Работа 1. Количественное определение глюкозы в крови

Глюкозооксидазным методом.

Принцип метода

Глюкоза при участии глюкозооксидазы окисляется с образованием перекиси водорода и глюконата:

Глюкозо-

Д – глюкоза + О₂ ---------→ Д – глюконат + Н₂О₂

оксидаза

Пероксид водорода окисляет при действии пероксидазы хромоген с образованием окрашенного продукта.

Перокси-

АН₂ + Н₂О₂ -----------→ А + 2Н₂О

даза окрашенный продукт

Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в крови.

Техника определения

Определение проводят по схеме:

Отмерить, мл	Опыт	Стандарт	Контрольная проба
Сыворотка крови	0,02	-	-
Стандартный раствор глюкозы	-	0,02	-
Дист.вода	-	-	0,02
Реактив для определения глюкозы	3,0	3,0	3,0

Пробы перемешивают и инкубируют 30 минут при 37⁰С. Измеряют оптическую плотность опытной (Е₁) и стандартной пробы (Е₂) против контрольной при длине волны 480 – 520 нм в кювете 0,5 см.

Расчет по формуле:

Е₁

С глюкозы (ммоль ∕ л) = ---------- * 10

Е₂

Эталоны ответов к тестовым заданиям

 

1.1. – 4

1.2. – 1

2.1. – 1,3 – А, 2,4 – Б, 5 – В

2.2. – 1,2А; 4,2Б; 5В

3.1. – все

3.2. – 1, 3

4.1. – А(+ + +)

4.2. – А(+ + +)

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1

Инсулин является гипогликемическим, анаболическим и липогенетическим гормоном, кроме того он оказывает опосредованное влияние на водно-солевой обмен. Избыточный синтез инсулина резко снижает уровень глюкозы в крови. Глюкоза является основным энергетическим субстратом в тканях, поэтому недостаток глюкозы вызывает слабость, быструю утомляемость, потливость, постоянное чувство голода. Особенно чувствителен к колебаниям глюкозы головной мозг. В течение определенного времени необходимый уровень глюкозы будет поддерживаться за счет распада гликогена, однако с течением времени низкий уровень глюкозы приведет к нарушению мозговой деятельности.

Задача 2.

Инсулин – гормон белковой природы, поэтому при парентеральном (внутрижелудочном) введении он будет разрушен протеолитическими ферментами желудочно-кишечного тракта. Гормон необходимо вводить подкожно.

Занятие 43. Механизмы обезвреживания токсических веществ.

Цель занятия. Усвоить этапы обезвреживания токсических веществ эндогенного и экзогенного происхождения. Изучить химизм реакций микросомального окисления и конъюгации.

Содержание занятия.

– контроль выполнения заданий по самоподготовке;

– выполнение заданий тестового контроля;

– решение ситуационных задач;

– выполнение работы по определению ацетилирующей способности организма, пробы Квика-Пытеля;

– заслушивание и обсуждение реферативных сообщений;

– контроль усвоения темы путем устного собеседования с преподавателем.

Примерные темы реферативных сообщений по УИРС:

1. Токсическое действие и метаболизм хлорорганических пестицидов. Пути их детоксикации.

2. Тяжелые металлы-суперэкотоксиканты.

3.Биотрансформация лекарственных веществ в печени: реакции окисления, гидролиза и конъюгации.

Методические указания для самоподготовки

 

Для успешного усвоения темы, используя лекции и учебники по биохимии и нормальной физиологии, дополнительную литературу, необходимо выполнить задание.

Вопросы и упражнения для аудиторной и внеаудиторной работы:

1. Перечислите группы эндогенных токсических веществ.

2. Каковы возможные пути поступления чужеродных токсических веществ?

3. Приведите примеры ксенобиотиков.

4. Дайте понятие «биотрансформация ксенобиотиков».Выделите фазы биотрансформации.

5. Напишите схему первой фазы биотрансформации- микросомального окисления.

6. Поясните биологический смысл микросомального окисления.

7. Напишите схему монооксигеназного пути окисления ксенобиотиков.

8. Каков основной путь продукции восстановленной НАДФ.Н в цитоплазме клеток для поддержания процесса микросомального окисления?

9. Охарактеризуйте строение цитохрома Р450.

10. Объясните множественность форм фермента цитохрома Р450.

11. Поясните, почему микросомальное окисление интенсивно протекает в таких тканях, как печень, легкие, тонкий кишечник, плацента.

12. Напишите схему редуктазной цепи окисления ксенобиотиков.

13. Сравните два пути микросомального окисления ксенобиотиков.

14. Изучите реакции конъюгации. Напишите пример глюкуронидной конъюгации. Какие вещества подвергаются данному типу конъюгации?

15. Приведите пример конъюгации с серной кислотой. Преимущественно какие вещества подвергаются связыванию с ФАФС.

16. Напишите реакции конъюгации с глутатионом, с активной формой уксусной кислоты.

17. Вспомните реакции образования парных желчных кислот путем конъюгации с глицином и таурином.

Примеры тестов контроля исходного уровня знаний.

Задание1. Выберите наиболее правильный ответ:

1.1. В реакциях микросомального окисления участвует цитохром…

1. а₃

2. с₁

3. с

4. Р₄₅₀

5. цитохромоксидаза

1.2. Сульфаниламидные препараты, инактивируются в результате реакции….

1. ацетилирования

2. гидролиза

3. фосфорилирования

4. метилирования

Задание 2. Установить соответствие:

2.1. Основными поставщиками протонов и электронов в реакции микросомального окисления являются:

1. редуктазная цепь окисления	А.ФМНН2
2.монооксигеназная цепь окисления	Б.НАДН^++Н^+ В.НАДФН^++Н^+ Г.ФАДН2

2.2. В результате гниения белков в кишечнике из аминокислот образуются следующие токсические продукты:

1.тирозин	А.фенол
2. триптофан	Б. индол В. скатол Г.крезол

Задание 3. Для каждого вопроса выберите сочетание правильных ответов:

3.1. В реакциях инактивации активных форм кислорода участвуют…

1. глутатионпероксидаза

2. каталаза

3. супероксиддисмутаза

4. глутаматдегидрогеназа

3.2. Для выяснения антитоксической функции печени применяют….

1. гиппуровую пробу

2. осадочные пробы

3. пробу Квика-Пытеля

4. тест с сахарной нагрузкой

Задание 4. Определите правильность утверждений и наличие причинной связи между ними.

4.1. Редуктазная цепь окисления ксенобиотиков взаимосвязана с пентозофосфатным циклом окисления глюкозы, потому что «прямое окисление» глюкозы поставляетНАДФН⁺+Н⁺.

4.2. Пероксисомы –это специальные окислительные органеллы печени, потому что пероксисомы содержат оксидазу молочной кислоты и Д- аминокислот, лактатоксидазу и каталазу.

Примеры ситуационных задач

Задача 1.

У больного в крови и моче повышено содержание индола, количество индикана уменьшено. О нарушении какой функции печени свидетельствуют данные анализа?

Задача 2.

При аварии на химическом предприятии в воду реки, из которой осуществляется водозабор, попал бензол и возник риск отравления населения. Объясните причины токсичности бензола и пути превращения его в организме.

 

Самостоятельная работа студентов

Выпишите принцип метода и порядок проведения работ, выполняемых на занятии, оставляя место для записи наблюдений и выводов.