Работа 1.Обнаружение перекисей в растительном масле.

 

При длительном хранении растительного масла происходит перекисное окисление радикалов непредельных жирных кислот. Органические пероксиды и гидропероксиды являются сильными окислителями и окисляют соли закиси железа до солей окиси железа, которые образуют с роданистыми солями ярко окрашенное родановое железо, хорошо растворимое в воде.

Ход работы

В пробирку прилить 1 мл свежеприготовленного 2% раствора «соли Мора» - FeSO₄(NH₄)₂SO₄ ∙ 6Н₂О-двойной железисто-аммонийной сернокислой соли, добавить несколько капель 1% раствора роданистой соли (NH₄CNS или КСNS). Добавить 1 мл исследуемого жира и сильно встряхнуть. Через несколько минут отметить появление окраски в нижнем водном слое.

Работа 2. Определение активности каталазы крови по методу А.Н.Баха и С.Р. Зубковой.

 

Метод основан на титровании избытка пероксида водорода, нерасщепленного каталазой, перманганатом калия в кислой среде.

5Н₂О₂ + 2КMnO₄ + 3Н₂SO₄ → 8Н₂О +5О₂ +К₂SO₄ +2MnSO₄

 

Активность фермента выражается каталазным числом, которое представляет количество пероксида водорода в миллиграммах, расщепленное 1мл³ крови за 30 минут.

Ход работы

С помощью микропипетки берут кровь из пальца человека или хвоста (уха) экспериментального животного и готовят гемолизат крови, разводя ее в 1000 раз в мерной колбе (0,1 мл в100 мл дистиллированной воды).

В 2 колбочки или широкие пробирки отмеривают по 7 мл дистиллированной воды и по 2 мл 1% раствора пероксида водорода. В опытную колбочку (пробирку) приливают 1 мл разведенной в 1000 раз крови. Обе (опыт и контроль) колбочки или пробирки оставляют на 30 минут при комнатной температуре. По истечении указанного времени в обе пробирки добавляют по 3 мл 10% раствора серной кислоты, которая прекращает действие каталазы. Содержимое опытной и контрольной проб оттитровывают 0,1 н раствором перманганата калия до слабо-розового цвета.

Расчет. Допустим, что на титрование опытной пробы пошло 4,5 мл 0,1 н раствора КМnO₄,а контрольной – 12,6 мл 0,1 н раствора КмnO₄, 1 мл 0,1 н КмnO₄ соответствует 1 мл 0,1 н Н₂О₂, а 1 мл 0,1 мл Н₂О₂ соответствует 1,7 мг Н₂О₂. Следовательно, в данном случае каталазное число соответствует

(12,6 – 4,5)∙х 1,7=13,77

Каталазное число крови у людей колеблется п пределах от 11 до 20.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

 

1.1. – 4

1.2. – 4

2.1. – 1В,Г; 2А

2.2. – 1В,Д,Г; 2Б,А,Г

3.1. – все

3.2. – все

4.1. – А(+ + +)

4.2. – А(+ + +)

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1.

Понятие витамин F объединяет группу полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), которые встречаются в растительных маслах, морских рыбопродуктах. ПНЖК являются компонентами фосфолипидов мембран, предшественниками биологически активных соединений. Однако, из-за высокой степени ненасыщенности они являются мишенью действия активных форм кислорода, что приводит к уменьшению количества фосфолипидов мембран. При этом возрастает относительное количество холестерина мембран. Витамин F («Эйконол») защищает фосфолипиды мембран от повреждающего действия радикалов кислорода, предупреждает отложение холестерина в артериях, снижает риск развития атеросклероза. В то же время возможно усиление перекисного окисления ненасыщенных жирных кислот, накопление липидных радикалов, что относится к нежелательным последствиям.

Задача 2.

Пероксид водорода изменяет поверхностные свойства клеточных стенок бактерий, уменьшает адгезию бактерий к любым поверхностям, способность образовывать колонии. Кроме того, пероксид водорода вызывает «окислительный стресс», модификацию цистеиновых остатков белков клеточной стенки бактерий, вызывая их гибель. В данном случае используется бактерицидное действие перекиси водорода.

Занятие 45. Биохимия крови

Цель занятия. Закрепить знания по физико-химическим свойствам и составу крови, её функции; особенностям метаболизма эритроцитов; всасыванию и обмену железа; синтеза и функции гемоглобина, механизмам транспорта газов кровью; ознакомиться с механизмами стабилизации рН крови, гемостаза; овладеть методами определения уровня гемоглобина в крови, определения резервной щелочности крови, активности α-амилазы.

Содержание занятия.

-контроль выполнения заданий по самоподготовке;

- выполнение тестовых заданий;

- решение ситуационных задач;

- заслушивание и обсуждение реферативных сообщений, подготовленных отдельными студентами;

- выполнение работы по определению количества гемоглобина в крови; активности α-амилазы, резервной щелочности;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС.

1. Группы крови.

2. Аномалии плазмы.

3. Анемии.

4. Компоненты крови.

5. Биохимические особенности состава крови.

Методические указания для самоподготовки

 

Для успешного усвоения темы, используя лекции и учебники по биохимии и нормальной физиологии, дополнительную литературу, необходимо выполнить задание

Вопросы и упражнения для аудиторной и внеаудиторной работы:

1. Отметьте общий объем крови в зависимости от массы тела.

2. Чем отличается плазма от сыворотки крови?

3. Изучите физико-химические параметры крови. Выпишите цифры удельного веса крови, осмотического давления и рН, подумайте каково клиническое значение их определение.

4. Вспомните роль системы ренин - ангиотензиноген – ангиотензин в регуляции осмотического давления.

5. Изучите химический состав плазмы и сыворотки крови. Охарактеризуйте белковые вещества плазмы крови: а) вспомните цифры общего содержания белка в сыворотке крови и метод, с помощью которого можно определить его количество; б) вспомните на какие фракции можно разделить белки с помощью метода высаливания; в) на какие фракции можно разделить белки крови методом электрофореза на бумаге? Напишите их процентное соотношение и диагностическое значение; г) какое примерное количество фракции белков можно выделить при электрофорезе на крахмале, полиакриламиде? д) что такое гипопротеинемия и гиперпротеинемия? При каких заболеваниях они развиваются? Приведите примеры.

6. Вспомните, какие группы сложных белков находятся в сыворотке крови: а) под каким названием объединяются гликопротеины сыворотки крови? Перечислите их представителей, отметьте функции; б) вспомните, какие существуют методы для разделения липопротеинов сыворотки крови; в) на какие фракции разделяются при ультрацентрифугировании, электрофорезе? выпишите их названия; г) какие фракции объединяются под термином «атерогенные липопротеины»?

7. Перечислите основные функции белков плазмы крови.

8. Перечислите «собственные» ферменты крови. Приведите примеры тканевоспецифических ферментов крови, объясните диагностическую значимость их определения.

9. Охарактеризуйте небелковые вещества плазмы крови: а) перечислите основные безазотистые и азотистые компоненты крови. 10. Охарактеризуйте клиническое значение биохимического анализа крови.

11. Изучите биологические функции крови. Транспорт каких групп веществ осуществляет кровь? Перечислите их. Выделите факторы, обеспечивающие транспортную функцию крови.

12. Перечислите защитные системы крови.

13. Перечислите регуляторные функции крови.

14. Изучите особенности строения и метаболизма эритроцита. Перечислите, какие субклеточные структуры отсутствуют в эритроците?

15. Объясните, почему в эритроците невозможны синтез белка, процесс окислительного фосфорилирования.

16. Охарактеризуйте особенности углеводного и энергетического обмена эритроцита.

17. Напишите реакцию образования 2,3-дифосфоглицерата. Объясните его биологическую функцию.

18. Рассчитайте и объясните, почему при гликолизе в эритроците образуется меньше АТФ, чем в других клетках.

19. Какой путь окисления глюкозы обеспечивает эритроцит восстановленным НАДФ?

20. Охарактеризуйте основной белок эритроцита гемоглобин. Напишите полную структуру гема.

21. Перечислите и охарактеризуйте производные гемоглобина, формы гемоглобина. Объясните понятие «гемоглобинопатия», приведите примеры.

22. Изучите дыхательную функцию крови. Начертите график оксигенации гемоглобина. Объясните характер влияния на этот процесс концентрации О₂ и СО₂, рН среды и температуры. Объясните понятие «кооперативный эффект» образования лиганда кислорода.

23. Выпишите схему транспорта и обмена О₂ и СО₂ в тканях и легких. Объясните, какова роль в этих процессах кислых свойств HHbO₂, HHb; активности карбоангидразы, разности концентраций О₂ и СО₂.

24. Объясните понятие «гипоксия». Перечислите основные формы гипоксии.

25. Изучите функцию крови по поддержанию рН. Перечислите буферные системы крови: а), б), в), г).

26. Напишите механизм регуляции рН крови бикарбонатной буферной системой. Какие органы участвуют в поддержании емкости данной буферной системы?

27. Изучите роль гемоглобина в поддержании постоянства рН крови.

28. Охарактеризуйте понятия «щелочной резерв крови», алкалоз, ацидоз. Какие виды алкалоза и ацидоза Вы знаете?

Примеры тестов контроля исходного уровня знаний

Задание 1. Выберите наиболее правильный ответ.

1.1. К ингибиторам протеаз относится …

1. α₂-макроглобулин

2. трипсин

3. химотрипсин

4. церулоплазмин

1.2. Развитие метгемоглобинемии может быть обусловлено…

1. низким парциальным давлением кислорода.

2. отравлением угарным газом.

3. отравлением окислителями.

4. низкой активностью карбоангидридразы.

Задание 2. Установите соответствие.

2.1. Возраст - нормальное содержание белка в сыворотке крови.