Диагностические иммунные препараты

Диагностические иммунные препараты применяют для диагностики инфекционных, аллергических и аутоиммунных болезней, иммунодефицитных состояний, а также болезней злокачественного роста. Действие этих препаратов основано на выявлении клеточных и гуморальных реакций, развившихся после проникновения Аг в организм.

Антисыворотки. Наиболее известны диагностические иммунные сыворотки (антисыворотки), с помощью которых выявляют Аг возбудителей в клиническом материале, а также проводят серологическую идентификацию микроорганизмов из выделенных культур. Для установления принадлежности микроорганизмов к конкретному виду применяют видовые антисыворотки (АТ). Для распознавания Аг, общих для групп микроорганизмов одного вида, применяют групповые антисыворотки (АТ). Серовароспецифичные антисыворотки позволяют различать серологические варианты (серовары) микроорганизмов в пределах одного вида.

Инфекционные аллергены. Для выявления сенсибилизации организма инфекционными или неинфекционными Аг используют специфические растворимые Аг — аллергены. С их помощью определяют повышенную IgE-опосредованную чувствительность к различным АГ: пыльце растений, химическим веществам, пищевым продуктам, медикаментам и т.д. Наиболее часто аллергены вводят внутрикожно. Большой практический интерес представляет определение повышенной чувствительности немедленного или замедленного типа к микробным Аг. Такие препараты обозначают как диагностические инфекционные аллергены. Часть выпускают в стандартном виде, часть готовят ex tempore в лабораторных условиях. В качестве диагностических инфекционных аллергенов применяют компоненты микробных тел, а также их метаболиты (например, токсины).

Иммунодиагностика инфекционных заболеваний

Становление иммунологических методов распознавания инфекционных заболеваний пришлось на конец XIX–начало ХХ в. Поскольку взаимодействия иммунной системы и Аг изучали с применением АТ сыворотки крови, эти методы получили назвали серологические [от лат. serum, сыворотка, + logos, наука] реакции. Основной идея этих методов — установить фенЏмен ответа организма на чужеродный Аг. Выявление АТ к инфекционному агенту даёт возможность не только выявить выраженную текущую инфекции, но и установить факт первичного инфицирования. Серологические реакции активно применяют при проведении полного объёма диагностических исследований. Увеличение титров АТ — зачастую единственный дифференциально-диагностический признак, указывающий на инфекционное заболевание. Выявление АТ особенно актуально при неудачных попытках выделить возбудитель инфекции. Однако классические реакции выявления микробных Аг и АТ к ним в значительной степени потеряли своё значение в экспресс - диагностике бактериальных инфекций. С одной стороны, такие реакции чувствительны к значимым титрам АТ, появляющимся к концу первой недели болезни, что не позволяет поставить диагноз на начальных этапах развития патологического процесса. С другой стороны — при выявлении микробных Аг в серологических реакциях с помощью коммерческих АТ необходимо адекватное количество Аг. Избыток или недостаток Аг блокирует достаточное для «прочтения» реакции образование иммунных комплексов. Проявление этого — «зоны задержки» (фенЏмен прозоны) — отсутствие агглютинации или преципитации при малых или больших разведениях сыворотки крови (рис. 10 – 13). Тем не менее, серологические реакции остаются важным инструментом диагностики заболеваний и идентификации возбудителей. Современный арсенал методов лабораторного распознавания возбудителей составляют десятки иммунодиагностических тестов. Их объединяет общее свойство — все тесты сравнительно редко дают ложноположительные или ложноотрицательные результаты. Ниже рассматриваются основные иммунодиагностические методы, применяемые на практике. Все серологические реакции разделяют на простые и сложные.

Простые реакции

Простые реакции обычно включают два компонента — Аг и АТ. К простым реакциям относят РА, реакции преципитации (РП) в жидкостях и гелях, реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) и опсоно-фагоцитарные реакции. Простыми реакциями считают и косвенные (трёхкомпонентные) реакции, в состав которых входят реагирующие системы (животные, эритроциты и т.д.), например, реакции нейтрализации (РН) возбудителя, РН Аг и реакции торможения гемагглютинации (РТГА).

Реакция агглютинации

Реакция агглютинации (РА) [от лат. agglutinatio, склеивание] позволяет выявить корпускулярные Аг, точнее Аг, локализованные на поверхности сравнительно крупных частиц (микроорганизмы, клетки различного происхождения). Механизм РА описывает «теория решётки», согласно которой двухвалентное АТ взаимодействует одним активным центром с детерминантой одной молекулы Аг, а другим — с детерминантой второй молекулы Аг (рис. 10 – 13). В результате подобного взаимодействия образуется агглютинат. Его формирование невозможно при дефиците или избытке АТ. Реакция проявляется склеиванием корпускулярных Аг под воздействием АТ (агглютининов) и реализуется в изотоническом растворе электролита, например 0,9% раствора NaCl. В РА также можно определять и содержание АТ в сыворотке крови больных, например, брюшным тифом (реакция ВидЊля) или бруцеллёзом (реакция РЊйта).

Ы Вёрстка. ВВести рисунок 10–13

Рис. 10 – 13. Схема реакции агглютинации. А — отрицательный результат обусловлен отсутствием АТ, специфичных к Аг. Б — п оложительный результат с образованием агглютината наблюдают при наличии АТ, специфичных к определяемому Аг; визуализация агглютината возможна при образовании «решётки». В — ложноотрицательный результат возможен при развитии феномена прозоны, когда молекул АТ недостаточно для образования «решётки» (1) или имеется избыток АТ, также препятствующий её образованию (2).

Развёрнутая РА. Для определения АТ в сыворотке крови больного ставят развёрнутую РА. Для этого к серии разведений сыворотки крови добавляют диагностикум — взвесь убитых микроорганизмов или частицы с сорбированными Аг. Максимальное разведение, дающее агглютинацию Аг, называют титром сыворотки крови. Разновидности РА для выявления АТ — кровяно - капельная проба на туляремию (с нанесением диагностикума на каплю крови и появлением видимых белёсых агглютинатов) и реакция ХЊддльсона на бруцеллёз (с нанесением на каплю сыворотки крови диагностикума, окрашенного генциановым фиолетовым).

Ориентировочная РА. Для идентификации выделенных микроорганизмов ставят ориентировочную РА на предметных стёклах. Для этого к капле стандартной диагностической антисыворотки (в разведении 1:10, 1:20) добавляют культуру возбудителя. При положительном результате ставят развёрнутую реакцию с увеличивающимися разведениями антисыворотки. Реакцию считают положительной, если агглютинацию наблюдают в разведениях, близких к титру диагностической сыворотки.

О - Аг. Соматические О-Аг термостабильны и выдерживают кипячение в течение 2 ч. При взаимодействии с АТ образуют мелкозернистые агрегаты.

Н - Аг. Н-Аг (жгутиковые) термолабильны и быстро разрушаются при 100 °С, а также под действием этанола. В реакциях с Н-антисывороткой через 2 ч инкубации образуют рыхлые крупные хлопья (образованы бактериями, склеившимися жгутиками).

Vi - Аг брюшнотифозных бактерий относительно термостабилен (выдерживает температуру 60–62 °С в течение 2 ч); при инкубации с Vi-антисывороткой образуется мелкозернистый агглютинат.

Реакции прямой гемагглютинации. Простейшая из подобных реакций —агглютинация эритроцитов, или гемагглютинация, применяемая для определения групп крови в системе АВ0. Для определения агглютинации (или её отсутствия) используют стандартные антисыворотки с анти-А и анти-В-агглютининами. Реакция называется прямой, так как исследуемые Аг — естественные компоненты эритроцитов. Общие с прямой гемагглютинацией механизмы имеет вирусная гемагглютинация. Многие вирусы способны спонтанно агглютинировать эритроциты птиц и млекопитающих, их добавление к суспензии эритроцитов вызывает образование агрегатов из них.