Применение ПЦР в клинической практике

Наиболее широко молекулярно-биологические методы используются в микробиологии, вирусологии и в онкологии.

В микробиологии и вирусологии этим методом определяют клинически важные виды бактерий, грибов, вирусов, а также оценивают их вирулентность и устойчивость штаммов к лекарствам. Применение ПЦР как метода микробиологической диагностики имеет ряд преимуществ по сравнению с традиционными методами:

· Прямое определение наличия возбудителей

· Высокая чувствительность

Чувствительность ПЦР тест-систем составляет 10–1000 клеток возбудителя в анализируемой пробе, в то время как чувствительность иммунологических, паразитологических тестов колеблется в пределах 10³–10⁵ клеток.

Следует, однако, отметить, что высокая чувствительность ПЦР создает и определенные клинические проблемы. В частности, встает вопрос о клиническом значении выявляемых ПЦР чрезвычайно низких количеств патогена. Кроме того, метод ПЦР сложно использовать для мониторирования эффективности терапии, в связи с тем, что метод детектирует как живые, так и погибшие микроорганизмы.

· Высокая специфичность

Высокая специфичность метода обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного вида фрагмент ДНК либо РНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью специфических праймеров и специально отрабатываемыми жесткими условиями их присоединения или «отжига» к искомой молекуле ДНК.

· Простота исполнения, возможность полной автоматизации и быстрота получения результатов

· Использование для анализа непосредственно клинического и патологического материала

Метод ПЦР позволяет проводить определение возбудителя заболеваний непосредственно в клиническом материале (кровь, мазки, смывы, соскобы, слюна, мокрота, спинномозговая жидкость, желудочный сок, биоптаты и т.д.). Для проведения анализа не требуется выделения и выращивания культуры возбудителя.

· Малое количество используемого материала для исследований

Количество исследуемого материала может составлять несколько десятков микролитров, так как в результате проведения ПЦР концентрация анализируемого участка ДНК (РНК) выявляемого возбудителя увеличивается в сотни и тысячи раз.

· Возможность выявления некультивируемых, труднокультивируемых или персистирующих форм патогенных организмов

Особенно это важно при обследовании серонегативных пациентов на самых ранних стадиях развития патологического процесса, когда лечение наиболее эффективно. При диагностике с помощью ПЦР достигается размножение не тестируемого организма, а только специфического фрагмента его ДНК, являющегося маркерным для данного вида.

· Исключение возможности инфицирования персонала в процессе проведения ПЦР

Исследуемый материал может быть дезинфицирован химической или термической обработкой в момент его взятия, следовательно, исключается возможность инфицирования персонала в процессе проведения ПЦР.

В онкологии метод используется для поиска клинически значимых маркеров злокачественности и определения их количества у пациентов, для определения микрометастазов и минимальной остаточной болезни, а также для контроля за результатами терапии. Метод хорошо зарекомендовал себя как очень чувствительный (~1 раковая клетка на 10⁶ нормальных клеток) и высокоточный метод для детекции раковых клеток в жидкостях организма.

В акушерстве перспективно использование ПЦР в предимплантационной и пренатальной диагностике, скрининге новорожденных. В терапевтической практике – для оценки генетической предрасположенности к различным заболеваниям, генотипирования ферментов метаболизма лекарственных средств и выявления степени чувствительности или резистентности к определенным препаратам.

 

ПЦР в реальном времени

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (real-time PCR) – реакция, в ходе которой детекция продуктов ПЦР происходит непосредственно во время амплификации по мере накопления в каждом цикле, то есть в режиме реального времени.

Преимущества real-time PCR:

· возможность размещения в одной комнате;

· исключение контаминации продуктами реакции;

· снижение трудозатрат;

· быстрота выполнения;

· параллельная детекция до 4-х возбудителей в одном образце.

Для постановки ПЦР в реальном времени необходим специальный прибор, в котором одновременно проводится амплификация, гибридизация с флуоресцентным зондом и детекция результатов по флуоресцентному свечению метки.

Для детекции продуктов амплификации используют 2 основных подхода:

· Интеркалирующие красители. Принцип – флуоресценция метки (бромистого этидия) значительно возрастает при внедрении в двойную цепь молекулы ДНК, а, следовательно, дает возможность наблюдать накопление продуктов амплификации.

· Использование ДНК-зондов, в состав которых входят флюоресцентная метка и гаситель флюоресценции. Когда зонд находится в растворе, гаситель поглощает испускаемое меткой излучение и свечение отсутствует. Когда в ходе ПЦР происходит присоединение ДНК-зонда к комплементарной цепи ДНК, происходит разъединение метки и гасителя, что приводит к увеличению детектируемого свечения (рисунок 4.19). Чем больше ампликонов наработано, тем интенсивнее флюоресценция.

Рисунок 4.19 – Схема работы ДНК-зонда (пояснения в тексте)

В настоящее время real-time PCR считается наиболее чувствительным способом для определения количества специфической нуклеиновой кислоты в сложном биологическом образце. Метод позволяет определять относительное и абсолютное количество последовательности-мишени в широком диапазоне (7–8 порядков величины в сравнении с 3–4 порядками для традиционной ПЦР) при общей продолжительности анализа от 30 мин до 2 ч.

 

ПЦР in situ

Этот метод стал активно развиваться в последнее время, благодаря тому, что он, в отличие от ПЦР, проводимой в растворе, позволяет не только амплифицировать какую-либо последовательность ДНК, но и локализовать ее внутри клетки. По чувствительности метод сравним с ПЦР, проводимой в растворе. Исследование проводится с клеточным монослоем или срезом ткани, который после фиксации обрабатывают протеолитическими ферментами, а затем определяют продукты ПЦР. Метод очень перспективен в изучении латентных вирусных инфекций и оценке эффекта действия новых лекарственных средств на клеточном и молекулярном уровне.

 

Приложение I

 

Перевод общепринятых единиц в единицы СИ (Меньщиков В.В., 2002)

Аналит/параметр	Общепринятые единицы	Коэффициент перевода	Единицы СИ
в СИ	в общеприн. ед.
Адреналин	нг/л	5,46	0,183	пмоль/л
Адреналин (моча)	мкг/24часа	5,46	0,183	нмоль/сут
Адренокортикотропин	нг/л	0,220	4,541	пмоль/л
Альбумин	г/100мл		0,10	г/л
Альдостерон	мг/100 мл	27,74	0,036	пмоль/л
Амикацин	мкг/мл	1,71	0,585	мкмоль/л
δ - Аминолевулиновая кислота	мг/24часа	7,626	0,131	мкмоль/сут
Аммиак	мг/100 мл	0,587	1,703	мкмоль/л
3'-5'-циклический АМФ	нг/мл	3,04	0,329	нмоль/л
Аскорбиновая кислота	мг/100 мл	56,78	0,0176	мкмоль/л
Ацетилсалициловая кислота	мг/л	0,00724		ммоль/л
Белок	мг/100 мл	10,0	0,1	г/л
Белок (моча)	мг/г креатинина	0,113	8,85	г/моль креатинина
Билирубин	мг/lW мл	17,1	0,0585	мкмоль/л
Вальпроевая кислота	мг/л	6,93	0,144	мкмоль/л
Ванилилминдальная кисл.	мг/24часа	5,03	0,199	мкмоль/сут
Ванкомицин	мкг/мл	0,690	1,449	мкмоль/л
Витамин А	мкг/100 мл	0,0349	28,65	мкмоль/л
Витамин В1	мкг/100 мл	33,3	0,03	нмоль/л
Витамин В6	нг/Мл	3,82	0,262	нмоль/л
Витамин В12	мг/100 мл	0,738	1.355	мкмоль/л
Витамин С	мг/100 мл	56,78	0,0176	мкмоль/л
25-гидрокси-Витамин Д	нг/мл	2,50	0,401	нмоль/л
Витамин Е (α - токоферол)	мг/100 мл	23.2	0,043	мкмоль/л
Галактоза	мг/100 мл	0,0555	18,02	ммоль/л
Галактоза (моча)	мг/24 часа	0,0055	180,2	ммоль/сут
Гаптоглобин	мг/100 мл	0,0100	100,00	г/л
Гемоглобин	мг/100 мл	0,621	1,61	мкмоль/л
Гентамицин	мкг/мл	2,09	0,478	мкмоль/л
5 Гидроксиндолилуксусная кислота	мг/24часа	5,23	0,191	мкмоль/сут
17-Гидроксикортикостероиды	мг/100 мл	27,9	0,036	мкмоль/л
17-Гидроксипрогестерон	нг/мл	3,03	0,330	нмоль/л
Гидроксипролин	мг/л	7,626	0.131	мкмоль/л
Глицерин	мг/100 мл	0,109	9.209	ммоль/л
Глюкоза	мг/100 мл	0,0555	18,02	ммоль/л
Гомоцистеиновая кислота	мг/л	7,41	0,135	мкмоль/л
Дигитоксин	мкг/л	1,31	0,763	нмоль/л
Дигоксин	мкг/л	1,28	0,781	нмоль/л
Дизопирамид	мг/л	2,95	0,339	мкмоль/л
Дофамин	нг/л	6,54	0,153	пмоль/л
Дофамин (моча)	мкг/24часа	6,54	0,153	нмоль/сут
Железо	мкг/100 мл	0,179	5.59	мкмоль/л
Железо (моча)	мкг/24часа	0,0179	55,9	мкмоль/сут
Железосвязывающая способность	мкг/100 мл	0,179	5,59	мкмоль/л
Инсулин	мкЕд/мл	7,241	0,138	пмоль/л
Калий	мг/100 мл	0,256	3,91	ммоль/л
Кальций	мг/100 мл	0,250	4,01	ммоль/л
Кальций (моча)	мг/24часа	0,025	40,1	ммоль/сут
Кальций (моча)	мг/г креатинина	0,00282		моль/моль креатинина
Кальцитонин	мг/л	0,28	3.57	пмоль/л
Карбамазепин	мг/л	4.23	0,236	мкмоль/л
Каротин	мкг/100 мл	0,0186	53.69	мкмоль/л
Копропорфирины	мкг/л	1,527	0,655	нмоль/л
Кортизол	мкг/100 мл	0,0276	36.25	мкмоль/л
Кортизол (моча)	мг/24часа	2,76	0.363	нмоль/сут
Кофеин	мкг/мл	5,15	0,194	мкмоль/л
Креатин	мг/100 мл	76,25	0,0131	мкмоль/л
Креатин (моча)	мг/24часа	0,0753		ммоль/сут
Креатинин	мг/100 мл	88,4	0,0113	мкмоль/л
Креатинин (моча)	г/24часа	8,84	0,113	ммоль/сут
Лактат	мг/100 мл	0,111	9,008	ммоль/л
Лейцин	мг/100 мл	76,3	0,0131	мкмоль/л
Лецитин	мг/100 мл	12,5	0,080	мкмоль/л
Лидокаин	мг/л	4,27	0,234	мкмоль/л
Магний	мг/100 мл	0,411	2,431	ммоль/л
Магний (моча)	мг/24часа	0,0411	24,31	ммоль/сут
Магний (моча)	мг/г креатинина	0,00465		моль/моль креатинина
Медь	мкг/100 мл	0,157	6,354	мкмоль/л
Медь (моча)	мг/24часа	0,0157	63,54	мкмоль/сут
Метгемоглобин (НЬ/4:М= 16114,5)	мг/100 мл	621,1	0,0016	мкмоль/л
Миоглобин	мг/100 мл	0,585	1,71	мкмоль/л
Мочевая кислота	мг/100 мл	59,5	0,0168	мкмоль/л
Мочевая кислота (моча)	г/24часа	5,95	0,168	ммоль/сут
Мочевая кислота (моча)	мг/г креатинина	0,00067		моль/моль креатинина
Мочевина	мг/100 мл	0,167	6,006	ммоль/л
Мочевина (моча)	г/24часа	16,7	0,06	ммоль/сут
Мочевина (моча)	г/г креатинина	1,88324	0,531	моль/моль креатинина
Натрий	мг/100 мл	0,435	2.30	ммоль/л
Натрий (моча)	г/г креатинина	4,90	0,204	моль/моль креатинина
Норадреналин	нг/л	5,91	0,169	пмоль/л
Норадреналин (моча)	мг/24часа	5,91	0,169	нмоль/сут
Оксалат (моча)	мг/24часа	11,4	0,088	мкмоль/сут
Оксигемоглобин	%	0,0100	100,00
Пируват	мг/100 мл	113,6	0,0088	мкмоль/л
Порфирин (моча)	мкг/24часа	1,2	0,833	нмоль/сут
Порфобилиноген	мг/л	4,42	0,226	мкмоль/л
Примидон	мг/л	4,58	0,218	мкмоль/л
Прогестерон	нг/мл	3,18	0,314	нмоль/л
Прокаинамид	мг/л	4,23	0,236	мкмоль/л
Пролактин	нг/мл	27,6	0,0362	мЕд/л
рС02	мм рт.ст.	0,133	7,502	кРа
р02	мм рт.ст.	0,133	7,502	кРа
Ртуть	мкг/л	0,0050	200,60	мкмоль/л
Салицилат	мг/л	0,00724		ммоль/л
Свинец	мкг/100мл	0,0483	20,72	мкмоль/л
Селен	мкг/л	0,0127	78,96	мкмоль/л
Сорбитол	мг/100 мл	54,9	0,018	мкмоль/л
Таллий	мкг/д	5,92	0,169	нмоль/л
Тестостерон	нг/мл	3,47	0,288	нмоль/л
Теофиллин	мг/л	5,55	0,180	мкмоль/л
Тироксин (Т4)	мкг100 мл	12,87	0,078	нмоль/л
Тироксин свободный (FT4)	мг/100 мл	12,87	0,078	пмоль/л
Тироксинсвязывающий глобулин	мкг/мл			мг/л
Тобрамицин	мг/л	2,14	0,467	мкмоль/л
Трансферрин	мг/100 мл	0,114	8,80	мкмоль/л
Триглицериды	мг/100 мл	0,0114	87,5	ммоль/л
Трийодтиронин (ТЗ)	нг/мл	1,536	0,651	нмоль/л
Трийодтиронин свободный (FТЗ)	пг/мл	1,536	0,651	пмоль/л
Уробилиноген	мг/100 мл	16,9	0,059	мкмоль/л
Фенилаланин	мг/100 мл	0,061	16,5	ммоль/л
Фенитоин	мг/л	3,96	0,252	мкмоль/л
Фенобарбитал	мг/л	4,31	0,232	мкмоль/л
Ферритин	нг/л			мкг/л
Флюорид	мкг/л	0,053	19,0	мкмоль/л
Фолиевая кислота	мкг/100 мл	22,66	0,0441	нмоль/л
Фосфат неорганический	мг/100 мл	0,3229	3,097	ммоль/л
Фосфат (моча)	г/24 часа	32,3	0,031	ммоль/сут
Фосфат (моча)	мг/г креатинина	0,00361		моль/моль креатинина
Фосфолипиды	мг/100 мл	0,0129	77,52	ммоль/л
Фруктоза	мг/100 мл	0,0555	18,02	ммоль/л
Фруктоза (моча)	мг/24 часа	0,0055	180,2	ммоль/сут
Хинидин	мг/л	3,08	0,325	мкмоль/л
Хлориды	мг/100 мл	0,282	3,545	ммоль/л
Хлориды (моча)	г/г креатинина	3,18	0,314	моль/моль креатинина
Хлорамфеникол	мкг/мл	3,09	0,323	мкмоль/л
Холестерин	мкг/100 мл	0,026	38,66	ммоль/л
Церулоплазмин	мкг/100 мл	0,0625		мкмоль/л
Цистин (моча)	мг/24 часа	8,34	0,12	мкмоль/сут
Цинк	мкг/100 мл	0,153	0,537	мкмоль/л
Цитрат	мкг/100 мл	52,1	0,019	мкмоль/л
Цитрат (моча)	мг/24часа	0,0052		ммоль/сут
Эстрадиол	пг/мл	3,67	0,272	пмоль/л
Эстриол	мкг/100 мл	34,68	0,0288	нмоль/л
Эстрон	мкг/100 мл	3,698	0,270	нмоль/л
Этанол	мг/100 мл	0,217	4,608	ммоль/л
Этосуксимид	мг/л	7,08	0,141	мкмоль/л

 

 

Коэффициенты перевода единиц активности ферментов.

Единица	Коэффициент	Единица
мккат/л		Ед/л
нкат/л	0,06	Ед/л
Ед/л	0,0167	мккат/л
Ед/л	16,67	нкат/л
Соответствие единиц
1 мккат/л = 1 мкмоль/(с.л) 1	мкмоль/мин = 16,67 нкат
1 нкат/л = 1 нмоль/(с.л) 1	мкмоль/мин = 1 Ед

 

Приложение II

ПЕРЕЧЕНЬ
исследований в клинической лабораторной диагностике, выполняемых врачами лабораторной диагностики и фельдшерами-лаборантами

(из Постановления Министерства здравоохранения Республики Беларусь

от 19 февраля 2008 г. № 38)

 

№ п/п	Наименование исследований	Специалист, выполняющий исследование
Глава 1. Общеклинические исследования
1.1	Исследование мочи:
1.1.1	определение количества, цвета, прозрачности, наличия осадка, относительной плотности, pH	Фельдшер-лаборант
1.1.2	обнаружение глюкозы экспресс-тестом	Фельдшер-лаборант
1.1.3	обнаружение белка экспресс-тестом	Фельдшер-лаборант
1.1.4	обнаружение белка с сульфосалициловой кислотой	Фельдшер-лаборант
1.1.5	определение белка с сульфосалициловой кислотой	Фельдшер-лаборант
1.1.6	определение белка с пирогаллоловым красным	Фельдшер-лаборант
1.1.7	обнаружение белка Бенс-Джонса по реакции коагуляции с уксусной кислотой	Фельдшер-лаборант
1.1.8	обнаружение кетоновых тел экспресс-тестом	Фельдшер-лаборант
1.1.9	обнаружение билирубина экспресс-тестом	Фельдшер-лаборант
1.1.10	обнаружение уробилиновых тел экспресс-тестом	Фельдшер-лаборант
1.1.11	исследование комплекса параметров общего анализа мочи посредством полуавтоматических анализаторов на основе методов сухой химии	Фельдшер-лаборант
1.1.12	микроскопическое исследование осадка мочи в норме	Фельдшер-лаборант
1.1.13	микроскопическое исследование осадка мочи при патологии	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
1.1.14	подсчет количества форменных элементов в суточном объеме мочи по методу Каковского-Аддиса	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
1.1.15	подсчет количества форменных элементов в 1 мл мочи по методу Нечипоренко	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
1.1.16	определение концентрационной способности почек по Зимницкому	Фельдшер-лаборант
1.2	Исследование спинномозговой жидкости:
1.2.1	определение цвета, прозрачности, относительной плотности, фибринозной пленки	Фельдшер-лаборант
1.2.2	обнаружение белка по реакции Панди	Фельдшер-лаборант
	определение белка с сульфосалициловой кислотой	Фельдшер-лаборант
1.2.3	определение белка с пирогаллоловым красным	Фельдшер-лаборант
1.2.4	определение количества клеточных элементов (цитоз) и их дифференцированный подсчет в нативном препарате	Врач лабораторной диагностики
1.2.5	микроскопическое исследование в окрашенном препарате	Врач лабораторной диагностики
1.3	Исследование экссудатов и транссудатов:
1.3.1	определение количества, характера, цвета, прозрачности, относительной плотности	Фельдшер-лаборант
1.3.2	обнаружение белка по реакции Ривальта	Фельдшер-лаборант
1.3.3	микроскопическое исследование транссудатов и экссудатов	Фельдшер-лаборант
1.4	Исследование мокроты:
1.4.1	определение количества, цвета, характера, консистенции, запаха	Фельдшер-лаборант
1.4.2	микроскопическое исследование мокроты в нативном препарате	Фельдшер-лаборант
1.4.3	микроскопическое исследование мокроты в окрашенном препарате	Фельдшер-лаборант
1.4.4	обнаружение микобактерий туберкулеза в окрашенном препарате	Фельдшер-лаборант
1.4.5	микроскопия на кислотоупорные микробактерии в окрашенных по Цилю-Нильсену препаратах количественным методом в 100 полях зрения	Фельдшер-лаборант
1.5	Исследование желудочного содержимого:
1.5.1	определение количества, цвета, слизи и патологических примесей	Фельдшер-лаборант
1.5.2	определение кислотности методом титрования	Фельдшер-лаборант
1.5.3	микроскопическое исследование	Фельдшер-лаборант
1.6	Исследование дуоденального содержимого:
1.6.1	определение количества, цвета, прозрачности, относительной плотности, pH	Фельдшер-лаборант
1.6.2	микроскопическое исследование (в 3 порциях)	Фельдшер-лаборант
1.7	Исследование синовиальной жидкости:
1.7.1	определение физико-химических свойств	Фельдшер-лаборант
1.7.2	микроскопическое исследование с подсчетом количества форменных элементов (цитоз) в нативном препарате	Фельдшер-лаборант
1.7.3	микроскопическое исследование в окрашенном препарате	Фельдшер-лаборант
1.8	Исследование кала:
1.8.1	определение цвета, формы, запаха, примесей, слизи, pH	Фельдшер-лаборант
1.8.2	обнаружение крови бензидиновой пробой	Фельдшер-лаборант
1.8.3	микроскопическое исследование (в 3 препаратах)	Фельдшер-лаборант
1.8.4	обнаружение простейших	Фельдшер-лаборант
1.8.5	обнаружение яиц гельминтов методом Като	Фельдшер-лаборант
1.8.6	обнаружение анкилостом	Фельдшер-лаборант
1.8.7	обнаружение микрофилярий в крови	Фельдшер-лаборант
1.8.8	исследование мочи на шистосомы	Фельдшер-лаборант
1.8.9	исследование кала на шистосомы	Фельдшер-лаборант
1.8.10	стронгилоидоз (метод Бермана)	Фельдшер-лаборант
1.9	Исследование соскоба на энтеробиоз	Фельдшер-лаборант
1.10	Исследование отделяемого мочеполовых органов:
1.10.1	обнаружение трихомонад и гонококков в препаратах отделяемого мочеполовых органов, окрашенных метиленовым синим	Фельдшер-лаборант
1.10.2	обнаружение трихомонад и гонококков в препаратах отделяемого мочеполовых органов, окрашенных по Граму	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
1.11	Исследование эякулята человека:
1.11.1	определение физико-химических свойств спермы	Фельдшер-лаборант
1.11.2	микроскопия нативного препарата	Фельдшер-лаборант
1.11.3	микроскопия окрашенного мазка	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
1.11.4	определение фруктозы в семенной жидкости	Фельдшер-лаборант
1.11.5	исследование эякулята с помощью автоматических анализаторов спермы	Фельдшер-лаборант
Глава 2. Гематологические исследования
2.1	Определение гемоглобина гемоглобин-цианидным методом	Фельдшер-лаборант
2.2	Подсчет эритроцитов в счетной камере	Фельдшер-лаборант
2.3	Определение гематокрита	Фельдшер-лаборант
2.4	Подсчет ретикулоцитов	Врач лабораторной диагностики
2.5	Подсчет эритроцитов с базофильной зернистостью	Фельдшер-лаборант
2.6	Подсчет тромбоцитов в окрашенных мазках по Фонио	Фельдшер-лаборант
2.7	Подсчет тромбоцитов фазово-контрастным методом	Фельдшер-лаборант
2.8	Определение скорости оседания эритроцитов	Фельдшер-лаборант
2.9	Подсчет лейкоцитов в счетной камере	Фельдшер-лаборант
2.10	Подсчет лейкоцитарной формулы с описанием морфологии форменных элементов крови	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
2.11	Подсчет миелокариоцитов	Врач лабораторной диагностики
2.12	Подсчет миелограммы	Врач лабораторной диагностики
2.13	Подсчет мегакариоцитов	Врач лабораторной диагностики
2.14	Подсчет LE-клеток по Новоселовой	Врач лабораторной диагностики
2.15	Исследование крови на малярийные паразиты с приготовлением толстой капли	Врач лабораторной диагностики
2.16	Исследование крови на малярийные паразиты в окрашенном мазке	Врач лабораторной диагностики
2.17	Определение активности щелочной фосфатазы методом азосочетания в периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.18	Определение активности щелочной фосфатазы в мазках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.19	Определение активности кислой фосфатазы методом азосочетания в периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.20	Определение активности кислой фосфатазы в нейтрофилах	Врач лабораторной диагностики
2.21	Определение активности кислой фосфатазы в лимфоцитах	Врач лабораторной диагностики
2.22	Определение активности кислой фосфатазы в мазках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.23	Определение активности кислой фосфатазы при ингибировании тартратом натрия	Врач лабораторной диагностики
2.24	Определение активности альфа-нафтил-A-S-D-хлорацетатэстеразы в периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.25	Определение активности альфа-нафтил-A-S-D-хлорацетатэстеразы в мазках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.26	Определение активности альфа-нафтил-ацетатэстеразы в периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.27	Определение активности альфа-нафтил-ацетатэстеразы в мазках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.28	Определение активности альфа-нафтил-ацетатэстеразы при ингибировании фторидом натрия	Врач лабораторной диагностики
2.29	Определение активности пероксидазы в клетках периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.30	Определение активности пероксидазы в клетках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.31	Определение активности глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы в эритроцитах	Врач лабораторной диагностики
2.32	Определение активности сукцинатдегидрогеназы в периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.33	Определение активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы в клетках периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.34	Определение липидов в клетках периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.35	Определение липидов в клетках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.36	Определение нейтральных мукополисахаридов (ШИК-реакция) в клетках периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.37	Определение нейтральных мукополисахаридов (ШИК-реакция) в мазках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.38	Подсчет сидероцитов и сидеробластов в клетках периферической крови	Врач лабораторной диагностики
2.39	Подсчет сидероцитов и сидеробластов в клетках костного мозга	Врач лабораторной диагностики
2.40	Исследования с использованием гематологических анализаторов:
2.40.1	полуавтоматических, без дифференцировки лейкоцитарной формулы	Фельдшер-лаборант
2.40.2	автоматических, без дифференцировки лейкоцитарной формулы	Фельдшер-лаборант
2.40.3	автоматических, с дифференцировкой лейкоцитарной формулы	Фельдшер-лаборант
Глава 3. Цитологические исследования
3.1	Тонкоигольная пункционная биопсия щитовидной железы одного образования с микроскопией 5 стекол	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
Глава 4. Биохимические исследования
4.1	Определение хлора меркуриметрическим методом в сыворотке крови	Фельдшер-лаборант
4.2	Исследования с использованием фотоэлектроколориметров и одноканальных биохимических автоматических фотометров:
4.2.1	определение общего белка сыворотки крови	Фельдшер-лаборант
4.2.2	определение альбумина сыворотки крови	Фельдшер-лаборант
4.2.3	тимоловая проба	Фельдшер-лаборант
4.2.4	определение мочевины сыворотки крови	Фельдшер-лаборант
4.2.4.1	конечно-точечным ферментативным методом	Фельдшер-лаборант
4.2.4.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.5	определение креатинина сыворотки крови по реакции Яффе	Фельдшер-лаборант
4.2.5.1	конечно-точечным методом	Фельдшер-лаборант
4.2.5.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.6	определение глюкозы в сыворотке крови ферментативным методом	Фельдшер-лаборант
4.2.7	определение глюкозы в цельной крови экспресс-методом	Фельдшер-лаборант
4.2.8	определение общих бета-липопротеинов в сыворотке крови	Фельдшер-лаборант
4.2.9	определение холестерина альфа-липопротеинов после осаждения пре-бета- и бета-липопротеинов с расчетом коэффициента атерогенности	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
4.2.10	определение общего холестерина сыворотки крови ферментативным методом	Фельдшер-лаборант
4.2.11	определение триацилглицеринов в сыворотке крови ферментативным методом	Фельдшер-лаборант
4.2.12	определение билирубина и его фракций в сыворотке крови методом Йендрашека-Клеггорн-Грофа	Фельдшер-лаборант
4.2.13	определение калия в сыворотке крови фотометрическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.14	определение натрия в сыворотке крови фотометрическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.15	определение хлора в сыворотке крови фотометрическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.16	определение железа в сыворотке крови феррозиновым методом	Врач лабораторной диагностики; фельдшер-лаборант
4.2.17	определение общей железосвязывающей способности сыворотки феррозиновым методом	Фельдшер-лаборант
4.2.18	определение неорганического фосфора в сыворотке крови:
4.2.18.1	с фосфорно-молибденовой кислотой (многошаговая реакция)	Фельдшер-лаборант
4.2.18.2	с использованием диагностических наборов с одношаговой реакцией	Фельдшер-лаборант
4.2.19	определение общего кальция в сыворотке крови:
4.2.19.1	с орто-крезол-фталеиновым комплексом	Фельдшер-лаборант
4.2.19.2	с глиоксаль-бис-гидроксианалином (реактив ГБОА)	Фельдшер-лаборант
4.2.20	определение активности альфа-амилазы в сыворотке крови:
4.2.20.1	амилокластическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.20.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.21	определение активности аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови:
4.2.21.1	методом Райтмана-Френкеля	Фельдшер-лаборант
4.2.21.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.22	определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови:
4.2.22.1	методом Райтмана-Френкеля	Фельдшер-лаборант
4.2.22.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.23	определение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.24	определение активности липазы в сыворотке крови турбидиметрическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.25	определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.26	определение активности креатинфосфокиназы кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.27	определение активности гаммаглутамилтранспептидазы кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.28	определение активности кислой фосфатазы в сыворотке крови:
4.2.28.1	по гидролизу p-нитрофенилфосфата	Фельдшер-лаборант
4.2.28.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.28.3	определение активности тартратлабильной фракции кислой фосфатазы:
4.2.28.3.1	по гидролизу р-нитрофенилфосфата	Фельдшер-лаборант
4.2.28.3.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.2.29	определение активности холинэстеразы в сыворотке крови:
4.2.29.1	по гидролизу ацетилхолинхлорида	Фельдшер-лаборант
4.2.29.2	кинетическим методом	Фельдшер-лаборант
4.3	Определение глюкозы посредством анализатора «ЭКСАН Г»	Фе