Цепная полимеразная реакция. 


Мы поможем в написании ваших работ!



ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Цепная полимеразная реакция.



Технология ЦПР была описана ранее в этой главе (см. рис.1.4). Некоторые патогенные бактерии, плохо растущие в культуре, идентифицируются методом ЦПР. Один из самых известных примеров – Bartonella henselae, вызывающая бактериальный ангиоматоз («болезнь кошачьих царапин» у человека. Метод ЦПР позволяет определить бартонеллы прямо в крови кошки, в то время как для роста культуры требуется несколько недель. Эту технологию используют также для определения Chlamiydophila felis; описаны методики определения сальмонелл и кампилобактерий.

 

Серологические методы.

Серологические методы определения бактерий будут описаны ниже в этой главе. Области их применения ограничены. Пример серологического метода – роз-бенгал проба для определения Brucella canis, применяющаяся в странах, где инфекция широко распространена.

 

МИКОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Непосредственное определение.

Флуоресценция в ультрафиолетовом свете

Некоторые дерматофиты флуоресцируют яблочно-зеленым цветом в ультрафиолетовом свете определенной длины волны. Из всех грибов, обитающих в организме собак и кошек, флуоресцируют около 50–60% штаммов Microsporum canis; остальные не обладают такой способностью. Точная природа флуоресцентного вещества неизвестна; возможно, это какой-то экскрет или измененный компонент стержня волоса.

Многие практикующие врачи пользуются лампой Вуда для диагностики этих грибов у животных; очень важно правильно выполнять процедуру, в особенности:

· Исследование проводить в темной комнате.

· Для получения света нужной длины волны лампа Вуда должна разогреться.

· Нельзя направлять свет в глаза человека или животного во избежание повреждения сетчатки ультрафиолетовыми лучами.

 

Кроме того, нужно отличать флуоресценцию, вызванную дерматофитами, от голубоватой автофлуоресценции кожных чешуек и корочек. Положительные результаты, полученные при осмотре с помощью лампы Вуда, необходимо подтвердить микроскопией и культуральными методами. Отрицательный результат не исключает дерматофитоза.

 

Микроскопия собранной шерсти

Микроскопия шерсти – эффективный метод диагностики дерматофитоза, особенно при исследовании волосяного покрова участков, флуоресцирующих под лампой Вуда. Волосы помещают на стекло с каплей 10%-ного гидроксида калия, накрывают покровным стеклом и оставляют на 30 минут. На пораженных стержнях волос под микроскопом видны гифы или споры. Несмотря на быстроту и специфичность метода, он не очень чувствителен, и во всех случаях подозрения на дерматофитоз нужно делать посев.

Микроскопию окрашенных препаратов из соскобов с пораженных участков кожи применяют для диагностики инфекций, вызванных Malassezia. Дрожжи имеют специфическую морфологию в форме земляного ореха (см. главу 13).

 

Культивирование грибов

Культивируют грибы для подтверждения диагноза. Этот метод подходит для дерматофитов, Malassezia, Candida albicans Aspergillis fumigatus. Посев можно сделать в собственной лаборатории. Для этого потребуется следующее:

· Специальные термостаты: при неправильных условиях культивирования из-за колебаний температуры можно получить атипичные результаты.

· Специальные культуральные среды: к сожалению, имеют ограниченный срок хранения.

· Опытный персонал: правильная идентификация грибных культур сложна, иногда требуется исследование макроконидий и т.п.

 

Перед отправкой образца в лабораторию для посева необходимо убедиться, что в лаборатории имеется нужное оборудование и персонал для работы с материалом. Волосы отбирают на границе пораженных участков и помещаются в помеченный бумажный конверт, который затем упаковывают в герметичный пластиковый контейнер. Не следует класть шерсть прямо в пластиковые емкости, так как статическое электричество затрудняет исследование.

Некоторые грибы, включая дерматофиты, Candida и Aspergillis fumigatus, потенциально инфекционны для человека, и работать с их культурами должен только опытный лабораторный персонал.

 

Среды для дерматофитов

Для культивирования дерматофитов можно использовать готовые наборы, содержащие среды с рН-индикатором (рис. 1.8). Небольшое количество волос и чешуек, взятых с пораженных участков, помещают на поверхность среды и накрывают пластиковой крышкой. Большинство наборов могут храниться и использоваться при комнатной температуре. Чашки необходимо ежедневно исследовать на предмет изменения цвета среды и роста грибов.

Дерматофиты образуют белые колонии, в отличие от сапрофитов, колонии которых коричневого, зеленого или сероватого цвета. Рост дерматофитов приводит к изменению цвета среды с желтого на красный перед появлением видимых признаков роста, или одновременно с ними (обычно через 2–12 дней). При росте сапрофитов цвет среды изменяется только после появления признаков роста (обычно через 12 дней или более). Некоторые дерматофиты растут медленно; поэтому среды инкубируют в течение 21 дня, и только при отсутствии роста по истечении этого срока их можно признать отрицательными. Microsporum можно отличить от Trichophyton по морфологии колоний:

· Колонии Microsporum белые, крупные и рыхлые, похожие на куски ваты. Цвет нижней поверхности колоний – от бледно-желтого до коричневатого.

· Колонии Trichophyton меньшего размера, цвет – от белого до кремового, с порошкообразной структурой. Нижняя поверхность колоний светло- или темно-коричневая.

 

Подпись к рисунку.

Рис. 1.8. Готовый набор для культивирования дерматофитов.

 

Даже если колонии имеют вид, характерный для патогенных грибов, необходимо подтвердить, что микроорганизмы действительно являются дерматофитами. Обычно такие положительные культуры отправляют опытному микологу для идентификации конидий. Для исследования колонии под микроскопом нужно прижать к ней прозрачную ленту, наложить ее на стекло, окрашенное лактофеноловым синим, и исследовать под микроскопом на наличие макроконидий.

Если макроконидии не выявлены, необходимо пересеять первичную культуру на агар Сабуро и исследовать повторно.

  • Макроконидии Microsporum canis многочисленные, веретенообразные, с толстыми неровными стенками. Микроконидии образуются в меньшем количестве, они гладкие и имеют круглую форму.
  • Макроконидии Microsporum gypseum образуются в больших количествах, имеют сигарообразную форму с закругленными концами. Микроконидии же шарообразной формы с тонкими стенками.
  • Макроконидии Trichophyton mentagrophytes обнаруживаются редко. Если они есть, то имеют сигарообразную форму и тонкие стенки. Микроконидии круглые и собраны в грозди на кониденосцах.

 

ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Эктопаразиты



Поделиться:


Последнее изменение этой страницы: 2020-03-13; просмотров: 245; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы!

infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 44.222.249.19 (0.014 с.)