Структура белка – стабилизирующие связи.

1 - аминокислотная последовательность(первичная структура) 2 - β - складчатый лист (вторичная структура) 3 - трехмерная глобула (третичная структура) 4 - взаимодействие протомеров

а) пептидная б) дисульфидная в) водородная г) гидрофобная д) электростатическая

Задание 3. Подберите сочетания правильных ответов.

3.1. N-концевую аминокислоту позволяют определить…

1) гидразин

2) динитрофторбензол

3) карбоксипептидаза

4) фенилизотиоцианат

5) Восстанавливающие агенты (NаВН₄ )

3.2. … появляются в белках только в результате постсинтетической модификации?

1. изолейцин

2. g-карбоксиглутамат

3. треонин

4. гидроксилизин

5. метионин

Задание 4. Определите правильность утверждений в предложении и установите наличие причинной связи между ними.

4.1. При установлении аминокислотной последовательности проводится кислотный, а не основный гидролиз белка, так как в щелочной среде происходит разрушение некоторых аминокислот.

4.2. Длительное голодание сопровождается гипопротеинемией и, как следствие, отеками, потому что белки плазмы крови, будучи сильно гидрофильными, обеспечивают большую часть осмотического давления крови.

Примеры ситуационных задач

Задача 1.

Подавляющее большинство протеиногенных аминокислот дают синее окрашивание с нингидрином, а пролин и оксипролин – желтое. Объясните это различие, принимая во внимание химизм нингидриновой пробы и особенности структуры протеиногенных аминокислот.

Задача 2.

Одним из наиболее распростаненных трипептидов животных, растительных и бактериальных клеток является глутатион. Функции глутатиона (глу-цис-гли) разнообразны: участвует в транспорте аминокислот, инактивации инсулина, является источником ά-аминоазота в головном мозге. предохраняет ряд белков со свободными тиольными группами от окисления. Объясните участие глутатиона в окислительно-восстановительных процессах, учитывая его строение.

Самостоятельная работа студентов

Выпишите принцип метода, его клинико-диагностическое значение и порядок проведения работы, оставляя место для расчетов и вывода.

Работа 1. Количественное определение белка

Сыворотки крови биуретовым методом.

 

Сыворотка крови содержит смесь белков, различных по физиологическому значению, структуре и физико-химическому свойству. Нормальное содержание белка в сыворотке крови взрослого человека 65-80 г/л, у детей до 6 месяцев 48-56 г/л.

Изменение содержания белка в сыворотке крови может свидетельствовать о различных нарушениях. Снижение содержания белка (гипопротеинемия) может наблюдаться при потерях белка, при белковом голодании или при снижении процессов биосинтеза белка в результате различных заболеваний (интоксикации, злокачественных новообразований, хронических заболеваний). Повышенное содержание белка (гиперпротеинемия) бывает редко, это может быть при сгущении крови из-за значительной потери жидкости (длительная рвота, ожоговая болезнь), при наследственных заболеваниях - парапротеинемиях.

Одним из методов количественного определения суммарного белка сыворотки крови является биуретовый метод, который основан на способности белков, содержащих пептидные связи, образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в растворе.

Техника выполнения работы

В пробирку налить 0,1 мл исследуемой сыворотки, в другую (контрольную) пробирку–0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия. В обе пробирки добавить по 5,0 мл биуретового реактива (ионы Сu⁺⁺ в щелочной среде). Содержимое обеих пробирок перемешать. Через 30 мин. измерить экстинкцию исследуемого раствора на ФЭКе в кювете толщиной 1 см при длине волны 540-560 нм (зеленый светофильтр) против контрольного раствора.

Содержание белка в сыворотке крови (в г/л) найти по калибровочному графику, который построен с заранее известными концентрациями стандартного белка и выражает зависимость между количеством белка в крови и оптической плотностью (экстинкцией) окрашенного раствора.

Построение калибровочного графика.

Для этого применяют стандартный белок – альбумин сыворотки крови. Из 10% стандартного раствора альбумина в 4 пробирках готовят растворы белка (см. таблицу).

№ пробирки	Стандартный 10% р-р альбумина, мл	0,9% раствор хлорида натрия, мл	Концентрация белка, г/л
	0,4	0,6
	0,6	0,4
	0,8	0,2
	1,0	–

Из каждой пробирки берут по 0,1 мл раствора, добавляют к нему 5,0 мл биуретового реактива. Через 30 мин. измеряют экстинкцию на ФЭКе против контрольного раствора (0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и

5 мл биуретового реактива).

Полученные значения откладывают на оси ординат, а концентрацию белка (в г/л) на оси абсцисс.

Фотоэлектроколориметр

Для измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов по отношению к растворителю или стандартному раствору предназначен фотоэлектрический колориметр (ФЭК).

В основу работы этого прибора положен принцип уравнения интенсивности двух световых пучков, проходящих через оптические среды, при помощи переменной щелевой диафрагмы.

Световые лучи от лампы, отразившись от зеркал, проходят через светофильтры, кюветы и попадают на фотоэлементы, которые подключены к гальванометру. Так что при равенстве интенсивности падающих на фотоэлементы световых пучков стрелка гальванометра стоит на нуле.

При вращении барабана диафрагма, связанная с ним, меняет свою ширину и тем самым величину светового потока, падающего на фотоэлемент.

Фотометрически нейтральный клин служит для ослабления светового потока, падающего на фотоэлемент.

Способ измерения.

1. В пучок света помещают кюветы с контрольным раствором.

2. Вращением ручки круговых фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль.

3. Затем в пучок света вводится кювета с исследуемым раствором, при этом стрелка гальванометра отклоняется от нулевого положения. Снимается показание.

4. Прибор после окончания работы выключить. Осторожно промыть кюветы.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

 

1.1. – в

1.2. – в (a-углеродный атом ®карбонильный углерод®амидный азот®a-углеродный атом)

Б; 2-д; 3-в; 4,6 – г; 5,7,8 – а

2.2. – 1-а; 2-в; 3-б, в, г, д; 4- г, в, д

3.1. – 1,3

3.2. – 1,3

4.1. – А (+ + +)

4.2. – А (+ + +)