Сетка для гематологического профиля лошади

(по Домрачеву)

 

 

СТЕРНАЛЬНЫЙ ПРОКОЛ И ЕГО КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

 

Для изучения патогенеза анемических процессов и оценки состояния организма при заболеваниях в ряде случаев, помимо циркулирующей крови, приходится исследовать кроветворные органы.

У каждого животного кроветворные органы имеют индивидуальные осо­бенности, которые проявляются в различной интенсивности кроветворения, скорости выработки форменных элементов и способности выносить длитель­ную и напряженную работу, не выходя из строя от истощения.

Кровотворные органы по интенсивности их функции могут быть разбиты на три группы. К первой группе относятся мощные кровотворные органы. Циркулирующая кровь у таких животных изменяется очень мало, так как по­теря клеток на периферии быстро компенсируется полноценным пополнением.

Кровотворные органы второй группы, или средние по силе, справляются с задачей компенсации только в течение определенного времени, после чего масса кровотворной ткани увеличивается за счет развития дополнительных очагов ее.

Функционально недостаточные кровотворные органы могут справляться со своей задачей лишь в норме. Под действием патогенного начала дефект сказывается очень скоро, так как добавочные очаги кроветворения форми­руются слабо или не развиваются совершенно. Вот почему может быть неоди­наковой реакция на одно и то же раздражение у различных животных.

Наиболее полное представление о функциональной способности крове­творных органов дает непосредственное изучение костного мозга и лимфати­ческой системы.

Получение костного мозга путем резекции кусочков ребра (М. В. Афа­насьев, Э. Э. Мазинг и др.), а также трепанации отдельных костей (Ткаченко, 1936 г.) не нашли применения в клинической практике; они сложны по тех­нике выполнения и дают представление только о статике процесса.

Изучение динамики функции кровотворения стало возможным лишь после того, как М. И. Аринкин (1927 г.) предложил производить иглой Вира стернальную пункцию у человека. Впоследствии эта методика послужила стимулом для разработки приемов стернальной пункции у сельскохозяйст­венных животных.

Для прокола грудины А. М. Колесов использовал троакар (после удале ния стилета костный мозг насасывается шприцем через инъекционную иглу), А. В. Васильев — специально приспособленную для этой цели иглу Вира, а другие исследователи —- инъекционные иглы с теми или иными кон­структивными усовершенствованиями.

В последние годы стернальная пункция получила значительное распро­странение, и исследование костного мозга стало неотъемлемой частью изуче­ния патогенеза анемических процессов у различных животных и оценки специфической функции кровотворных органов.

Стернальная пункция производится без анестезии у стоящих лошадей, а у крупного рогатого скота, коз, овец и свиней в их боковом или спинном положении. При проколе грудины требуется соответствующая фиксация животных. Шерсть в области грудины выстригают или выбривают безопасной бритвой. Грязную кожу моют водой с мылом, а чистую протирают спиртом и затем смазывают йодной настойкой.

Место пункции определяют у лошади по гребню грудины, синхондрозным утолщениям и ребрам. Там, где расходятся ребра, выступает мечевидный отросток, а кпереди от него начинается тело грудины. Прокол делают кпереди от мечевидного отростка и в сторону от гребня грудины.

Первый, второй и третий сегменты грудины, считая от мечевидного отростка, прокалываются сравнительно легко. Передние сегменты для иглы трудно проходимы.

Прокол кожи, мышц и надкостницы вызывает незначительное беспокой­ство животного. Костная пластинка преодолевается с некоторым усилием, а затем, когда игла проникает в губчатую ткань, напряжение уменьшается, но нет ощущения полости. У мелких животных совершенно ясно ощущается момент прокалывания грудины и проникновения в губчатую ткань. Следует отметить, что пункция грудины у старых животных совершается с трудом, требуя известного усилия, а у молодняка же, напротив, очень легко.

Когда игла входит в спонгиозную часть, из нее вынимают мандреп и шприцем насасывают необходимое количество костного мозга. Затем одним приемом извлекают иглу вместе со шприцем и смазывают кожу настойкой йода. Пункция грудины — операция строго асептичная.

Большинство исследователей дозирует количество извлекаемого пунк­тата шприцем, набирая 0,3—0,5 мл костного мозга. Для получения опреде­ленного количества пунктата С. И. Смирнов сконструировал специальное приспособление — укороченную до 11 см пипетку от эритроседиометра Пан-ченко, позволяющее набирать 0,1 мл костного мозга. Для предотвращения проникновения воздуха в капилляр при насасывании пупктата, на конец пипетки, смазанной вазелином, надевают резиновую муфту, которая при соединении с канюлей плотно надвигается на нее.

Костномозговой пунктат — густая, вязкая, красноватая жидкость, is которой находится не чистый костный мозг, а масса его, частично смешанная с форменными элементами крови. Первые 2—3 капли пунктата могут быть употреблены для бактериологического посева на питательные среды; из осталь­ной части готовят мазки.

Чтобы пунктат не свернулся, иглу и шприц предварительно увлажняют 5,8% раствором лимоннокислого натрия. Массу выдувают на небольшое часовое стекло, покрытое парафином.

Из пунктата в первую очередь готовят мазки для получения эритро и миелограммы и для суправитального окрашивания эритроцитов с целью подсчета гранулофилоцитов. После этого заполняют смесители.

Гемоглобин и эритроциты костномозгового пунктата определяются так же, как и в циркулирующей крови. Для изготовления миелограмм и эритро бластограмм служат мазки на подогретых предметных стеклах. Оптимальной гемпературой для костномозгового пунктата (при которой он лучше всего со­храняется) крупного рогатого скота является 18—21° (И. В. Анисимов), овен 22—24° (А. Р. Зельцер), свиней 28—32° (С. И. Смирнов) и для лошадей 22—26° (И. Г. Гринец).

Мазки костномозгового пунктата фиксируют и окрашивают по Романов­скому — Гимза. Нефиксированные мазки можно окрашивать по Паппен-гейму.

Для суправитального окрашивания вначале наносят раствор бриллиан-крезильблау на стекло, а затем последнее подогревают и делают мазок; пре­парат помещают во влажную камеру и после этого докрашивают по Романов­скому — Гимза или Лейшману.

 

Исследование стернального пунктата

 

Костный мозг — важнейший орган кроветворения. Гемопоэз происходит непрерывно в течение всей жизни, так как кровяные клетки, поступающие в циркулирующую кровь, сравнительно быстро заканчивают свое существо­вание. Кроветворение в миелоидной ткани выражается в: 1) эритропоэзс, 2) лейкопоэзе и 3) образовании тромбоцитов.

В стернальном пунктате содержатся клетки различных возрастных групп — от малодифференцированной, материнской клетки до зрелой, гото­вой продукции. Клетки костного мозга различных видов животных имеют незначительные особенности в величине, форме гранул и окраске ядра, про топлазмы, но основные черты их совершенно одинаковы.

Эритропоэз. Материнской клеткой нормального эритроцита является ядерный эритроцит, который в процессе созревания теряет ядро и постепенно, через переходные ступени, трансформируется в нормоцит. Переход из одной формы в другую не следует понимать как непосредственное превращение одной и той же клетки, а нужно рассматривать в смысле изменения структуры и характера каждого нового поколения клеток, возникающих при делении более молодых форм. С каждым делением получаются дочерние клетки мень­шего размера, с большим количеством протоплазмы и гемоглобина. Ядро, напротив, уменьшается, теряет способность делиться, становится пикнотич-ным и в дальнейшем исчезает.

П р о э р и т р о б л а с т — самая молодая клетка эритробластического ряда, размером от 17 до 20 [л, неправильно!! округлой формы, с большим круглым ядром, расположенным чаще в центре.

Ядро проэритробласта рыхлое, нежного строения с неясно дифференци­рованным рисунком хроматина. Хроматин имеет форму угловатых глыбок приблизительно одинаковой величины, образующих грубую шагреневость. Во всех ядрах насчитывается от двух до четырех различной величины и формы нуклеолей, окрашивающихся в серовато-синий цвет со слабо-фиолетовым оттенком. По мере созревания проэритробластов нуклеоли уменьшаются и исчезают.

Протоплазма проэритробласта интенсивно синяя, базофильная, иногда с зеленоватым оттенком. Перинуклеарная зона отсутствует. В местах с более широким поясом, в средней части протоплазмы, заметны светлые бледноокра-шеяные участки.

Эритробласт, в отличие от проэритробласта, несколько меньшей величины (12—16 р); ядро более компактное с грубой зернистостью хрома­тина и без нуклеолой.

У отдельных клеток намечается радиальное расположение базихроматина и появляются темные пятна. Встречаются фигуры митоза с зубчатыми и звездчатыми краями ядра.

Протоплазма базофильная. У клеток с относительно зрелым ядром прото­плазма полихроматофильная, серовато-синего цвета, без зеленого оттенка.

По степени зрелости ядра и протоплазмы различают эрнтробласты базофильные и полихроматофильные.

Базофильный эритробласт имеет базофильную протоплазму. В отличие от проэритробласта, в ядре с более грубой структурой нет нуклеолей. В некоторых клетках отмечается радиальное расположение базиоксихро-матина.

Полихроматофильный эритробласт по морфологическим особенностям занимает среднее положение между эритробластом и нормобластом. Прото­плазма его полихроматофильная, ядро более компактное, с лучеобразным (спицеобразным) расположением хроматина. В этих клетках заметна слабо выраженная перинуклеарная зона.

Нормобласт, размером от 7 до 12 ц, представляет собой круглую клетку. Ядро сравнительно большое, компактное, темноокрашивающееся и без иуклеолей, располагается в центре, реже эксцентрично. Хроматин неравномерно рассеян в виде компактных глыбок с выступающими просве­тами и трещинами. Рисунок ядра напоминает спицы в колесе. У созреваю­щих нормобластов ядро небольшое, компактное, без рисунка; в отдельных клетках оно может распадаться на отдельные зерна.

У молодых нормобластов протоплазма полихроматофильная, а у зрелых ортохроматическая. Чем слабее базофилия, тем больше эритроцит насыщен гемоглобином.

Наряду с типичными клетками существует много переходных, позволяю­щих с несомненностью установить родственную связь проэритробласта с нормобластом. Потерявший ядро нормобласт называется нормоцитом — нор­мальным зрелым эритроцитом, циркулирующим в периферической крови млекопитающих.

Процесс утраты ядра нормобластом трактуется различно. Одни считают, что оно подвергается внутриклеточному растворению: хроматин выщелачи­вается, масса ядра становится все меньше и меньше и, наконец, исчезает совершенно. Другие предполагают, что ядро вначале распадается, а затем отдельные части его рассасываются. Наконец, допускается, что ядро исчезает внезапно — выталкивается или выскальзывает из клетки.

Зрелые эритроциты не вполне выясненным путем выходят из костного мозга в циркулирующую кровь.

Гранулоцитопоэз. Родоначальной клеткой зернистых форм лейкоцитов является миелобласт. Это крупная клетка, размером от 17 до 30 р.

Ядро миелобласта занимает большую часть клетки, имеет округ­лую форму и находится в центре. Структура его нежная, расположение хро­матина равномерное, в виде мелкой шагреневости. При окраске ядро оказы­вается светлым. В нем обнаруживают 2—4 нуклеоли (реже больше — в виде просветлений с каемкой на периферии). Протоплазма слабо базофильная, нежная, без зернистости, окружает ядро узкой полоской, обладает светлой зоной и окрашивается в бледно-голубой цвет. У более зрелых клеток прото­плазма приобретает кружевной вид, окрашена светлее, с чуть заметным розо­ватым оттенком.

Промиелоцит (следующая стадия развития) по величине несколько уступает миелобласту (11—25 ft). Ядро его круглое или бобовидное, с мел­кой нежной шагреневостью; нуклеоли выражены слабо; ядро созревающих клеток окрашивается темнее; встречаются формы деления в различных ста­диях. Протоплазма базофильная, но по море созревания клетки становится светлее и приобретает серовато-голубоватый, фиолетовый и другие оттенки; оксидазные зерна придают ей розоватый оттенок. В более зрелых клетках, наряду с азурофильной зернистостью, появляется и специфическая грану­ляция.

В дальнейшем зернышки протоплазмы мельчают, утрачивают вишнево-красный цвет, ядро уплотняется, протоплазма теряет базофилию — обра­зуется зрелый миелоцит.

Миелоциты (размер 10—20 jt) имеют круглое или бобовидное ядро с хорошо выраженным рисунком хроматина. Последний дифференци­руется на окси- и базисубстанцию в виде равномерных мелких бледноокра-шенных комочков. Нуклеолей в ядре нет. Протоплазма бледно-голубая и содержит большое количество нежных нейтрофильных гранул, среди кото­рых встречается грубая азурофильная зернистость.

Процесс созревания миелоцита касается главным образом его ядра, которое становится компактнее и приобретает подково- или почкообраз-ную форму.

Из миелобластов, подобно нейтрофильным лейкоцитам, развиваются базофилы и эозинофилы, и разнятся они только наличием специфи­ческой зернистости: розовой для эозинофилов и темно-фиолетовой для базофилов.

Плазматические клетки, или клетки «раздражения», размером 17—23;i, кругло-овальной, реже угловатой, формы имеют ядро неправильных очертаний, располагающееся эксцентрично. Хроматин рас­сеян неравномерно. Протоплазма окрашивается в темно-синий цвет; вид ее пенисто-ячеистый из-за многочисленных вакуолей неодинаковой величины.

Тромбоцитопоэз. Наиболее вероятна теория, которая допускает происхо­ждение тромбоцитов из мегакариоцитов, так как гигантские одноядерные клетки кроветворной ткани — мегакариоциты содержат в протоплазме такие же азурофильные зерна, как и кровяные пластинки. Протоплазма мегакариоцита подвижна и образует псевдоподии: на ее поверхности появля­ются выступы, состоящие из гомогенного вещества и небольшого количества азурофильных зерен; выступы отшнуровываются и становятся свободными. Попадая в плазму крови, они циркулируют в качестве настоящих кровяных пластинок.

Таким образом, возникновение кровяных пластинок можно представить в виде следующей схемы: клетка мезенхимы — мегакариобласт — мегакариоцит — тромбоцит.

В мегакариобласте, размером 35 р, находятся грубая хроматиновая сетка ж узкий ободок базофильиой протоплазмы. Развивающийся из мегакариобла-ста мегакариоцит является гигантской клеткой с причудливым лопастным ядром, окрашивающимся в темно-красно-фиолетовый цвет. В протоплазме заметна специфическая азурофильная зернистость Шридде, окружающая широким слоем ядро.

Тромбоциты представляют собой частицы протоплазмы, отшнуровав шейся от мегакариоцитов. Отрыв частиц происходит в синусах костного мозга, после чего они уносятся в ток крови в виде сформированных тромбоцитов.

При окраске по Романовскому — Гимза в тромбоците различают зернистый центр из хроматина и узкий ободок протоплазмы голубого цвета.

При патологических процессах, как и при некоторых физиологическил состояниях, кровотворная функция органов, в частности костного мозга. может быть усилена, ослаблена или извращена.

Усиление функции, например при кровопотерях, повышенном распаде эритроцитов, затрудненном газообмене, при инфекциях и интоксикациях, проявляется поступлением в циркулирующую кровь большого количества незрелых клеток.

Понижение функции характеризуется или уменьшением общего количества клеток миелоидного ряда (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты), или уменьшением числа только отдельных видов. Оно наблюдается при действии на кроветворные органы физико-химических факторов и бактерийных токсинов.

Извращение функции выражается тем, что в периферической крови появляются необычайные формы клеток, что отмечается, как правило, при инфекциях и интоксикациях.

 

Сравнительная таблица процентного содержания элементов костномозгового (стернального) пунктата у здоровых лошадей

 

 

Сравнительная таблица средних показателей элементов костномозгового пунктата у крупного рогатого скота, овец, свиней и лошадей

(по данным И. В. Анисимова, А. Р. Зельцер, С. И. Смирнова, И. Г. Гринца)

 

 

 

Таблица средних данных эритробластограммы крупного рогатого скота, овец,

свиней и лошадей

(по данным И. В. Анисимова, А. Р. Зельцер, С. И. Смирнова и И. Г. Гринца)