Реакции метаболической трансформации

Окисление

В ЭПР функционируют НАДФ•Н- и НАД•Н-зависимые дыхательные цепи. В НАДФ•Н-зависимой системе терминальным переносчиком электронов является цитохром Р- 450 — мембраносвязанный липофильный фермент группы многоцелевых монооксигеназ[2], гемопротеин, состоящий из белка и системы порфирина с трехвалентным железом. буква Р в названии происходит от слова пигмент, число 450 означает, что восстановленный, связанный с окисью углерода цитохром максимально поглощает свет с длиной волны 450 нм.

Цитохром Р- 450 глубоко погружен в липидный бислой мембраны ЭПР и функционирует совместно с НАДФ•Н-зависимой цитохром Р- 450-редуктазой (коферменты — флавинадениндинуклеотид и флавинаденин-мононуклеотид). Соотношение количества молекул цитохрома Р- 450 и редуктазы составляет 10:1. Активный центр этих ферментов ориентирован на цитоплазматическую поверхность ЭПР. Цикл окисления лекарственных средств при участии цитохрома Р- 450 состоит из следующих реакций (рис. 1):

· окисленный цитохром Р- 450 присоединяет лекарственное средство;

· бинарный комплекс цитохром — лекарство восстанавливается цитохром Р- 450-редуктазой, используя электрон НАДФ•Н;

· восстановленный комплекс цитохром Р- 450 — лекарство связывается с молекулярным (триплетным) кислородом;

· происходит активация кислорода электроном НАДФ•Н (триплетный кислород становится синглетным);

· на финальном этапе один атом кислорода включается в молекулу окисляемого лекарственного средства, второй — включается в молекулу воды;

· цитохром Р- 450 регенерирует в исходную окисленную форму.

НАД•Н-зависимая электрон-транспортная цепь включает цитохром b₅, НАД•Н-цитохром b ₅-редуктазу и стероид-КоА-десатуразу. Гемсодержащий фермент цитохром b₅ представляет собой двухдоменный белок. Глобулярный цитозольный домен связывается с редуктазой, короткая спирализованная гидрофобная цепь погружена в мембрану ЭПР. Электроны от НАД•Н переносятся редуктазой на окисленное железо цитохрома b_s. Стероил-Ко А -десатураза катализирует образование двойных связей в жирных кислотах.

Суперсемейство цитохромов Р- 450 поражает своими почти неограниченными метаболическими возможностями. Оно включает более 1000 клонированных вариантов, способных катализировать около 60 типов энзиматических реакций с тысячами потенциальных субстратов. В клетках человека обнаружено 17 семейств цитохрома Р- 450, разделенных на 39 подсемейств. Изоферменты обозначаются следующим образом: первая цифра обозначает семейство, затем латинская буква указывает на подсемейство, последняя цифра соответствует конкретному изоферменту. В молекулах изоферментов одного семейства идентичны более 40 % аминокислот, в молекулах одного подсемейства — более 55 %.

Метод фенотипирования позволяет установить субстратную специфичность изоферментов цитохрома Р- 450 по соотношению концентраций неизмененного вещества и его метаболитов в крови. Методом генотипирования с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) изоферменты идентифицируют по их генам, так как каждый изофермент кодируется одним из 53 генов, локализованных в разных локусах хромосом. Большинство реакций катализируют изоферменты цитохрома Р-450 семейств 1, 2 и 3 (рис. 2, табл. 7).

Реакция окисления ксенобиотиков при участии цитохрома Р-450 расщепляется с образованием свободных радикалов кислорода и токсических промежуточных продуктов (эпоксиды, N-, S-окиси, альдегиды). свободные радикалы и активные интермедиаты, инициируя перекисное окисление мембранных липидов, вызывают некроз клеток, появление неоантигенов, тератогенный, эмбриотоксический эффекты, мутации, канцерогенез и ускорение старения. По этой причине не существует абсолютно безвредных ксенобиотиков.

Таблица 7. Содержание изоферментов цитохрома Р-450 в печени человека, их вклад в окисление лекарственных средств, локализация в хромосомах, индукторы и ингибиторы

Изоферменты цитохрома Р- 450	Содержание в печени, %	Вклад в окисление, %	Локус в хромосоме (первая цифра — номер хромосомы)	Индукторы	Ингибиторы
1А1	<1	2,5	15q22-q24	Полициклические ароматические углеводороды (в легких преобразуются в канцерогенные метаболиты)
1А2		8,2	15q22-qter	Фенобарбитал, гексамидин, дифенин, рифампицин, полициклические ароматические углеводороды, никотин	Амитриптилин, имипрамин, такрин, мексилетин, верапамил, дилтиазем, тиклопидин, эритромицин, кларитромицин, фторхинолоны (ципрофлоксацин, норфлоксацин, эноксацин), препараты интерферона, фурацилин
1В1	<1	Не установлен	2q22-q22
2А6		2,5	19q13.2	Фенобарбитал	Ритонавир
2В6	<1	3,4	19q13.2	Фенобарбитал, гексамидин, дифенин	Орфенандрин
2С8	Не установлено	Не установлен	10q24.1	Фенобарбитал, гексамидин
2С9		15,8	10q24.1-24.3	Дифенин, рифампицин	Бутадион, диклофенак, кетопрофен, амиодарон, флувастатин, зафирлукаст, тетурам, сульфаметоксазол, дапсон
2С18	Не установлено	Не установлен	Локус в хромосоме 10		Циметидин
2С19		8,3	10q24.1-24.3	Фенобарбитал, гексамидин, дифенин, рифампицин	Имипрамин, флувоксамин, флуоксетин, омепразол
2D6	2,5	18,8	22q13.1		Тиоридазин, галоперидол, имипрамин, кломипрамин, флувоксамин, флуоксетин, пароксетин, сертралин, хинидин, пропафенон, амиодарон, циметидин
2Е1		4,1	10q24.3qter	Этиловый спирт, пиразол, пиридин	Тетурам, ритонавир
ЗА4		34,1	7q22.1	Фенобарбитал, гексамидин, дифенин, карбамазепин, глюкокортикоиды, рифампицин, рифабутин, сульфинпразон	Флуоксетин, флувоксамин, пароксети н, хинидин, дилтиазем, циметидин, зафирлукаст, эритромицин, кларитромицин, флуконазол, итраконазол, клотримазол, индинавир, нелфинавир, метронидазол
ЗА5	Не установлено		7q22.1	Фенобарбитал, гексамидин, дифенин, рифампицин	Кетоконазол, клотримазол, миконазол, метронидазол

 

Токсические продукты биотрансформации обезвреживаются конъюгацией с восстановленным глутатионом и ковалентным связыванием с альбуминами. Повреждение молекулы альбумина не опасно для организма, так как этот белок синтезируется в печени со скоростью 10 — 16г в сут. и присутствует в высоких концентрациях в ЭПР.

Ксенобиотики в процессе окисления могут разрушать цитохром Р- 450. Такие вещества получили название «суицидные субстраты». Свойствами «суицидных субстратов» обладают четыреххлористый углерод, фторотан, парацетамол, преобразуемые цитохромом Р- 450 в свободные радикалы. Их эффект можно рассматривать не только как токсический, но и как защитный — элиминируются молекулы цитохрома Р- 450, генерирующие реакционноспособные метаболиты.

Восстановление

Реакции восстановления характерны для альдегидов, кетонов и карбоновых кислот. В ряде случаев восстановление и окисление катализируются одним и тем же ферментом и являются обратимыми (восстановление — окисление продукта метаболизма спирта этилового — уксусного альдегида). Восстанавливаются окисленные метаболиты лекарственных средств — кетоны и карбоновые кислоты (фенамин превращается в фенилизопропанол через стадию фенилацетона).

Ароматические соединения, содержащие нитрогруппу, подвергаются в анаэробных условиях нитроредукции. Промежуточные продукты этой реакции — нитрозо- и гидроксиламиносоединения. В печени функционируют микросомальная и цитоплазматическая нитроредуктазы, в кишечнике — бактериальная нитроредуктаза.

Лекарственные средства с азогруппой восстанавливаются в первичные амины в микросомах печени и кишечной микрофлорой, например, салазопиридазин, применяемый для терапии неспецифического язвенного колита, расщепляется по азосвязи с освобождением сульфапиридазина и кислоты 5-аминосалициловой.

Гидролиз

Гидролиз необходим для биотрансформации лекарственных средств, имеющих строение сложных эфиров и замещенных амидов. Происходит в цитозоле и ЭПР эпителия кишечника и гепатоцитов, а также в крови при участии эстераз и амидаз. При гидролизе молекулы лекарственных средств распадаются на фрагменты, один из которых — кислотный или спиртовый — может проявлять фармакологическую активность.

В медицине используют пролекарства, активируемые гидролазами организма, например, левомицетина стеарат, не обладающий горьким вкусом левомицетина, в кишечнике освобождает активный антибиотик.

Растворимый препарат для инъекций левомицетина сукцинат образует левомицетин под влиянием гидролаз тканей.

 

Таблица 8. Изоферменты УДФ-глюкуронилтрансферазы, их субстраты, локализация генов изоферментов

Изоферменты	Субстраты	Локализация генов
хромосома	локус
U G T1A1	Билирубин, бупренорфин		1q21-q23
U G T1A2P	—
U G T1A3	—
U G T1A4	Имипрамин, амитриптилин, доксепин, хлорпромазин, ламотриджин, ципрогептадин, кетотифен
U G T1A5	—
U G T1A6	Парацетамол, ибупрофен, буметанид, вальпроаты, фенол
U G T1A8	Пропофол
U G T12B4	Хиодезоксихолевая кислота		4q13
U G T12B7	Морфин, ибупрофен, кетопрофен, фенопрофен, оксазепам
U G T12B8	Андростендиол
U G T12B9	—
U G T12B10	—
U G T12B11	—
U G T12B15	—

Конъюгация

Наибольшее значение имеет глюкуронирование — присоединение активированной уридиндифосфатом (УДФ) глюкуроновой кислоты к алифатическим, ароматическим спиртам, карбоновым кислотам, веществам с аминогруппой и сульфгидрильной группой. Глюкуронирование катализирует УДФ-глюкуронилтрансфераза. Этот фермент функционирует в ЭПР и цитозоле клеток печени, почек, кишечника, кожи. Семейство глюкуронилтрансфераз включает более 20 изоферментов.

О-, N- и S-глюкурониды хорошо растворяются в воде и подвергаются экскреции с мочой и желчью. Глюкурониды, экскретируемые с желчью, в кишечнике под влиянием фермента бактерий β - глюкуронидазы превращаются в исходные липофильные вещества и повторно всасываются в кровь, что дает начало энтерогепатической циркуляции (сердечные гликозиды наперстянки, левомицетин).

 

Таблица 9. Реакции трансформации ксенобиотиков

Реакции	Примеры лекарственных средств
ОКИСЛЕНИЕ
Алифатическое гидроксилирование   Ароматическое гидроксилирование     О-деалкилирование     N-деалкилирование   Окислительное дезаминирование		Этаминал, ибупрофен, бутамид, циклоспорин     Фенобарбитал, дифенин, бутадион, анаприлин   Кодеин, индометацин   Морфин, кодеин, сибазон, имипрамин, теофиллин, эритромицин   Норадреналин, адреналин, гистамин, сибазон, фенамин
ВОССТАНОВЛЕНИЕ
Восстановление альдегидов, кетонов, кислот   Нитроредукция   Азоредукция		Варфарин     Нитразепам, левомицетин, нитрофураны, метронидазол   Салазопиридазин
ГИДРОЛИЗ
Гидролиз эфиров     Гидролиз амидов		Кислота ацетилсалициловая, новокаин, дитилин     Лидокаин, новокаинамид, индометацин
КОНЪЮГАЦИЯ
Глюкуронирование		Морфин, парацетамол, сибазон
Сульфатирование		Парацетамол, метилдопа, стероиды
Ацетилирование		Клоназепам,апрессин, cульфаниламиды, изониазид
Метилирование		Норадреналин, адреналин, морфин, гистамин

 

Сульфатирование представляет собой перенос неорганического сульфата от 3'-фосфоаденозил-5'-фосфосульфата на гидроксил алифатических спиртов и фенолов при участии фермента цитозоля — сульфотрансферазы.

Некоторые лекарственные средства в малых дозах образуют сульфоконъюгаты, в больших дозах — глюкурониды.

При ацетилированш уксусная кислота ацетилкоэнзима А присоединяется к аминам, гидразинам, сульфаниламидам. Реакция катализируется ацетилтрансферазой цитозоля клеток. Ацетилированные метаболиты плохо растворяются в воде и элиминируются медленно.

Метилирование — перенос метила от S-аденозилметионина на лекарственное средство под влиянием метилтрансферазы. Это единственная реакция, которая не сопровождается образованием полярных метаболитов.

В последнее время установлено, что в реакциях конъюгации могут появляться токсические метаболиты — N-сульфоэфиры, N-ацетоксиариламины. Они алкилируют ДНК и вызывают мутагенез и канцерогенез.

Примеры реакций биотрансформации ксенобиотиков приведены в табл. 9.