Выделение нуклеопротеинов из дрожжей

 

Реактивы: дрожжи пекарские, прессованные; 1 %–й раствор гидроксида натрия; ацетат натрия; речной песок, тщательно промытый и прокаленный.

Оборудование: ступка с пестиком; воронка для фильтрования, химические стаканы; стеклянная палочка.

Ход работы

1. К 6 гпекарских дрожжей добавьте 2 см³ воды, немного песка и полученную смесь разотрите в ступке с 1 %–м раствором гидроксида натрия. Раствор щелочи добавляйте небольшими порциями (по 2 – 3 см³), всего расходуйте около 25 см³. Массу дрожжей растирайте около 15–20 мин до получения гомогенной массы.

2. Содержимое ступки профильтруйте через складчатый фильтр и перелейте в стакан.

3. Затем в стакан добавьте5 гацетата натрия и, перемешивая стеклянной палочкой, растворите его.

4. По стенке стакана осторожно наслоите 25 мл этанола. Медленно круговыми движениями перемешайте жидкости. Образуются крупные хлопья нуклеопротеинов, которые постепенно осаждаются на дно стакана.

5. Отделите осадок нуклеопротеинов фильтрацией на бумажном фильтре или декантацией. Полученные нуклеопротеины сохраните для следующего опыта.

Оформление результатов

Опишите ход выполнения работы.

Гидролиз нуклеопротеинов

 

При выполнении данной работы следует соблюдать особую осторожность!

Гидролиз нуклеопротеинов протекает в кислой среде по нижеприведенной схеме.

Реактивы: осадок нуклеопротеинов, полученный в предыдущей работе; 5 %–й раствор серной кислоты; концентрированная серная кислота; 10 %–й раствор гидроксида натрия; 20–25 %–й раствор аммиака; 1 %–й раствор сульфата меди; 1 %–ый спиртовой раствор тимола; 1 %–й раствор нитрата серебра; молибденовый реактив (3,75 г молибдата аммония растворяют в 50 см³ воды и добавляют 50 см³32 %–го раствора азотной кислоты (плотностью 1,200 г/ см³).Полное растворение молибдата аммония происходит при добавлении кислоты).

Оборудование: круглодонная колба с обратным холодильником; электрическая плитка; воронка для фильтрования; индикаторная бумага; бумажный фильтр.

Ход работы

Задание 1. Гидролиз нуклеопротеинов.

1. Осадок нуклеопротеинов, полученный в предыдущей работе, растворите в 25 см³ 5 %–го раствора серной кислоты и перенесите в круглодонную колбу.

2. Колбу закройте пробкой с обратным холодильником. Реакционную смесь нагрейте на электрической плитке до кипения и кипятите в течение 1,5 ч.

3. Смесь охладите и профильтруйте через бумажный фильтр. С фильтратом проделайте реакции нижеследующих заданий.

Задание 2. Обнаружение полипептидов.

1. К 2 см³ фильтрата прилейте 2 см³ 10 %–го раствора щелочи и 2 капли раствора сульфата меди. Образуется характерное для полипептидов окрашивание.

Задание 3. Обнаружение пуриновых оснований.

1. К 5 каплям 1 %– го раствора нитрата серебра приливайте концентрированный раствор аммиака до растворения образовавшегося вначале осадка.

2. В другую пробирку влейте 2 см³ фильтрата (задание 1) и приливайте к нему концентрированный раствор аммиака до щелочной по индикаторной бумаге реакции.

3. Во вторую пробирку влейте содержимое первой пробирки. Через несколько минут выпадают хлопья солей пуриновых оснований.

Задание 4. Обнаружение пентоз.

1. К 1 см³ фильтрата добавьте 2–3 капли 1 %–го раствора тимола и по стенке пробирки ОСТОРОЖНО наслоите

1 см³ концентрированной серной кислоты. Жидкость окрашивается в красный цвет.

Задание 5. Обнаружение фосфорной кислоты.

1. К 1 см³ фильтрата прилейте равный объем молибденового реактива.

2. Содержимое пробирки нагрейте до кипения и кипятите в течение 2–3 минут. Появляется желтое окрашивание, обусловленное образованием комплексной соли. При стоянии выпадает желтый осадок.

Оформление результатов

Опишите ход выполнения работы, опишите компоненты входящие в состав нуклеопротеинов.