Методи видобування ембріонів

Ефективність трансплантації ембріонів у значній мірі залежить від досконалості застосованого методу видобування їх з геніталій донора. Із сказаного вище можна зробити висновок, що на 4-5-ту добу основна кількість ембріонів у великої рогатої худоби попадає в ріг матки. Проте суперовуляція значно розтягується в часі і не всі ембріони одночасно з'являються у розі матки, частина з них може затримуватися в яйцепроводі до 8-го дня. Поступово ембріони переміщаються від верхівки рогу матки до його середньої і передньої частини.

Рис. 43. Запліднення і ранні стадії розвитку ембріона у яйцепроводі самки: 1 - фолікул, що овулював; 2 - яйцеклітина, оточена про­меневим вінцем; 3 - розсіювання променевого вінця; 4 - проникнення спермія крізь прозору оболонку; 5 - ста­дія двох пронуклеусів; 6 - зигота; 7-9 - стадії двох, чоти­рьох та восьми бластомерів.

Змінюється з часом і життєздатність ембріонів. У яйцепроводі практично всі вони бувають нормальними, проте в міру переміщення їх у матку і збільшення строку пе-

Рис. 44. Гумовий катетер для нехірургічного вимивання ембріонів:

 

1 - гумова трубка; 2 - надувна кулька; 3 - отвори для введення та виведення рідини; 4 - гумова "заглушка"; 5 - сталевий стилет; 6, 7 - надувний канал; 8 - розширення каналу; 9 - зовнішній кінець катетера із замковим вузлом (10).

ребування їх в умовах маткового середови­ща (що не повністю відповідає віку усіх ембріонів), зростає кількість дегенерова- них ембріонів.

До середини 70-х років ембріони у корів видобували головно хірургічним методом, вимиваючи їх з яйцепроводу чи рогу матки, залежно від часу вимивання. При цьому користу­валися одним з трьох доступів: розрізом

верхнього склепіння піхви з використанням спеціального приладу (ефеменатора) або без нього; лапаротомією по білій лінії живота із застосуванням наркозу; лапаротомією з боковим розрізом в ділянці голодної ямки під місцевою анестезією.

Із запропонованих для хірургічного видобування ембріонів інструментів найпри- датнішим виявився прилад Роуса і Даулінга, основою якого є гумовий катетер з на­дувною кулькою в кінцевій частині, привідним та відвідним каналом.

Згодом запропоновано досконаліші металеві, гнучкі, пластмасові та гумові катетери. Найширшого розповсюдження набув двоканальний урологічний катетер Фолея, в про­світ якого перед застосуванням встановлюють гнучкий металевий стилет (рис. 44).

Для вимивання ембріонів користуються розчинами, які подібні за своїм складом до секрету матки (рідина Дюльбекко, середовища Ігла, Паркера, ТМС-199, Хема-10, Протасова, Менезо та ін.). Найбільш розповсюдженим є фосфатно-буферне сере­довище (ФБС) Дюльбекко, до 1 л якого перед застосуванням додають 40 г бичого альбуміну, 1,0 г глюкози, 0,036 г пірувату натрію та 100 тис. ОД пеніциліну (калієва сіль). Осмотичний тиск розчинів повинен бути 300 міліосмоль, рН 7,2-7,6.

Хірургічне видобування ембріонів з рогів матки шляхом лапаротомії по білій лінії. Витримують тварину два дні на голодній дієті, вводять їй внутрішньом'язово для заспокоєння ромпун чи комбелен. Фіксують на операційному столі в спинному положенні і проводять операцію під загальним наркозом. Підготувавши операційне поле, розрізають черевну стінку по білій лінії довжиною 15-20 см спереду молочної залози, виводять назовні один ріг матки з яйцепроводом і яєчником і підраховують в ньому кількість жовтих тіл. Фіксують тіло матки в раневому отворі, проколюють стін­ку рога матки біля біфуркації гострим гемостатичним пінцетом і вводять через утво- рений отвір стерильний катетер Фолея з надувною кулькою, нагнітають в неї повітря і приступають до вимивання ембріонів матковим чи матково-трубним методом. В пер­шому випадку проколюють верхівку рога матки тупою голкою з оливою для введення промивної рідини і вводять у просвіт рога порційно 120-140 мл рідини Дюльбекко. Збирають промивну рідину через катетер Фолея в стерильну посудину. Аналогічно чинять з другим рогом матки.

При матково-трубному промиванні (застосовується на 3-5-й день після осіменін- ня) тупу голку з еластичним шлангом вводять в ампульну частину яйцепроводу і про­мивають так же.

Закінчивши промивання, опускають матку на своє місце, перевіряють правиль­ність розміщення її рогів, зрошують черевну порожнину фізіологічним розчином, впорскують у неї 1 млн ОД пеніциліну та стрептоміцину, розчинених в 20 мл новока­їну. Накладають кетгутні шви на очеревину, м'язи разом з підшкірною клітковиною, припудрюють поверхню рани порошком трициліну, накладають шовковий шов на шкіру, обробляють її 10 %-ним розчином йоду і обробляють клейовим аерозолем.

Хірургічне видобування ембріонів з рогу матки через лапаротомію в області голодної ямки (справа чи зліва). Даний метод значно простіший, менш трудомісткий і може проводитися під місцевою анестезією. Премедикація у даному випадку вклю­чає внутрішньом'язове введення ромпуна, епідуральну ін'єкцію новокаїну, паралюм- бальну та інфільтраційну анестезію 20 %-ним розчином новокаїну по лінії розрізу.

Фіксують тварину в станку, готують операційне поле і роблять вертикальний розріз шкіри, підшкірної клітковини та м'язового шару довжиною 15 см на віддалі 8 см спе­реду лінії колінного суглоба між зовнішнім горбом клубової кістки і заднім краєм ре­бра, на 10 см нижче поперечно-реберних відростків поперекових хребців. Підтягують гемостатичним пінцетом очеревину, розрізають її ножицями, розширюють розріз паль­цями і вводять руку в черевну порожнину. Захоплюють великим та вказівним пальцями один ріг матки, підтягують його у просвіт розрізу, підраховують кількість жовтих тіл та проводять вимивання ембріонів спочатку з одного, а тоді з другого рога матки, як описано вище. Завершують операції так же, як при лапаротомії по білій лінії живота.

Кращих результатів досягають при вимиванні ембріонів з рога матки з боку роз­різу, оскільки до протилежного рога важко добратися.

Після операції залишають тварину під наглядом протягом двох тижнів, після чого знімають шви.

Хірургічний метод видобування ембріонів через розріз верхнього склепіння піхви (трансвагінальний метод). Фіксують тварину в станку і підраховують (рек­тально) кількість жовтих тіл у кожному яєчнику, наводять туалет перинеальної об­ласті, проводять епідуральну анестезію, забинтовують корінь хвоста, відводять його набік і зрошують внутрішню поверхню піхви 2 %-ним розчином діоциду.

Старанно миють і обробляють руки, беруть скальпель, затискають його між скла­деними конусом пальцями і вводять руку в піхву. Роблять з одного боку шийки матки дорзоназальний розріз склепіння піхви довжиною 2-3 см. Виймають з піхви скаль-
вливають в ріг матки теплу (37 °С) промивну рідину і відсмоктують її назад.

Вимивання ембріонів з геніталій вбитих тварин виявляється ефективним, якщо після забою пройшло не більше 2-2,5 годин.