покровного стекла к боковым планкам служит появление радуж­ных, так называемых ньютоновских колец.

Кровь, тщательно перемешанную в смесителе, после удаления первых 3—4 капель на фильтровальную бумагу вносят под покровное стекло камеры в виде маленькой капли. В силу ка­пиллярности капля втягивается в просвет между пластинками. Величина капли должна быть такой, чтобы она покрывала всю среднюю пластинку, но не выступала за боковые пластин­ки и на покровное стекло.

 

 

 

 

Рис. 173. Счетные камеры: А—Горясва; Б —Тома-Цейсса; В —Бюркера.

 

Заряженную камеру помещают под микроскоп и устанавливают так, чтобы были отчетливо видны деления сетки и форменные элементы, лежащие на ней. После того как форменные элементы осядут и станут отчетливо выде­ляться на фоне сотки, приступают к подсчету.

Сотки в счетных камерах различных авторов неодинаковы как по рисунку, так и по площади.

В 1896 г. Предтеченский предложил оригинальную сетку общей площадью 4 мм². Она разбита на 100 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 маленьких квадратиков. 50 — на прямоугольники и 25 оставлены чистыми. Сторона маленького квадрата равна 1/20 мм, а площадь 1/400 мм².

Преимуществом сетки Предтеченского, занимающей большую площадь (4 мм²), является то, что большие квадраты, разделенные на малые, четко отграничены один от другого, что при работе позволяет сосредоточиться только на одном большом квадрате.

Недостаток этой сетки заключается в том, что лейкоциты приходится подсчитывать как в чистых квадратах, так и в квадратах, разделенных на малые квадратики и прямоугольники.

Принцип построения сетки Предтеченского в 1910 г. был использован Горловым, который увеличил размер ее до 9 мм².

Сетка Горяева состоит из 225 больших квадратов, из которых 25 разделены на 16 малых квадратиков, 100 — на прямоугольники и 100 остаются чистыми.

Каждая из 15 вертикальных и горизонтальных полос сетки Горяев» имеет ширину, равную ¹/₂₀ мм, причем каждая третья полоса разделена, в свою очередь, на четыре узкие полоски шириной ¹/₂₀ мм, пересечением которых образуются маленькие квадратики площадью 1/400 мм². Они соста­вляют 25 групп из 16 квадратиков.

Для подсчета эритроцитов используются большие квадраты, разделен­ные на 16 маленьких. Лейкоциты подсчитывают в больших чистых квадратах, которые полностью помещаются в поле зрения микроскопа.

 

 

Рис. 174. Сетка Предтеченского.

 

 

Рис. 175. Сетка Горяева.

 

При обилии лейкоцитов Горяев рекомендует считать их в группах из трех квадратов со стороной в ¹/₂₅ мм и даже по отдельным квадратам; в последнем случае выгоднее пользоваться теми же квадратами, что и для счета эритроцитов.

Положительными сторонами сетки Горяева являются отчетливость рисунка, а отсюда легкость и удобство ориентировки при подсчете, резкая отграниченность больших квадратов, разделенных на 16 маленьких, и большая площадь сетки по сравнению с сеткой Предтеченского.

За рубежом наибольшее распространение имеют сетки Тома, Бюркера и Тюрка. Первые две — оригинальные, а последняя представляет сочетание сеток Тома и Бюркера, наложенных одна на другую.

Сетка Тома имеет вид большого квадрата, разделенного тройными линиями на 16 средних квадратов. Каждый из 16 квадратов, в свою очередь, простыми линиями делится на 16 маленьких квадратиков. Всего таких малень­ких квадратиков в сетке 400. Вся сотка по площади равна 1 мм². Недостатком сетки следует считать то, что квадраты отграничены только тройными линиями, что не дает возможности сосредоточиться на одном большом квадрате, и затруд­няет подсчет. Кроме того, мала площадь этой сетки.

 

Рис. 176. Сетка Тома.

 

 

 

Рис. 177. Сетка Бюркера.

 

 

Сетка Бюркера, площадью 9 мм², в этом отношении стоит не­сколько особняком. Малые квадраты не собраны в группы, а распределены равномерно. Сетка состоит из 144 больших квадратов, по 12 в каждом ряду. Между большими квадратами располагаются 169 маленьких квадратиков, по 13 в каждом ряду. Высота камеры равна ¹/₁₀ мм, площадь большого квадрата ¹/₂₅ мм² и малого ¹/₁₀₀ мм². Сетка Бюркера удобна для подсчета лейкоцитов и менее пригодна для подсчета эритроцитов.

Сетка Тюрка состоит из среднего квадрата—сетки Тома и восьми боковых квадратов — сетки Бюркера.

 

Техника подсчета эритроцитов

 

Если кровь хорошо размешана в смесителе и правильно заряжена камера, то эритроциты распределяются по сетке равномерно. Если эритроциты лежат неравномерно — в одних квадратах их больше, а в других меньше, то погрешности заключаются или в технике смешивания, или в заряжении камеры. Стекание жидкости на одну сторону возможно при неровной поверх­ности стола, который поэтому рекомендуется установить по ватер­пасу.

При ориентировочном подсчете эритроцитов можно ограничиться опре­делением количества их в пяти больших квадратах; для получения более точных данных необходимо подсчитать 10 и даже больше больших квад­ратов.

Чтобы избежать повторного подсчета форменных элементов, находя­щихся в одной и той же клетке, придерживаются определенной методики подсчета. Его начинают обыкновенно с маленького квадрата, расположенного в левом углу большого квадрата, затем переходят ко второму, третьему и чет­вертому того же ряда. Сосчитав клетки первого ряда, переходят на второй и считают в обратном порядке. Меняя с каждым рядом направление, заканчи­вают подсчет в левом нижнем квадратике первого большого квадрата и пере­ходят на второй большой квадрат.

Количество эритроцитов в большом квадрате определяют двумя методами. Один из них, более точный, предусматривает подсчет всех эритроцитов, лежа­щих внутри квадрата и на его левой и верхней сторонах. Клетки, лежащие на правой и нижней сторонах, относятся к соседним квадратам. В крайних, правых квадратах, как верхних, так и нижних, клетки, лежащие на правой и нижней сторонах, подсчитываются с последними квадратиками.

Этот метод предусматривает подсчет только тех клеток, которые лежат на линиях и прилегают к ним с внутренней стороны, без учета клеток, нахо­дящихся вне квадрата.

Второй метод отличается от первого только тем, что учитываются все клетки, прилегающие снаружи к отграничивающим линиям.

В этом случае подсчет ведется без учета правых и нижних отграничиваю­щих линий.

Зная площадь, на которой произведен подсчет эритроцитов, высоту камеры и степень разведения, можно легко определить количество их в 1 мм³.

При вычислении количества эритроцитов в 1 мм³ используют следующую формулу: