Реакция оседания эритроцитов (РОЭ)

 

Казалось бы, что оседание эритроцитов легче всего объяснить разницей в удельном весе эритроцитов и жидкой части крови (средний удельный вес эритроцитов 1,100, а плазмы 1,030). Но эритроциты лошади оседают то быстро, то медленно, хотя различие в удельном весе остается прежним; в крови круп­ного рогатого скота осаждение происходит медленно, хотя разница в удель­ном весе эритроцитов и плазмы существует и у рогатого скота. Если удельный вес и играет некоторую роль в оседании эритроцитов, то существуют и другие факторы, которые оказывают на него влияние.

 

 

 

Рис. 168. Ретракция кровяного сгустка: I — норма; II — тромбопения.

 

 

Все эритроциты имеют одноименный электрический заряд, вследствие чего они отталкиваются друг от друга. Если этот заряд уменьшить или устра­нить, например, добавкой ОН-ионов в форме аммиака, то электростатическая сила их взаимного отталкивания исчезнет. Соответственно с этим увеличится и способность эритроцитов к оседанию.

К силам, способствующим оседанию эритроцитов, принадлежит адсорб­ция на их поверхности альбуминов и глобулинов, вследствие чего эритроциты становятся тяжелее. Далее реакцию оседания эритроцитов ускоряют грубо-дисперсные (высокомолекулярные) глобулины. В плазме лошади имеется большое количество глобулинов, а в плаз­ме рогатого скота больше альбуминов; у лошади РОЭ про­текает быстро, в то время как у крупного рогатого скота она в тех же условиях почти не отмечается.

РОЭ ускоряется при беременности из-за увеличения содержания глобулинов в крови и инфекционных заболе­ваниях ввиду наличия глобулиновых иммунных тел.

На РОЭ сказывается изменение режима питания кро­ликов: у тех из них, которых кормят травой, РОЭ проте­кает значительно быстрее, чем у животных, получающих овес.

Известное значение имеет количество находящегося в плазме фибриногена, который образует вязкий гель, осе­дая на эритроцитах. Соприкасаясь своими поверхностями, последние склеиваются в кучки, агглютинируются и па­дают на дно. С увеличением количества фибриногена ско­рость РОЭ соответственно увеличивается.

Кроме того, на РОЭ оказывает влияние щелочной ре­зерв крови, липоидно-холестериновый коэффициент и со­держание различных солей. Уменьшение щелочного ре­зерва замедляет ход РОЭ, повышение, напротив, ускоряет ее. Соли кальция и бария, а также холестерин действуют на РОЭ ускоряющим образом, а соли калия и натрия, как и лецитин, задерживают оседание.

Л. С. Пирогов и В. Г. Мухин основным фактором, определяющим быстроту оседания эритроцитов, считают количество красных кровяных телец: при его уменьшении оседание ускоряется, а при увеличении замедляется.

В конечном итоге результат оседания зависит от сум­марного влияния всех факторов, несмотря на преобла­дающее влияние какого-нибудь одного из них. Этим и объясняется, почему РОЭ иногда дает сходные из­менения при совершенно различных патологических про­цессах. При учете реакции необходимо, кроме того, учи­тывать и внешние факторы, такие, как температура, концентрация раствора, чистота посуды и положение аппа­рата при определении РОЭ. Для определения реакции оседания эритроцитов наибольшее распро­странение в ветеринарной практике получили методы Неводова, Вестер-грена и Панченкова.

Метод Неводова. Для постановки РОЭ необходим эритроседио-метр Неводова, представляющий собой снабженную резиновой пробкой гра­дуированную пробирку объемом в 10 мл, шириной 9 мм и высотой 17 см. На эритроседиометре нанесены деления: 10 крупных и 100 мелких. Цифры от 2 до 14 на левой стороне указывают количество эритроцитов в миллионах, а цифры от 20 до 125 на правой стороне — процентное содержание гемогло­бина. Учет производится после 24 часов отстаивания.

В эритроседиометр предварительно насыпают 0,03 порошка щавелево­кислого натрия, а затем набирают из яремной вены кровь до метки 0. После этого пробирку закрывают резиновой пробкой и 10—15 раз переворачивают для перемешивания крови и оксалата натрия (перемешивают осторожно, чтобы избежать появления пузырой).

 

 

Рис. 169. Реакция оседания эритро­цитов в эритросе-диометре Неводо­ва.

 

 

Пробирку ставят вертикально в штатив и через каждые 15 минут в тече­ние часа отмечают уровень оседания эритроцитов. Затем выводятся средние данные за час.

Метод Вестергрена. РОЭ определяют в аппарате Вестергрена, выпускаемом Госмедснабторгом с небольшими изменениями против ориги­нала.

Аппарат состоит из деревянной рамы и четырех градуированных пипеток, одним концом вдавленных в каучук подставки, а другим прочно зафиксиро­ванным специальными клеммами на верхней ра­ме. Длина пипетки 30 см, ширина 2,5 мм. На бо­ковой стороне ее нанесены деления от 0 до 200 {иногда наоборот). Объем градуированной части пипетки составляет 1 мл.

В небольшой цилиндр пред­варительно наливают 1 мл 3,8% водного раствора лимоннокисло­го натрия. В раствор добавляют 4 мл крови, взятой из яремной вены. Кровь, тщательно пере­мешанную с цитратом (избегать вспенивания) встряхиванием или стеклянной палочкой, набирают до метки 0 в пипетку Вестергре- на. Последнюю обтирают и уста­навливают в подставку, прочно фиксируя между клеммой и осно­ванием подставки.

 

 

 

Рис. 170. Аппараты для определения РОЭ Панченкова (а) и Вестергрена (б).

 

Аппарат заряжают при гори­зонтальном положении пипетки

с целью избежать преждевременного оседания эритроцитов, быстро перево­дят в вертикальное положение и сейчас же приступают к наблюдению за оседанием, заметив время. Столбик крови постепенно разделяется на две части: верхнюю—плазма и нижнюю — эритроциты.

Оседание эритроцитов учитывают через 15, 30, 45, 60 минут, через 2 часа и последний раз через 24 часа. РОЭ у лошади составляет 75—145 мм за час, у крупного и мелкого рогатого скота — 1—3 мм.

Метод Панченкова. Определение РОЭ по этому методу произ­водится у мелких животных и с небольшим количеством крови.

Специальные аппараты Панченкова и Вестергрена отличаются только тем, что пипетки первого меньше по емкости и градуированы только на сто делений.

В капилляр набирают 0,25 мл 5% раствора лимоннокислого натрия, кото­рый затем выдувается в маленькую фарфоровую чашечку или на часовое стекло. После этого до метки 100 капилляра насасывают кровь из уха; ее вносят в цитрат и обе жидкости осторожно перемешивают. После этого цит-ратную кровь набирают до метки К и ставят в штатив. Регистрация оседания эритроцитов производится через 15, 30, 45 и 60 минут.

РОЭ (по Панченкову) составляет в норме за час (в миллиметрах): у лошади 40—70; у крупного рогатого скота 0,5—1,5; у свиньи 2—9; у собаки 2—6; у кошки 9; у кролика 1—2; у птиц 1,5—3.

РОЭ ставят сразу после взятия крови и не позже чем через 2 часа. По дан­ным В. Г. Мухина, по прошествии трех часов получаются значительные колебания РОЭ как в сторону ускорения, так и замедления.

У животных РОЭ протекает неодинаково. У крупного рогатого скота и собак она идет медленно, причем основная масса эритроцитов оседает в промежутке между 2 и 24 часами. У однокопытных реакция заканчивается в основном в течение первого часа (между 15 и 45 минутами), и только 5—8% эритроцитов оседают за остальные 23 часа. У молодых животных РОЭ несколько более ускорена, чем у взрослых.

При патологических процессах чаще приходится наблюдать ускорение РОЭ и реже замедление. Отражая изменение физико-химических свойств крови, РОЭ имеет большое практическое значение.

Ускорение РОЭ отмечается при многих лихорадочных и инфекционных заболеваниях, особенно при инфекционной анемии лошадей и кровопятни-стой болезни. В ряде случаев при этих заболеваниях оседание полностью заканчивается в течение первых 15—30 минут. Резкое ускорение РОЭ при массовом обследовании лошадей дает возможность выделять подозрительных по заболеванию. С улучшением процесса реакция изменяется в сторону замедления, однако только при полном выздоровлении РОЭ возвращается к нормальным показателям.

РОЭ замедляется при механических илеусах и при энцефаломиелите лошадей (при этих заболеваниях РОЭ по своему характеру напоминает реакцию у крупного рогатого скота). Менее значительное замедление можно встретить при заболеваниях, связанных с желтухами и сгущением крови.

РОЭ, кроме диагностических целей, пытаются использовать для выявле­ния утомляемости лошади, ее пригодности к определенной работе. С этой целью сравнивают показатели РОЭ до и после работы. У мало тренирован­ных лошадей реакция после работы значительно замедляется. Если живот­ное постепенно втягивается в работу, показатели постепенно меняются и приближаются к средним показателям здоровой лошади.

Возможность определения количества эритроцитов в 1 мм³ по показате­лям РОЭ, а также установления волюметрического индекса и индекса оседа­ния повышает клиническое значение этого метода.

В пробирке Неводова количество эритроцитов отсчитывают на шкале, на которой показаны цифры оседания эритроцитов (после 24 часов оседания). В пипетках Вестергрена показатель уровня столба эритроцитов после 24-часо­вого стояния умножается, на коэффициент 0,21, в результате чего получают цифру, показывающую количество эритроцитов в 1 мм³. Эти данные могут быть использованы только как ориентировочные. Более точные показатели получаются при подсчете в счетных камерах.

Волюметрический индекс представляет отношение столба эритроцитов к общей массе крови. У здоровых лошадей он равняется 1: 2, 1: 3. При ане­миях отношения значительно расширяются.

Индекс оседания определяется делением числа, указывающего высоту столба плазмы после 15 минут оседания, на величину высоты конечного столба после 24-часового оседания. У здоровых животных индекс оседапия не превышает 0,5, при анемиях он увеличивается до 0,8—0,9.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Плазма крови содержит такую концентрацию минеральных солей, что силы осмотического давления в ней и внутреннее осмотическое давление в эритроцитах взаимно уравновешиваются. Растворы, имеющие осмотическое давление, равное внутреннему осмотическому давлению эритроцитов, назы­ваются изотоническими. В таких растворах эритроциты сохраняют свою форму и величину.

В гипертонических растворах эритроциты отдают свою воду и сморщи­ваются, принимая форму тутовой ягоды. В гипотонических растворах проис­ходит обратное явление: эритроциты набухают вследствие поступления в них воды и увеличиваются в объеме. Гемоглобин набухших эритроцитов выщела­чивается, и клетка в конечном итоге распадается. В изотонических растворах подобных изменений но происходит, так как при них нет условий для интен­сивных осмотических явлений. Изотонической средой для эритроцитов живот­ных является 0,85—0,9% раствор поваренной соли.

Гипо- и гипертонические растворы оказывают различное влияние на эритроциты в зависимости от концентрации. Растворы, близкие по кон­центрации к изотоническим, сохраняют основную массу эритроцитов и дей­ствуют отрицательно только на отдельные, малоустойчивые клетки, вызывая частичный гемолиз. Чем меньше концентрация раствора, тем больше эритро­цитов подвергается разрушению. В растворах низкой концентрации насту­пает полный гемолиз, и жидкость окрашивается в вишнево-красный цвет.

Начальная стадия гемолиза наименее стойких эритроцитов характери­зуется слабым розоватым окрашиванием жидкости и наличием большого осадка сохранившихся эритроцитов. Концентрация гипотонического рас­твора, обусловливающего начальную стадию гемолиза, обозначается как пока­затель минимальной рсзистсптности эритроцитов. Концентрация, вызываю­щая полный гемолиз с вишнеЕО-красным окрашиванием прозрачной жидкости при отсутствии осадка (сохраняются единичные, наиболее устойчивые эрит­роциты), определяет максимальную резистентность. Амплитуду между мини­мальной и максимальной резистентиоетъю эритроцитов принято называть шириной резистентности.

Наглядное представление о резистентности эритроцитов в растворах различной концентрации дает следующая таблица (по В. П. Петропавлов­скому).

 

 

У здоровых лошадей минимальная резистентность колеблется в пределах от 0,54 до 0,66%, максимальная — между 0,4—0,48%; у крупного рогатого скота минимальная резистентность — в пределах 0,64—0,74%, а максималь­ная— между 0,42—0,46%. Наибольшая устойчивость эритроцитов отмечена у кроликов (минимальная 0,46—0,42% и максимальная 0,34—0,32%).

Принято считать, что молодые эритроциты мало устойчивы осмотически и сильно устойчивы к гемолитическим ядам; старые, напротив, устойчивы осмотически и мало устойчивы к гемолитическим ядам (Н. М. Шустров и др.). Следовательно, определение максимальной и минимальной устойчивости эритроцитов позволяет клиницисту делать выводы о процессах регенерации крови. Чем больше в крови молодых эритроцитов, т. е. чем энергичнее функ­ционируют кровотворные органы, тем ближе к изотонии сдвигается граница минимальной резистентности. Наоборот, недостаточная работа кроветворных органов вызывает постарение крови и отклонение резистентности в сторону убывающей гипотонии. Если нормальная концентрация раствора, например, равна 0,6%, то отклонение в сторону 0,7—0,8% будет указывать на понижение резистентности, а в сторону 0,4—0,3%, напротив,— на повышение резистентности.

В основе всех методов, рекомендуемых для установления резистентности эритроцитов, положен принцип: менее стойкие эритроциты разрушаются в растворах, близких к изотоническим, а наиболее стойкие сохраняются в растворах малой концентрации, в которых большая часть эритроцитов разрушается.

Метод Лимбека и Рибьера. Для опытов используются растворы поваренной соли в концентрации от 0,3 до 0,9% с интервалами в 0,02%. Растворы в количестве 1 мл набирают в центрифужные пробирки; в каждую пробирку добавляют пипеткой от гемометра Сали 20 мм³ крови. Перемешав жидкость и выждав 10—15 минут, пробирку устанавливают в центрифугу и через 5 минут учитывают результат.

В пробирках, где произошел частичный гемолиз, жидкость окрашена в слабо-розовый цвет, и на дне их имеется значительный осадок. В пробирке с полным гемолизом жидкость окрашивается в вишнево-красный цвет и стано­вится прозрачной. Легкое желтоватое окрашивание расценивается как пока­затель начала гемолиза, а слабое покраснение указывает на начало выражен­ного гемолиза.

Метод Гамбургера. Для определения резистентности эритро­цитов применяют сернокислый натрий в концентрации от 0,3 до 0,9%, с интерналами в 0,02%. Гемолиз наступает несколько позднее, чем в раство­рах поваренной соли, которая травмирует оболочку эритроцитов. Пробирки должны быть с притертыми пробками. С раствором их выдерживают при тем­пературе 14°, а затем центрифугируют. Оценка результатов такая же, как и по методу Лимбека.

Метод Яновского. Разрушенные и сохранившиеся эритроциты учитываются в счетной камере. Кровь набирают в смесители для подсчета эритроцитов и разводят растворами поваренной соли различной концентра­ции. К подсчету приступают спустя 10 минут после заполнения смеси­телей.

Зиммель предложил для опытов раствор из 8,2 хлористого натрия, 0,2 хлористого калия, 0,2 хлористого магния, 0,2 хлористого кальция, 0,1 фосфорнокислого натрия, 0,05 углекислого натрия на 1 л воды. Этот рас­твор принимается за основной; из него готовят дальнейшие разведения—0,7%; 0,6%; 0,5%; 0,4%; 0,3%. Эти разведения и употребляют для определения резистентности эритроцитов.

Подсчет сохранившихся эритроцитов Зиммель дополнил суправиталь-ным их окрашиванием с целью выявления молодых форм, содержащих гра-нулофиламентозную субстанцию. Это позволяет решать вопрос о том, какие эритроциты являются наиболее стойкими — старые или молодые. Для супра-витального окрашивания 1% раствор бриллианткрезильблау наносится на покровное стекло.

Вначале определяют количество эритроцитов в основном растворе, а затем последовательно в растворах убывающей концентрации — 0,7%; 0,6%; 0,5%; 0,4%; 0,3%; одновременно учитывают содержание молодых эритроцитов.

Техника заполнения смесителей и камеры, а также подсчета — обычная. Отличие заключается только в окрашивании покровного стекла перед нало­жением его на счетную камеру бриллианткрезильблау и учет молодых эритро­цитов (табл. на стр. 325).

Определение резистентности эритроцитов позволяет также судить при пробных испытаниях лошадей о степени их тренировки и способности выдер­живать определенную нагрузку.

У нетренированных лошадей максимальная резистонтность высока, у хорошо подготовленных она значительно ниже. Снижение резистент­ности в процессе подготовки лошади может служить критерием втяги­вания лошади в работу.

 

Резистентность эритроцитов у здоровых животных