Отправка образцов в лабораторию.

Практикующие ветеринарные врачи, желающие отправить образцы в диагностическую лабораторию для бактериологического исследования, должны приготовить обычные мазки, а также взять мазки тампонами с угольной средой. Последнее необходимо для грамотрицательных и анаэробных микроорганизмов, быстро погибающих в сухом мазке. Предпочтительнее присылать образцы фекалий, а не ректальные мазки. Транспортные среды для бактерий могут храниться при комнатной температуре. Транспортные среды для вирусов и хламидий должны храниться в холодильнике (до 6 месяцев). Некоторые среды для вирусов могут храниться годами в замороженном состоянии.

 

Результаты теста Определяющий тест   Чувствительность = Специфичность = Предсказательная ценность положительного результата = Предсказательная ценность отрицательного результата = Чувствительность Это мера способности правильно идентифицировать заболевание данным методом. Количественное отношение отрицательных результатов, полученных от больных животных (ложноотрицательных результатов), имеет обратную зависимость от чувствительности. Чем выше чувствительность, тем меньше получается ложноотрицательных результатов. Относительное число ложноположительных результатов вывести из этого значения нельзя. Специфичность. Это мера способности правильно идентифицировать здоровых животных данным методом. Количественное отношение положительных результатов, полученных от здоровых животных (ложноположительных результатов), имеет обратную зависимость от специфичности. Чем выше специфичность, тем ниже количество ложноположительных результатов. Относительное число ложноотрицательных результатов вывести из этого значения нельзя. Предсказательная ценность положительного результата. Это мера оценки положительного результата. Связана с чувствительностью, но также зависит от распространенности болезни (в то время как на чувствительность это не влияет), и, следовательно, имеет большее значение для клинициста.   Предсказательная ценность отрицательного результата. Это мера оценки отрицательного результата. Связана со специфичностью, но также зависит от распространенности болезни (в то время как на чувствительность это не влияет), и, следовательно, имеет большее значение для клинициста.

Рис. 1.1. термины, использующиеся при сравнении лабораторных методов. Чувствительность, специфичность, положительную и отрицательную предсказательную ценность можно подсчитать для любого лабораторного теста, сравнимого с определяющим методом, например, с гистопатологией. Важен выбор подходящих контрольных популяций чисел, так как это влияет на значение предсказуемости. Буквы a, b, с и d относятся к количеству результатов в каждой категории. Например, b – число отрицательных результатов теста при положительном результате определяющего теста, то есть ложноотрицательных результатов.

 

ВИРУСОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ

Выделение вируса.

Выделение вируса является одним их определяющих методов его выявления. Этот метод широко используется для диагностики вируса лейкоза кошек (рис. 1.2.), кальцивируса кошек, герпесвируса кошек и поксивируса кошек. Также возможен при подозрении на аденовирусную и герпесвирусную инфекции собак, однако, чаще применяют другие методы. Для выделения вируса требуется длительное время, оно дорого стоит и может производиться только в специализированных лабораториях. Для культивирования разных типов вирусов требуются различные типы клеток, иногда с постоянным субкультивированием. Выделить вирус не сможет неспециалист. Данный метод предпочтителен для определения и культивирования неизвестных вирусов или новых штаммов.

 

Подпись к рисунку.

Рис. 1.2: Культура клеток QN 10 S, зараженная вирусом лейкоза кошек. Вирус вызвал трансформацию клеток в виде изменения морфологии и уменьшения количества клеток на пластике, где растет культура. Образовавшийся фокус инфекции подтверждает присутствие инфекционного вируса лейкоза кошек в образце. Другие вирусы, например, вирус иммунодефицита кошек, не трансформируют клетки QN 10 S. (с любезного разрешения проф. Освальда Джарретта).

 

Некоторые вирусы, например, вирус чумы плотоядных и коронавирус кошек, очень трудно выделить в культуре клеток, поэтому эти инфекции обычно диагностируют серологическими методами. Вирусы могут отсутствовать в секретах, крови или тканях на момент появления клинических признаков, или погибать вне организма даже при использовании транспортных сред.

Электронная микроскопия.

Электронная микроскопия – экспресс-метод, обычно используется для идентификации семейств по их характерным структурам, а не отдельных вирусов. Возможности данного метода ограничены высокой стоимостью оборудования и необходимостью значительного опыта. Другая проблема – в том, что некоторые вирусы относительно легко изменяют свою морфологию. Например, коронавирусы могут терять свою характерную шарообразную форму.

Метод относительно малочувствителен, так как при естественном заражении вирусные частицы редко образуются в достаточном количестве. Исключением является поксивирусная инфекция кошек, при которой вирусные частицы в большом количестве накапливаются в корках засохшего экссудата. После заражения культур клеток также образуется большое количество поксивирусных частиц, которые можно увидеть под электронным микроскопом (рис. 1.3).

 

Подпись к рисунку.

Рис. 1.3. Электронная микрофотография поксивируса кошек из корки засохшего экссудата. Это один из немногих вирусов, реплицирующийся в количестве, достаточном для его идентификации методом электронной микроскопии.

 

Гемагглютинация.

Некоторые вирусы (особенно парвовирусы) вызывают агглютинацию эритроцитов определенных видов животных. Самый распространенный пример этого явления – агглютинация эритроцитов свиньи парвовирусами кошек или собак. Определение этих вирусов методом гемагглютинации требует значительного опыта; свиная кровь должна быть свежей. Метод не подходит для использования в практической работе. Он относительно малочувствителен и требует высокой концентрации вирусных частиц. Тест неспецифичен, но позволяет дифференцировать парвовирус собак (вызывающий агглютинацию при рН 7,2) от парвовируса кошек (рН 6,4). Существует улучшенный вариант метода гемагглютинации – метод задержки гемагглютинации, обладающий большей специфичностью (см. ниже). Тест можно использовать для подтверждения результатов при идентификации вируса, но обычно его применяют для титрования противовирусных антител.