Дан трипептид гли – ала – вал

А. Изоэлектрическая точка этого трипептида будет находиться в... среде.

а) нейтральной

б) слабокислой

в) щелочной

Б. Данный трипептид при электрофорезе в щелочной среде (рН 10) будет двигаться ….

а) к аноду

б) к катоду

в) останется на старте.

1.2. В полипептидной цепи прерывает a-спирализацию ….

а) тирозин б) триптофан в) валин г) пролин д) аспарагин

Задание 2. Установите соответствие.

Денатурирующие агенты – типы связей их с белками.

1. сильные кислоты и щелочи 2. органические растворители 3. детергенты 4. восстанавливающие агенты 5. тяжелые металлы 6. изменения температуры 7. мочевина

а. водородные и ионные связи. б. гидрофобные взаимодействия в. гидрофобные и ионные взаимодействия г. дисульфидные мостики д. гидрофобные взаимодействия и водор. связи е. ионные связи и сульфгидрильные группы ж. водородные связи

Уровень организации белковой молекулы – ее структурный элемент.

1. домен 2. виток спирали 3. протомер 4. последовательность аминокислот

а. первичная структура б. четвертичная структура в. вторичная структура г. третичнаяструктура

Задание 3. Подберите сочетания правильных ответов.

Предложите наиболее оптимальный метод осаждения белка-фермента с целью дальнейшего использования его каталитической активности.

1. осаждение органическими кислотами

2. осаждение гуанидинхлоридом

3. осаждение солями тяжелых металлов

4. осаждение (NH₄ ) ₂SО₄

5. обработка парахлормеркурибензоатом

Выберите метод, которым можно очистить белки сыворотки крови от сернокислого аммония при разделении их высаливанием.

1. хроматография

2. спектроскопия

3. высушивание при 100⁰С

4. диализ

5. рефрактометрия

Задание 4. Определите правильность утверждений в предложении и установите наличие причинной связи между ними.

4.1. Сернокислый аммоний вызывает денатурацию белка, потому что сернокислый аммоний обладает водоотнимающим действием с одновременной нейтрализацией электрического заряда.

4.2. Белки наиболее подвижны в электрическом поле в изоэлектрическом состоянии, потому что при этом белки имеют положительный заряд.

Примеры ситуационных задач

Задача 1.

Сделайте предположение об аминокислотном составе впервые выделенного пептида, принимая во внимание следующие экспериментальные данные:

- пептид не обладает электрофоретической подвижностью в щелочной среде (рН 9,8);

- при электрофорезе в кислой среде (рН5,6) движется к катоду;

- не дает окрашивания при обработке концентрированной азотной кислотой (ксантопротеиновая проба отрицательна).

Задача 2.

Белок, синтезируемый in vivo, принимает биологически активную конформацию. В то же время, при синтезе белка in vitro не всегда удается получить функционально активный белок, даже при отсутствии сбоев, ошибок в первичной структуре. Объясните этот феномен.

Самостоятельная работа студентов

Занесите в тетрадь протоколы лабораторных работ, оставляя место для расчетов и выводов.

Работа 1. Высаливание белков сыворотки крови

Сернокислым аммонием.

 

Реакция высаливания обусловлена дегидратацией макромолекул белка с одновременной нейтрализацией электрического заряда. Высаливание белков сернокислым аммонием может быть использовано для разделения белков друг от друга и получения их в кристаллическом виде. Например, глобулины сыворотки крови, имеющие большой молекулярный вес легче высаливаются, чем альбумины. Глобулины осаждаются в полунасыщенном, а альбумины – в насыщенном растворе сернокислого аммония.

Высаливание белков – обратимый процесс. Осадок белка может вновь раствориться в воде после уменьшения концентрации солей. При этом белок не теряет своих естественных биологических свойств.

Ход работы

В пробирку поместить 2 мл сыворотки крови и добавить равный объем насыщенного раствора сернокислого аммония, перемешать. Получается полунасыщенный раствор сернокислого аммония, в котором выпадает осадок глобулинов.

Осадок отфильтровать через бумажный фильтр в пробирку. К фильтрату добавить сухой сернокислый аммоний до полного насыщения раствора. Выпавший осадок альбумина отфильтровать через бумажный фильтр. Проверить фильтрат на отсутствие белка с помощью биуретовой реакции.

Для доказательства обратимости высаливания, полученные осадки прямо на фильтрах смочить с 2-3 мл дистиллированной воды и отметить их растворение.