Работа 6. Биуретовая реакция.
Принцип метода. Реакция основана на способности пептидной группы белков и полипептидов образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета.
Реакция позволяет обнаружить наличие пептидной группы -CO-NH- в исследуемом веществе и, следовательно, является универсальной реакцией для обнаружения веществ белковой природы. Свое название реакция получила от производного мочевины биурета, который дает в данных условиях то же окрашивание, что и белок. Окрашивание появляется за счет образования медной комплексной соли (см. реакцию).
Техника выполнения работы. В две пробирки поместите по 5 капель раствора яичного белка и желатины. В обе пробирки добавьте по 10 капель раствора едкого натра и по одной капле раствора сульфата меди. В обеих пробирках появляется красно- или сине-фиолетовое окрашивание.
Работа 7. Ксантопротеиновая реакция (Мульдера).
При подщелачивании возникает хиноидная структура, окрашенная в оранжевый цвет.
Реакция основана на способности циклических аминокислот фенилаланина,триптофана, гистидина и тирозина, содержащих бензольное кольцо, при взаимодействии с концентрированной азотной кислотой образовывать нитропроизводные желтого цвета. В щелочной среде нитропроизводные циклических аминокислот превращаются в соответствующие соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет. При взаимодействии азотной кислоты с тирозином реакция нитрования протекает по выше представленному уравнению.
В одну пробирку поместите 5 капель 1% раствора яичного белка, в другую- 1% раствора тирозина. В обе пробирки добавьте по 3 капли концентрированной азотной кислоты. Нагрейте до кипения (осторожно!). Отметьте появление желтого окрашивания. Содержимое пробирок охладите под краном, к охлажденному раствору прибавляйте по каплям 10 % раствора едкого натра до тех пор, пока не начнется переход окраски.
Работа 8. Реакция Фоля.
Принцип метода. Реакция основана на способности белка, имеющего в своем составе серусодержащие аминокислоты (цистеин, цистин), под влиянием щелочи при нагревании образовывать сернистый натрий, который с плюмбитом натрия дает черный осадок сернистого свинца. Метионин, реакции не дает, т.к. сера в нем прочно связана с метильной группой.
Возьмите две пробирки. В одну поместите 10 капель яичного белка, в другую – 10 капель 1% раствора цистеина, и добавьте в обе пробирки вдвое больший объем 10% раствора гидроксида натрия. Содержимое пробирок перемешайте, нагрейте до кипения (1-2 минуты). К полученным щелочным растворам добавьте по 5 капель 10% ацетата свинца (II) и вновь прокипятите. Отметьте появление серо-черного осадка.
Эталоны ответов к тестовым заданиям
1.1. – А
1.2. – В
2.1. – 1-Г, 2-Д
2.2. – 1-Д, 2-Б, 3-А
3.1. – все
3.2. – 1,2,3
4.1. – А (+ + +)
4.2. – А (+ + +)
|