Работа 1. Качественные реакции на инсулин

 

Инсулин является белково-пептидиым гормоном, дает характерные цветные реакции на белок. Для качественных реакций используют готовый препарат инсулина в ампулах. Для каждой реакции берут по 5 капель раствора и проделывают биуретовую реакцию и реакцию Фоля (на SH-группы).

Работа 2. Качественные реакции на адреналин.

 

Реакция с хлорным железом

В молекуле адреналина пирокатехиновое ядро образует с ионами железа соединения типа фенолята:

Ход работы

К 3 каплям раствора адреналина прибавляют каплю 1%-ного раствора хлорного железа. Появляется зеленая окраска. После добавления 1 капли 10%-ного раствора NaOH окрашивание становится вишнево-красным.

Реакция с йодатом калия.

 

Принцип реакции заключается в том, что адреналин легко окисляется с образованием окрашенного в красный цвет адренохрома:

Ход работы:

В пробирку вносят' 3 капли раствора адреналина (1:1000), добавляют по 2 капли 10%-ного раствора КО Юз и 10%-ного раствора уксусной кислоты (СНзСООН) и слегка нагревают Жидкость окрашивается в красно-фиолетовый цвет.

Работа 3. Качественная реакция на тироксин (открытие йода).

 

При разрушении тироксина щелочью образуется йодистый калий, из которого йод легко вытесняется йодноватокислым калием. Выделившийся свободный йод с крахмалом дает синее окрашивание.

Ход работы:

1. Щелочной гидролиз тиреоидина.

5 таблеток тиреоидина тщательно растирают в ступке, пересыпают в колбочку для гидролиза, добавляют 5 мл 10%-ного раствора КОН и 5 мл воды. Содержимое колбы кипятить в течение 10-15 мин.

2. Открытие йода в гидролизате.

К 1 мл охлажденного гидролизата добавляют по каплям 10% раствор H2SO4 до кислой реакции на лакмус, после чего прибавляют 3-4 капли 1 % крахмала и 5-10 капель 2%-ного раствора КГОз. Выделившийся йод дает синее окрашивание с крахмалом.

Работа 4. Количественное определение адреналина

В биологических жидкостях.

Принцип метода

Метод основан на колориметрическом определении интенсивности синего окрашивания, которое образуется при взаимодействии адреналина с реактивом Фолина.

Ход работы

В 2 центрифужные пробирки (опыт и контроль) вносят по 1 мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В опытную пробирку приливают 0,1 мл сыворотки, плазмы крови или 0,5 слюны. В контрольную - такой же объем дистилированной воды. Смесь взбалтывают и центрифугируют при 2000-3000 об/мин. в течение 5-6 мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают в чистую пробирку, добавляют 4 мл 10% раствора углекислого натрия и 0,5 мл реактива ФолЯ; Развивается синее окрашивание, интенсивность которого измеряют с красным светофильтром в кювете на 10 мм против контроля.

Количество адреналина в пробе определяют по калибровочной кривой с 10, 15 и 20 мкг адреналина в 0,1 (или 0,5 при определении в слюне) мл воды и выражают в мкг на литр биологической жидкости.

У здорового человека в плазме (сыворотке) крови и слюне содержится соответственно 100-230 и 0-30 мкг/л адреналина.

В период эмоционального (или физического) напряжения, у больных феохромоцитомой (опухоль мозгового слоя надпочечников) содержание гормона возрастает в 2-4 и 10-20 раз соответственно.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

 

1.1.– А

1.2. – В

2.1. – 1-Г; 2-А; 3-Б; 4-В

2.2.– 1-А,В; 2-Б,Г; 3-А,В; 4-А,В

3.1.–1,3

3.2.– 1.2,3

4.1.– С (+ - -)

4.2.– А (+ + +)