Значение гемодиализа и история развития гематологии

 

Исследование крови сельскохозяйственных животных получило в по­следние годы широкое распространение. Интерес к нему определяется важ­ной ролью, которую кровь выполняет в организме животного, и значением изменений, которые появляются в ней при патологических процессах. Если изменения крови в той или иной степени сказываются на состоянии орга­нов и тканей, которые она питает, то и состояние этих органов отражается на циркулирующей крови, ее физико-химических и морфологических пока­зателях.

Тонкие изменения, происходящие в организме при заболеваниях, не­редко совершенно ускользают от внимания клинициста. Исследования крови помогают своевременно выявить скрыто протекающие процессы и возни­кающие осложнения, дифференцировать сходные заболевания заразного и незаразного характера, судить о состоянии организма и функциональной способности отдельных органов, следить за эффективностью применяемого лечения и делать соответствующее предсказание.

По количественным и качественным показателям крови в сочетании с клиническими данными представляется возможным ставить диагноз на анемии различного происхождения, лейкозы и кровопаразитарные заболе­вания. Показатели крови могут быть использованы также для изучения интерьера животных.

Естественно, что каждая из перечисленных задач должна решаться самостоятельным методом. Механический подход к расшифровке получен­ных данных может привести к неправильным выводам. В одних случаях применяется физико-химический анализ крови, в других — морфологиче­ский, в третьих — исследование на наличие кровопаразитов, а иногда при­ходится комбинировать все эти методы и производить «полный» гематоло­гический анализ. Для научных работ, кроме того, используются методики эксперимента и тканевых культур. В клинической практике чаще сочетают физико-химический анализ с морфологическим определением клеточного состава крови.

Само собой разумеется, что для правильного толкования результатов исследования крови врачам и лаборантам необходимы практический опыт, соответствующая материальная база и теоретическая подготовка в области гематологии.

Еще лет 25—30 назад ветеринарные специалисты делали лишь робкие попытки заниматься гематологическими анализами. Не имея соответствую­щего оборудования и научных работ, на которые можно бы было опереться в своих исследованиях, они употребляли иностранную аппаратуру, хими­калии и руководствовались данными зарубежных авторов по показателям крови. В настоящее время положение изменилось коренным образом. Оте­чественная промышленность изготовляет аппаратуру, краски и химикалии в достаточном количестве и удовлетворительного качества. Советскими уче­ными разработаны гематологические показатели для всех видев животных с учетом физиологических колебаний (порода, пол, возраст, состояние бере­менности, физическая нагрузка, прием корма). Имеются твердо устано­вленные данные по общему количеству крови и ее рН, резервной щелочности, количеству эритроцитов, гемоглобину, цветному показателю, РОЭ, насы­щенности эритроцитов в 10~¹², их размеру и резистентности, количеству лейкоцитов и тромбоцитов. Для всех животных выведены гемограммы, лей­коцитарный профиль по принципу Мошковского и сетка для гематологиче­ского профиля по Г. В. Домрачеву. Для лошади, крупного рогатого скота, овцы, свиньи и некоторых других животных разработаны миелограммы.

Установлено нормальное содержание в крови основных видов живот­ных кальция, калия, натрия, магния, хлора, неорганического фосфора, а также сахара в крови и билирубина в сыворотке с учетом крайних физио­логических колебаний. Собран значительный материал по вопросу изме­нений картины крови при ряде инфекционных и неинфекционных заболе­ваний.

 

 

СХЕМА ГЕМОАНАЛИЗОВ И ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВИ

Полное исследование крови включает определение ее физико-химиче­ских свойств — цвета, скорости свертывания, ретракции кровяного сгуст­ка, вязкости, удельного веса, скорости оседания, рН, щелочного резерва, гемоглобина, билирубина, индикана, остаточного азота, солей, ферментов, витаминов; оно охватывает количественный учет форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов) с установлением качественных изменений регенеративного. и дегенеративного характера со стороны протоплазмы и ядра эритроцитов и лейкоцитов и наличия особых кле­точных форм, которые появляются в циркулирующей крови при некото­рых патологических процессах.

В клинической практике обычно ограничиваются неполным анализом крови, заключающимся в подсчете количества эритроцитов и лейкоцитов, определении содержания гемоглобина, выведении лейкоцитарной формулы и постановке РОЭ. Более сложные методики гематологических исследова­ний выполняются исключительно по специальным показаниям.

Основанием для гематологического исследования и выбора методики служат клинические симптомы, заставляющие предполагать то или иное заболевание и подозревать изменения циркулирующей крови и кровотворных органов.

В случаях выраженных анемических состояний, когда налицо бес­причинное истощение животных, резкая бледность слизистых и конъ­юнктивы, а также отек кожи и подкожной клетчатки в связи с гидремией, кроме обычного гематологического исследования, требуется опреде­лить функциональную способность кроветворных органов. Для этой цели прибегают к суправитальному окрашиванию мазков циркулирующей крови или пунктатов костного мозга для учета эритроцитов с гранулофиламентоз-ной субстанцией. В обычных мазках выявляют количество ядерных эритро­цитов и всех других форм, указывающих на регенерацию или дегенерацию красной крови.

При малокровии или когда существует предположение о нарушении нормальной свертываемости крови, определяют количество тромбоцитов, состояние процесса свертывания крови и длительность кровотечения.

Большое значение при анемиях имеет течение РОЭ, дающей предста­вление о количестве эритроцитов, а также и об изменениях в соотношении белковых фракций крови и в электрическом заряде.

Желтушное окрашивание различных оттенков и интенсивности, отме­чаемое на слизистых и конъюнктиве, требует определения в сыворотке крови не только количества билирубина, но и характера реакции (прямая или непрямая) с целью выяснения формы желтухи. При желтухах, кроме того, целесообразно установить степень резистентности эритроцитов.

Подозрение на кровопаразитарные заболевания (пироплазмоз, нуттал-лиоз, трипанозомоз) вызывает необходимость просмотра окрашенного мазка с целью обнаружения возбудителя болезни.

Для подтверждения диагноза на заболевание печени имеет значение определение билирубина и сахара в сыворотке крови. У каждого животного, у которого предполагается недостаточность почек, устанавливают содер­жание остаточного азота, а если возможно, то и мочевины, мочевой кислоты, индикана.

При минеральном голодании животных химическим анализом выявляют количество солей натрия, калия и кальция, иногда и хлора. В последнее время придается большое значение недостаточности микроэлементов (ко­бальт, йод, железо). На своевременном выявлении последней основываются рациональная терапия и профилактика минерального голодания у животных.

Подозревая авитаминоз, целесообразно исследовать сыворотку крови на содержание витаминов. Так, установление дефицита аскорбиновой кис­лоты позволяет обнаружить гипо- или авитаминоз С.

При заболеваниях инфекционного и неинфекционного происхождения, сопровождающихся нарушением обмена веществ, кислотно-щелочного рав­новесия, определяют щелочной резерв крови и количество в ней сахара, азотистых шлаков.

Когда существуют выраженные системные поражения кроветворных органов — увеличение лимфатических узлов, селезенки и печени, а на сли­зистых оболочках рта обнаруживаются кровоизлияния, воспалительные, некротические и гангренозные поражения, кроме обычного анализа крови, целесообразно еще исследование кроветворных органов и подсчет в цирку­лирующей крови молодых форм лейкоцитов, а также атипичных клеток.

Выполняя гематологические исследования, необходимо соблюдать стро­гую педантичность и последовательность всех манипуляций. Кровь берут по возможности утром в одни и те же часы (до кормления и водопоя), после отдыха и успокоения животного, а у овец с развитым стадным инстинктом — в присутствии других животных этого вида.

 

 

СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ КРОВИ

 

Небольшое количество крови можно получить у животных из мелких кровеносных сосудов внутренней поверхности ушной раковины, а также из краевой вены наружной поверхности, у кур — из гребня или сережек, у уток и гусей — из мякоти ступни ног. Более значительное количество крови для реакции оседания эритроцитов и химического анализа лучше всего брать у лошадей, крупного рогатого скота, коз и овец из яремной вены, у свиней — из крупных сосудов уха или хвоста, кончик которого надре­зается, у хищных — из сосудов грудной или тазовой конечности, а у кур — из внутренней поверхности плечевой вены крыла.

Волосяной покров на месте взятия крови коротко выстригают или вы­бривают. Затем кожу протирают спиртом, а потом эфиром. Эфир высушивает кожу и вызывает реактивное расширение сосудов после их первоначального сужения. Если кожа грязная, ее вначале моют теплой водой с мылом, а затем хорошо просушивают ватой и обезжиривают эфиром.

Для изъятия малого количества крови из кровеносных сосудов лучше всего пользоваться оспопрививательным пером. У птиц кровь из гребня берут иглой Франка или тем же пером.

При уколе в кровеносный сосуд ушную раковину с противоположной стороны поддерживают пальцем, с целью создания твердой опоры. Между пальцем и ухом кладут небольшой ватный шарик, чтобы предотвратить поранение пальцев.

Кровеносный сосуд пересекают иглой поперек; при продольном про­коле стенки сосуда быстро соединяются и кровь не выступает в ранку. Укол делают умеренной глубины, с расчетом не проколоть противоположную (вторую) стенку сосуда. Если ранка небольшая, кровь выделяется само­произвольно небольшими каплями. Большие капли или вытекание крови струйкой нежелательны, особенно при приготовлении мазков. Первые капли для гематологического исследования непригодны — их удаляют ватным тампоном.

Из крупных кровеносных сосудов всех животных кровь получают обычно инъекционной иглой. При проколе вены последнюю сдавливают ниже места укола рукой или резиновым жгутом. Кровеносный сосуд и окру­жающие его ткани прокалывают в один прием. Инструментарий для взятия крови и цилиндры предварительно стерилизуют.

Для бактериологических исследований кровь на­сасывают стерильным шприцем и выливают затем в закрытый цилиндр через резиновую трубку или спе­циальную иглу, которой прокалывают пергаментную бумагу, закрывающую цилиндр. Так поступают для предотвращения засорения крови микроорганизмами из воздуха, с шерсти и рук.

 

 

Рис. 162. Иглы для взятия крови.

 

Чтобы получить плазму, в пробу крови добавляют лимоннокислый или щавелевокислый натрий (на 1 мл— 0,002). После отстаивания или центрифугирования фор­менные элементы крови оседают на дно, а плазму от­сасывают пипеткой. Получение сыворотки крови отли­чается в принципе только тем, что в пробу не добав­ляют цитрата. После хранения при комнатной темпе­ратуре кровь свертывается, и через некоторое время отсасывают сыворотку, отделившуюся от кровяного сгустка. Сыворотку можно получить также, дефибринируя кровь встряхиванием сосуда, в котором нахо­дятся стеклянные бусинки.

При инфекционных и протозойных заболеваниях кровь берут во время повышения температуры у жи­вотных.

Если кровь получают многократно из ушной ра­ковины, необходимо поочередно менять уши или место укола, сначала делая его у кончика уха, а затем каждый раз ближе к осно­ванию. Этим устраняется влияние местной реакции на показатели крови. Принудительной фиксации при изъятии крови лучше всего избегать; если же в ней встречается необходимость, то укрепление животных в нуж­ном положении осуществляют одним и тем же способом, чтобы устранить влияние неодинаковых раздражителей не только на количественные пока­затели, но даже и на формулу крови.

 

 

Удельный вес крови определяют методами Гаммершляга и Шмальца. Более точзн пикнометрический метод Шмальца. Тон­кую стеклянную трубочку с вытянутыми концами емкостью 0,2 мл тщательно промывают дистиллированной водой, а затем высушивают спиртом и эфи­ром и взвешивают на химических весах с точностью до ОД мг. Трубочку наполняют дистиллированной водой, обсушивают снаружи и вновь взвеши­вают при температуре 15°. После этого воду выдувают баллоном, трубочку высушивают, наполняют кровью и снова взвешивают. Делением веса крови на вес дистиллированной воды получают удельный вес испытуемой крови

Для определения удельного веса крови по методу Гамме р-шляга необходимо иметь ареометр, цилиндр, бензол или толуол удельного веса 0,88 и хлороформ удельного веса 1,483. В цилиндр наливают смесь 50 частей бензола и 20 частей хлороформа. В эту смесь, удельный вес которой равняется приблизи­тельно 1,050—1,060, быстро вносят каплю испытуемой кро­ви по возможности осторожнее, чтобы на ней и вокруг нее не было пузырьков воздуха.

 

 

Рис. 163. Опре­деление удель­ного веса кро­ви.

 

При одинаковом удельном весе крови и смеси бензола с хлороформом капля занимает в цилиндре срединное по­ложение. Если капля всплывает, то добавляют жидкость низкого удельного веса (бензол), а если тонет, то, наобо­рот, — высокого удельного веса (хлороформ). После добав­ления той или иной жидкости смесь осторожно перемеши­вают стеклянной палочкой. Как только капля крови при­нимает срединное положение, удельный вес жидкости опре­деляется ареометром. Исследование выполняют быстро, так как при медленной работе удельный вес крови изме­няется вследствие процессов диффузии. Использованную смесь фильтруют и хранят в склянке с притертой пробкой для новых исследований.

По В. Г. Мухину, бензол могут заменить бензин или ке­росин. Удельный вес обычного (желтого) бензина равен 0,757, очищенного бензина—0,750, мутного керосина—0,834, чистого керосина — 0,824. На 20 частей хлороформа берут 30 частей бензина или 40 частей керосина. Техника опреде­ления такая же, как и с бензолом.

Удельный вес крови здоровых животных колеблется в следующих пре­делах (по разным авторам), что зависит от концентрации в плазме солей, сахара, эритроцитов, гемоглобина и отчасти белков.

 

 

Повышение удельного веса крови отмечается при ее сгущении и связано с потерей организмом воды при поносе, чрезмерном потении, лихорадках и механической работе. При воспалении почек повышение удельного веса крови может быть вызвано задержкой в ней плотных составных частей.

Понижение удельного⁷веса крови чаще всего обусловливается анемиями и гидремическим состоянием при кахексии.

Удельный вес крови поддерживается на определенном уровне регули­рующими мехаршзмами водного и минерального обмена; на него оказывает влияние состояние почек, кожи и легких.

Определение скорости свертывания крови производят следующими наи­более распространенными способами: а) Ситковского — Егорова; б) Фирор-да — в капилляре и в) Бюркера — на стекле.

Способ Ситковского — Егорова. Скорость свертывания по этому методу определяют в аппарате Ситковского. Кровь набирают в ка­пиллярную трубку до метки (3 см) и затем выливают в пробирку (воздуш­ная баня), которая сообщается посредством резиновой трубки с баллоном, служащим для изменения воздушного давления, регистрируемого мано­метром. Верхний конец пробирки закрывают рези­новой пробкой, через которую проходит верхний конец капилляра. Пробирку погружают в широ­кий стеклянный сосуд с водой через отверстие в закрывающей его пробке. Вода в сосуде должна иметь температуру тела исследуемого животно­го. Температура воды поддерживается и регули­руется спиртовой горелкой.

Баллон сжимается винтом, повороты которо­го то опускают, то поднимают столбик крови, причем размах его колебаний не превышает 1 см. Пока кровь не свертывается, капилляр остается чистым; первые сгустки на его стенках указы­вают на начало процесса свертывания. Постепенно сила сцепления в крови увеличивается, столбик начинает двигаться медленнее и, наконец, совер­шенно останавливается. Исследование заканчи­вают, когда столбик не сдвигается с места давле­нием воздуха в 60 мм ртутного столба. Этот мо­мент отмечают как конец свертывания.

Скорость свертывания крови, выпущенной из кровеносного сосуда, зависит от ряда факто­ров, которые приходится учитывать при определе­нии; к ним относятся: температура окружающей среды, способ получения крови, соприкосновение крови с краями раны и др.

Способ Фирорда. В капилляр дли­ной 5 см и диаметром 1 мм набирают 1 мл кро­ви. Затем через кровь начинают протягивать хоро­шо обезжиренный белый волос длиной 10—15 см, продвигая его на 0,5 см вперед через каждые 30 секунд.

 

 

Рис. 164. Аппарат Ситков­ского—Егорова.

 

Начало свертывания узнается по красноватому окрашиванию волоса сгустками крови. Усиление свертывания характеризуется возрастанием интенсивности окрашивания. Полное свертывание отмечается в момент, когда волос совершенно перестает окрашиваться.

Способ Бюркера. В углубление стекла помещают каплю крови и по ней через определенные отрезки времени проводят острием стеклянной палочки. Показателем свертывания служит появление на острие нитей фиб­рина. Этот метод может быть модифицирован следующим образом. На край тщательно очищенного и обезжиренного предметного стекла, поставленного под углом в 50°, наносят каплю испытуемой крови. Стекая по наклоненному стеклу, капля оставляет след. Через каждые 30 секунд по следу крови про­водят острием булавки. Появление нитей фибрина на острие указывает на начало свертывания.

По В. Г. Мухину, скорость свертывания крови, определенная этим способом, в норме равна: у крупного рогатого скота 5—6 минутам, у лошади 8—10 минутам и у собаки 10 минутам.

 

Определение скорости свертывания крови различными методами дает неодинаковые показания. В практике следует применять какую-либо одну методику, со ссылкой в протоколах на способ исследования.

Приводимые ниже цифры дают представление о скорости свертывания крови различных животных в стеклянном сосуде при комнатной темпера­туре (по Мареку):

 

 

Резкое замедление свертываемости крови у животных отмечается при пятнистом тифе, болезнях из группы геморрагического диатеза, анемиях

различного происхождения, нефритах.

Быстрое свертывание крови наблюдается при миогемоглобинурии и крупозном воспалении легких.

Вязкость крови. Под вязкостью понимают внут­реннее трение жидкости, которое отражается на ско­рости прохождения ее по капиллярной трубке при определенных температуре и давлении. В основе определения вязкости лежит закон, по которому ско­рость течения жидкости обратно пропорциональна ее вязкости.

Вязкость крови зависит от ее газового состава (СО₂), содержания гемоглобина, количества и осо­бенно объема эритроцитов, а также от вязкости кро­вяной плазмы и колебания в ней количества белых кровяных телец. Наличие объемистых миелоидных клеток повышает вязкость крови.

 

 

Рис. 165. Вискози­метр Детермана.

 

 

Рис. 166. Вискозиметр Гесса.

 

Вязкость крови определяется методами Детермана и Гесса соответ­ствующими вискозиметрами этих авторов.

Метод Детермана. В стеклянную муфту аппарата наливают теплую воду (20°). В капилляр, на котором написано «вода», до метки 0 насасывается дистиллированная вода, а в другой капилляр с пометкой «кровь» до 0 набирается испытуемая цельная кровь или сыворотка.

Зарядив капилляры, вискозиметру немедленно (для предотвращения свертывания крови) придают вертикальное положение, и в момент, когда кровь стечет до единицы, аппарат снова переводят в горизонтальное положе­ние. Вязкость крови определяется по разнице в скорости прохождения по капиллярной трубке крови и дистиллированной воды, вязкость которой условно принимается за единицу. Если кровь опустилась до единицы, а вода до 4,5 деления, то это значит, что вязкость крови в 4,5 раза больше вязкости воды.

Метод Гесса. Исследование выполняется в том же порядке, но с использованием другого аппарата, (рис. 166).

В вискозиметре Гесса кровь и вода насасываются через совершенно одинаковые, очень тонкие капилляры К ₂ и К₁. Более широкие капилляры М₂

 

 

и М₁ служат для измерения объемов воды и крови, прошедших через капил­ляры К_г и К₁; шкалы указывают объемы в единицах для данного прибора. Капилляр М₁ имеет деления от 0 до 8 с подразделением на десятые доли, капилляр М₂ — только деления 0, ¹/₄, ¹/₂ и 1. Капилляр V является про­должением капилляра М₁ и К₁, а капилляр Н представляет отдельную труб­ку, которая присоединяется к капилляру К₂ и удерживается пружиной. Баллон со стеклянной частью, имеющей отверстие, играет роль клапана.

В системе, соединяющей баллон с капиллярами, кран Р позволяет включить и выключить обе группы капилляров.

Техника исследования. К свободному краю капилляра V приближают пипетку с дистиллированной водой и, производя насасывание баллоном при открытом кране Р, разобщают систему капилляров. Затем трубку Н при­водят в соприкосновение с каплей крови, которая вследствие волосности быстро заполняет ее просвет. Придав трубке вертикальное положение, чтобы кровь заполнила воронкообразное ее расширение, надевают ее на капилляр K.₂. Установив таким образом трубку Н, приводят в действие бал­лон, продвигая кровь через капилляр К₂ до метки 0 капилляра М₂.

Зарядив аппарат, открывают кран Р, благодаря чему соединяются обе капиллярные системы, и при помощи баллона одновременно присасывают обе жидкости. Как только кровь дойдет до метки 1 капилляра М₂, а при высокой вязкости до 1/2 и даже 1/4 приостанавливают насасывание, закры­вая кран Р, и устанавливают деление, на котором остановилась вода. Это деление и указывает вязкость крови. Если кровь доведена только до поло­вины или четверти, то показания шкалы М₁ умножают на 2 или 4.

По окончании определения кровь сейчас же, чтобы не дать свернуться, удаляют из капилляра. Для этого при закрытом капилляре Р кровь вытес­няют баллоном на пропускную бумагу, а затем капилляры К₂ и М₂ напол­няют концентрированным раствором аммиака.

Вязкость крови и сыворотки здоровых животных колеблется в следую­щих пределах (по данным различных авторов).

 

 

Вязкость крови, кроме того, можно определить сталагмомет­ром — трубочкой с ампулообразным расширением и делениями, находя­щимися ниже и выше его. Кровь набирают до верхней черты, после чего сталагмометр ставят отвесно и в секундах отмечают время истечения крови до нижней черты. Параллельно ставят опыт с дистиллированной водой. Показатель времени истечения крови делят на показатель времени истече­ния воды, полученное частное является показа­телем вязкости крови.

Установленная при помощи сталагмометра вязкость цельной крови у здоровых лошадей равна 3,80; вязкость дефибринированной крови — 2,89; вязкость плазмы — 1,92; вязкость сыворотки — 1,65—1,90; вязкость сыворотки крупного рогато­го скота — 1,75 (А. П. Неводов).

Вязкость крови повышается при лихорадочных заболеваниях — плеврите, воспалении легких, пе­ритоните и при недостаточности сердца в пе­риод декомпенсации. Понижение вязкости обна­руживают при первичных и вторичных анемиях, а также при резкой кахексии.

 

 

Рис. 167. Сталагмометры.

 

Ретракция кровяного сгустка

 

Под ретракцией понимается самопроизволь­ное отделение сыворотки от кровяного сгустка при отстаивании. Кровь набирают в сухую и обезжиренную спиртом иэфиром уленгутовскую пробирку и отстаивают при комнатной темпе­ратуре в течение суток. При исследовании необходимо придерживаться единой методики, так как результат во многом зависит от диаметра пробирки, ее положения и свойств стеклянной стенки. У лошади частичная ретракция кровяного сгустка насту­пает через 1—3 часа, а полное отделение через 12—18 часов. Индекс ретракции у здоровой лошади в сред­нем равняется 0,5 (0,3—0,7). У крупного рогатого скота ретракция протекает очень слабо и нередко отсутствует совершенно, у других животных она почти не изучена. Ослабление ретракции объясняют уменьшением в кро­ви количества тромбоцитов и изменением концентрации солей. Уменьшение ретракции с индексом 0,3; 0,2 и 0,1 отмечается при многих лихорадочных процессах, а пол­ное отсутствие ее— при эксудативном плеврите, контагиоз­ной плевропневмонии, кровопятнистой болезни и инфекци­онной анемии лошадей. Особенно большое значение имеет изменение ретракции при стахиботриотоксикозе. При этой болезни в первое время происходит постепенное кровяного ослабление ретракции, которое заканчивается полной поте­рей способности кровяного сгустка отделять сыворотку— ирретрактильностью; другие изменения — тромбопения, лейкопения и изменение лейкоцитарной формулы при­соединяются несколько позднее. Резкое падение ретракции и особенно ир-ретрактильность кровяного сгустка при кишечной форме стахиботриоток-сикоза указывают на переход заболевания в септическое страдание.