Непосредственное определение

Таких паразитов, как вши (Trichodectes canis, Linognathus setosus, Felicola subrostratus), краснотелковые клещи (Neotrombicula autumnalis) и блохи (Ctenocephalis spp), можно увидеть на шерсти невооруженным глазом. Чувствительность непосредственного осмотра зависит от цвета и густоты шерсти, остроты зрения и времени, затраченного на исследование животного. Очень удобно пользоваться лупой.

Взрослые вши легко заметны, но чаще обнаруживаются их яйца. Яйца Trichodectes (кусающих вшей) желтого цвета, Linognatus (сосущих вшей) – голубоватого. Felicola (кусающая вошь) – единственный вид, обнаруженный у кошек. Яйца клещей N. animatis ярко-оранжевые, обычно обнаруживаются в виде гроздей, имеют размер булавочной головки.

Отпечатки на липкой ленте можно использовать как вспомогательный метод идентификации мелких паразитов, например, Cheyletiella. Так как большую часть времени блохи проводят вне животного, выявление их экскрементов является более чувствительным методом, чем осмотр с целью обнаружения взрослых особей.

 

Чистка шерсти щеткой

Чистка щеткой удобна для выявления экскрементов блох и Cheyletiella spp. Техника описана в главе 13. Новой или простерилизованной зубной щеткой можно отбирать образцы для культуры дерматофитов. Для посева щетку прижимают к поверхности подходящей среды.

 

Мазки из фолликулов/пустул

Мазки из фолликулов/пустул используют для выявления Demodex spp, обитающих в волосяных фолликулах. Техника описана в главе 13. Гидроксид калия может повредить клещей Demodex, поэтому его использовать не рекомендуется.

 

Мазки из ушей.

Берут для определения ушных клещей Otodectes cynotis. Ушные выделения осторожно собирают ватным тампоном, помещают на стекло, смешивают с равным объемом 5–10%-ного раствора гидроксида калия и немедленно исследуют под микроскопом. Если результат первого исследования отрицательный, выделения нужно исследовать повторно после 20–30-минутной очистки. Клещи крупные, с длинными конечностями.

 

Соскобы с кожи.

Техника взятия соскоба с кожи описана в главе 13. Соскобы с кожи необходимо исследовать в течение нескольких часов, очень желательно делать это в лаборатории, оборудованной для подобных анализов. При отправке образцов для исследования их следует законсервировать минеральным маслом, либо добавить каплю воды. В растворе гидроксида калия образцы хранить нельзя, так как это приводит к обезвоживанию клещей.

 

Гистопатология.

При исследовании биоптатов кожи иногда обнаруживаются клещей Demodex, и, изредка, Sarcoptes и Notoedres, хотя этот метод слабо пригоден для диагностики данной инвазии.

 

Исследования кала

При сильной степени инвазии животные могут проглатывать клещей, и тогда их обнаруживают в кале.

 

Серология

Серологические методы будут описаны ниже в этой главе. Основное применение находят тест-системы для определения антигена слюны блох.

 

Эндопаразиты.

Мазки из фекалий

В мазках из фекалий определяют подвижных паразитов. Обычно их приготовляют из жидких или слизистых образцов. Фекалии должны быть как можно более свежими. Методика описана на рисунке 1.9.

Методика 1. Нанесите каплю солевого раствора на чистое предметное стекло. 2. Возьмите пробу кала из прямой кишки пальцем в резиновой перчатке (или дотроньтесь пальцем до уже отобранного свежего образца). 3. Нанесите очень тонким слоем на чистое стекло и накройте покровным стеклом. 4. Просмотрите под микроскопом; освещение не должно быть очень ярким, так как большинство неокрашенных паразитов прозрачные. Примечания Высушенные мазки можно окрасить красителями Циля-Нильсена, карболовым фуксином или Diff-Quick®.

Рис. 1.9: мазки из фекалий

К сожалению, отрицательные результаты неубедительны; если при исследовании всех образцов получены отрицательные результаты, необходимо повторное исследование другими методами, например, флотации в растворе сульфата цинка или центрифугирования. Идентификация яиц паразитов несложна с помощью соответствующих справочников (см. главу 8). Определение личинок паразитов гораздо сложнее, лучше проконсультироваться с опытным паразитологом или воспользоваться авторитетным справочником.

Cryptosporidium parvum можно определить с помощью модифицированного метода окраски по Цилю-Нильсену (см. выше); а также флуоресцентным методом (рис. 1.10).

Методика 1.Высушите мазки из фекалий на воздухе и зафиксируйте этанолом. 2.Поместите в формалин и инкубируйте 20 минут при комнатной температуре. 3.Покрасьте фенол/аурамином (0,03 г аурамина, 3,0 г фенола, дистиллированная вода до 100 мл) в течение 10 минут. 4.Смойте водой. 5.Обесцветьте 1%-ным раствором соляной кислоты в 70%-ном денатурате в течение 5 минут. 6.Покрасьте 0,01%-ным синим Эванса в течение 30 секунд. Микроскопируйте под ультрафиолетовым светом для обнаружения флуоресцирующих криптоспоридий.

 

Рис. 1.10: Флуоресцентная окраска мазков фекалий для обнаружения Cryptosporidium parvum.

 

Флотационные методы.

Сульфат цинка: Многих кишечных паразитов, например, Giardia spp., Ancylostoma spp., Toxocars spp., Toxascaris leonine, toxoplasma gondii, Trichirus vulpis, удобнее идентифицировать по их яйцам или ооцистам в фекалиях. Кроме того, личинки некоторых паразитов дыхательного тракта животные могут откашливать и проглатывать, и, следовательно, они обнаружатся в кале, например, Aelurostrongylus adstrusus, Angiostrongylus vasorum.

Флотационные методы основаны на использовании жидкости с плотностью большей, чем у яиц и личинок. Следовательно, старые растворы, в которых начинают выпадать кристаллы, бесполезны и их надо утилизировать.

Для выполнения такого анализа свежий образец фекалий хорошо перемешивают с равным объемом раствора сульфата цинка (33 г ZnSO₄•7 H₂O)(приблизительно 6 или 7 чайных ложек) на 100 мл воды) и ставят отстояться на 15 минут. Относительная плотность раствора должна быть в пределах 1,20–1,25. Яйца и личинки всплывают на поверхность, и их можно собрать на покровное стекло, прикоснувшись им к поверхности воды, а затем поместить на предметное стекло (рис. 1.11).

 

Подпись к рисунку.

Рис. 1.1..: Личинки Angistrongylus vasorum во флотационном растворе сульфата цинка.

 

Сахар: Более доступен, чем сульфат цинка, но цисты Giardia и яйца некоторых круглых червей в его растворе деформируются. Методика описана выше. Раствор сахара определенной плотности 1,20–1,25 приготовляют, растворяя 45 г сахарозы в 35 мл воды (при необходимости раствор осторожно подогревают). В качестве консервантов можно добавить 1 мл формалина или 0,1 г фенола.

 

Центрифугирование.

Центрифугирование можно использовать для концентрации яиц кишечных гельминтов, личинок, цист простейших и ооцист кокцидий. Фекалии смешивают с 5–10%-ным раствором формалина и уксусноэтилового эфира и центрифугируют 10 минут при 500 g. Паразиты опускаются на дно центрифужной пробирки. Органические остатки фекалий и жир концентрируются на границе между формалином и уксусноэтиловым эфиром. Эти растворы опасны и их центрифугируют только в герметично закрытых пробирках. Центрифуги с фиксированным углом использовать нельзя.

 

Седиментация личинок легочных гельминтов (метод Баерманна)

В большинстве случаев личинки легочных гельминтов определяют методом седиментации, а не флотации. Фекалии помещают в сито с размером отверстий 0,25 мм, которое кладут на воронку с резиновой трубкой, пережатой зажимом. Затем добавляют воду до тех пор, пока она не покроет фекалии. Установку оставляют на ночь при комнатной температуре. На следующее утро зажим снимают и первые капли воды исследуют под микроскопом при небольшом увеличении. Для этого метода не нужны специальные растворы, но требуется соответствующее лабораторное оборудование.

Упрощенный вариант этого метода: 10 г фекалий помещают в сито, которое кладут в большой стакан, наполненный умеренно теплой водой, и оставляют на 6 часов или более. Личинки мигрируют из холодных фекалий через сито и после остывания воды оседают на дне стакана. После удаления большей части надосадочной жидкости осадок исследуют под микроскопом при небольшом увеличении.