Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Работа 3. Определение активности альдолазы фруктозо-1-монофосфата.
Альдолаза фруктозо-1-монофосфата находится лишь в гепатоцитах, и обнаружение активности этого фермента в сыворотке крови является специфическим для поражений паренхимы печени. Принцип метода Принцип метода основан на связывании фосфотриоз, образующихся после расщепления ферментов фруктозо-1-фосфата, гидразином, с последующим определением триоз, освобождающихся при щелочном гидролизе продуктов динитрофенилгидразиновой реакции. Ход работы В пробирку внести 1 мл сыворотки крови и 0,5 мл субстратного раствора (100 мл бариевой соли фруктозо-1-фосфата растворить в 180 мл дистиллированной воды, прибавить 82 мл гидразин-гидрохлорида и довести рН до 7,4, добавляя 0,75н. NаОН, прилить веронал-мединаловой буфер рН 7,4 до конечного объема 400 мл). В контрольную пробирку внести 1 мл сыворотки крови. Инкубировать в термостате контрольную и опытную пробу 30 мин при 37°С. После инкубации в контрольную пробирку добавить 0,5 мл субстратного раствора. Остальные реактивы приливать в обе пробирки одновременно. Для дефосфорилирования образовавшейся фосфотриозы прибавить по 1 мл 0,75 н NаОН и оставить при комнатной температуре на 30 мин. Добавить по 0,5 мл 2,4-динитрофенилгидразина 0,1 % раствора в 2 н НСI (500 мл 2,4-ДНФГ растворяют в 80 мл концентрированной НСI при слабом нагревании и доводят до 500 мл водой) и оставить на 30 мин. Затем добавляют по 3 мл 0,75Н NаОН и через 5 минут опытную пробу колориметрируют на ФЭКе при зеленом светофильтре против контроля. Количество образовавшихся триоз определяют по стандартной кривой, построенной по диоксиацетону. Активность фермента рассчитывают по формуле А=а/Т, где А – активность фермента (мкмоль) в 1 мл сыворотки за 1 мин; а – количество образовавшихся триоз, рассчитанное по стандартной калибровочной кривой; Т – время инкубации (мин). Работа 4. Количественное определение билирубина в сыворотке крови по методу Иендрашека. Принцип метода В основе метода Иендрашека лежит реакция Ван ден Берга, описавшего способность билирубина давать розово-фиолетовое окрашивание с диазореактивом Эрлиха. Интенсивность окраски прямопропорциональна концентрации билирубина в растворе. Разрушение билирубин-альбуминового комплекса (свободный или непрямой билирубин) осуществляется кофеиновым реактивом, который одновременно переводит билирубин в растворимое диссоциированное состояние. Интенсивность образующейся окраски измеряется на ФЭК при зеленом светофильтре (563 нм), а количество билирубина определяется по калибровочному графику.
Ход работы В 3 пробирки отмерить указанные в таблице реактивы и колориметрировать через 5-10 мин. на ФЭКе в кювете 10 мм против контроля в зеленом светофильтре.
По калибровочному графику определите содержание общего и связанного билирубина. Вычитая из уровня общего билирубина количество прямого (свободного), рассчитайте содержание нпрямого (свободного) билирубина. Сопоставьте с нормой у здоровыз людей и сделайте вывод. Эталоны ответов к тестовым заданиям
1.1. – А 1.2. – В 2.1. – 1-Г, 2-В, 3- Б, 4-А, 5-А 3.1. – все 3.2. – 1,3 4.1. – С(+ - -) 4.2. – А(+ + +) Эталоны ответов на ситуационные задачи Задача 1. Симптомы характерны для механической желтухи при закупорке камнем общего желчного протока. В подобных случаях в крови повышается содержание билирубина в значительной степени за счет прямого, т.к. отток желчи нарушен. Кал бесцветен, не содержит стеркобилиногена. Темный цвет мочи обусловлен проникновением в нее прямого билирубина из крови. Задача 2. А. Глюконеогенез. Б. а) – лактат; б) – глицерин; в) – аминокислоты.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 222; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.222.115.179 (0.006 с.) |