Методика подсчета эритроцитов крови в счетной камере Горяева.

Для работы необходим ы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, счетная камера Горяева, смеситель (меланжер) для подсчета эритроцитов, 3% раствор натрия хлорида, микроскоп. Объект исследования – человек.

Проведение работы: Счетную камеру помещают под микроскопом и рассматривают сетку Горяева вначале при малом, а затем при большом увеличении. Накрывают камеру покровным стеклом, притирая его края к стеклу камеры до появления радужных колец Ньютона. Оставив камеру под микроскопом, прокалывают палец ранее описанным методом. Первую выступившую каплю крови из пальца стирают ватным тампоном. Во вторую каплю погружают кончик смесителя для эритроцитов, держат его вертикально и набирают кровь до отметки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Обтирают конец капилляра фильтровальной бумагой и быстро, пока кровь не свернулась, переносят его в чашку с 3% раствором натрия хлорида, продолжая держать смеситель вертикально. Набирают раствор до метки 101 (т.е. разводят кровь в 200 раз), после чего смеситель переводят в горизонтальное положение и кладут на стол.

Для подсчета эритроцитов берут заполненный меланжер, зажимая нижний конец пальцем, снимают резиновую грушу и, зажав оба конца смесителя третьим и первым пальцами, в течение 1 мин перемешивают кровь. При этом эритроциты сморщиваются и становятся заметнее. Выпускают из смесителя на вату три капли, а четвертую наносят на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается в покровное стекло и заполняет камеру. Излишек раствора крови стекает в желобок. Если на сетку попал воздух или на боковых площадках оказался излишек раствора, камеру следует промыть дистиллированной водой, высушить и заполнить снова. Заполненную камеру ставят под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступают к подсчету. Считать эритроциты лучше при малом объективе (х8), используя при этом окуляр х15. Подсчитывают число эритроцитов в пяти больших квадратах (разделенных на 16 маленьких), расположенных по диагонали от верхнего левого квадрата вниз направо. Подсчет ведут в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, применяют правило Егорова: «к данному квадрату относятся эритроциты, лежащие как внутри квадрата, так и на его левой и верхней границах; эритроциты, лежащие на правой и нижней границах, к данному квадрату не относятся». Подсчитав сумму эритроцитов в пяти больших квадратах (что составляет 80 маленьких), находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном маленьком квадрате. Зная, что объем пространства камеры над одним маленьким квадратом равен 1/4000 мм³, умножают найденное число на 4000. Получают число эритроцитов в 1 мм³ разведенной крови. Умножив на величину разведения (200), получают количество эритроцитов в 1 мм³ цельной крови. Таким образом, формула для вычисления количества эритроцитов следующая: Х = (Э х 4000 х 200)/80, где х – искомое число эритроцитов в 1мм³ цельной крови, Э – сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратах, 80 – число маленьких квадратов, в которых произведен подсчет, 200- разбавление крови. Затем полученное число эритроцитов записывают в пересчете на 1 л крови, т.е. число миллионов эритроцитов, найденных в 1 мм³, умножают на 10¹².

Оформление результатов и их оценка: Записать, сколько эритроцитов содержится в 1 л исследуемой крови. Сравнить полученные результаты с нормой. У взрослых этот показатель составляет 5,0х10¹² у мужчин, (3,9-4,5) х10¹² у женщин, (4,0-4,5) х10¹² у детей школьного возраста, (5,5-7,0) х10¹² у новорожденных в первые дни жизни.

Методика определения количества гемоглобина по методу Сали.

Для работы необходим ы: скарификаторы, ватные шарики, спирт, эфир, 4% раствор цитрата натрия, гемометр Сали, капилляр (с меткой 20 мм³), стеклянная палочка и пипетка. Объект исследования – человек.

Проведение работы: Определение количества гемоглобина по Сали производят колориметрическим способом, основанном на следующем принципе: если исследуемый раствор путём разбавления довести до окраски, одинаковой со стандартным раствором, то концентрация растворённых веществ в обоих растворах будет одинакова, а количества веществ будут соотносится как их объёмы. Зная количества веществ в стандартном растворе (16,7%, что принято за 100% гемоглобина), легко вычислить его содержание в исследуемом растворе в относительных процентах. Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из матового стекла. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние сверху запаяны и содержат раствор солянокислого гематина, средняя – градуирована и открыта. Она предназначена для исследуемой крови. В среднюю пробирку гемометра наливают 0,1 N раствор HCL до нижней кольцевой метки. Затем из пальца обычным способом набирают кровь в капилляр до метки, удаляя излишек путём прикладывания фильтровальной бумаги к кончику капилляра. Выдувают кровь на дно средней пробирки так, чтобы верхний слой соляной кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетки, ополаскивают её соляной кислотой из верхнего слоя. После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцем по её дну, и оставляют стоять 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к раствору прибавляют по каплям дистиллированнную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандартного (добавляяя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой). Цифра, стоящая на уровне нижнего мениска полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в исследуемой крови в грамм-процентах. Можно вычислить относительное содержание гемоглобина в исследуемой крови, например, следующим образом. Допустим, в крови 14 г% гемоглобина, тогда 16,7г % составляет 100%, а 14,0 г% - х. Таким образом, х = 83,9%, что является показателем относительного содержания гемоглобина.

Оформление результатов и их оценка: Результаты необходимо выразить процентным соотношением плазмы и форменных элементов и сравнить с общепринятыми нормальными значениями. У взрослых это соотношение составляет 42-44% у женщин, 44-48% у мужчин, 35-40% у детей и 50-55% у новорожденных.