Первая помощь пострадавшим в лаборатории

Неотложная помощь при термических ожогах:

· Быстрое прекращение действия термического агента.

· Охлаждение обожженного участка (20 – 30 минут под проточной холодной водой, пузырями со льдом, снегом). Обезболивание.

· Обильное питье (теплый чай, минеральная вода, соляные растворы).

· На раневые поверхности накладывают сухие асептические повязки. Пузыри не прокалывать, не вскрывать! На лицо повязки не накладывают!

Доврачебная помощь при химических ожогах:

· Ожоговую поверхность обливают холодной водой в течение 1 часа.

· Ожоги негашеной известью водой не промывают, а обрабатывают поверхность растительным или вазелиновым маслом.

· Обезболивание. На рану накладывают сухие асептические повязки.

Доврачебная помощь при электротравмах:

· успокоить пострадавшего и дать седативные средства (настойка валерианы, пустырника и др.);

· наложить сухую асептическую повязку на местные повреждения;

· обязательная 100% госпитализация! Даже при легкой электротравме могут наблюдаться нарушения ритма в работе сердца спустя несколько часов после поражения, что может привести к остановке сердца.

Доврачебная помощь при тяжелой электротравме:

· Освободить пострадавшего от контакта с источником тока, соблюдая при этом правила собственной безопасности (выключение рубильника, выключателя, отбрасывание электрических проводов с помощью деревянной палки, веревки и т. д.).

· При отсутствии дыхания и сердечной деятельности немедленно начать сердечно-легочную реанимацию (искусственное дыхание и непрямой массаж сердца).

· Срочная госпитализация.

 

 

Часть 2

Техническое обеспечение КЛИНИЧЕСКИХ ЛАБОРАТОРНЫХ исследований

 

2.1. Лабораторная посуда и инструментарий

Лабораторная посуда представляет собой емкости различного объема и формы, используемые для сбора биоматериалов и других манипуляций, связанных с проведением анализа. Лабораторная посуда может быть многоразового и одноразового использования. Многоразовая посуда чаще всего изготавливается из стекла. Основным недостатком ее является необходимость специальной подготовки к работе (очистка, мытье, сушка и т.д.).

Одноразовая посуда очень удобна в эксплуатации, так как не нуждается в мытье. Она чаще всего изготавливается из пластмассы. Использование одноразовой посуды позволяет без значительных затрат времени персонала соблюдать все правила санитарно-противоэпидемического режима и, ввиду невысокой стоимости пластиковой посуды отечественного производства, делает ее использование экономически выгодным. К тому же использование пластиковой посуды позволяет предотвратить аварии в центрифугах, связанные с раздавливанием стеклянных пробирок, что снимает необходимость проведения дополнительных мероприятий по обеззараживанию и очистке центрифуги.

В соответствии с функциональным назначением лабораторную посуду принято делить следующим образом:

1. посуда общего назначения;

2. мерная посуда;

3. посуда специального назначения.

Посуда общего назначения. Пробирки различаются по размерам и предназначению (химические, градуированные, центрифужные, с притертой пробкой и др.). Выбор пробирок для работы определяется целью манипуляции и объемом реакционной смеси. При работе с пробирками следует помнить, что необходимо заполнение их не более 2/3 от объема. В противном случае возможно проливание содержимого при перемешивании или центрифугировании. Нельзя перемешивать содержимое пробирки, закрывая ее отверстие пальцем. Перемешивание выполняется встряхиванием пробирки, либо стеклянной палочкой.

Воронки служат для переливания и фильтрования жидкостей. Выпускаются различных размеров и формы (обычные, аналитические, делительные и.т.д.).

Химические стаканы – тонкостенные, различной вместимости, изготавливаются из химически стойкого стекла. Химические стаканы можно нагревать, но не на открытом пламени (например, на водяной бане).

Колбы. Очень разнообразны по формам и размерам (круглодонные, плоскодонные, конические и т. д.). Они могут быть изготовлены и обычного стекла, а также из специального термостойкого или термоcтойкого химически стойкого стекла (маркировка соответственно ТС и ТХС).

Мерная посуда. Применяется для измерения объема жидкости. На наружной стенке мерной посуды нанесены деления, указывающие объем в миллилитрах. Выпускается грубо калиброванная посуда (мерные пробирки, стаканы, мензурки, цилиндры) и посуда для точного отмеривания жидкостей (пипетки, мерные колбы).

Стеклянные градуированные пипетки все еще применяются в КДЛ. Они бывают емкостью от 0,1 мл до 10 мл. Имеют деления по всей рабочей длине, что позволяет отмеривать не только конечные, но и любые промежуточные объемы жидкости. В зависимости от способа нанесения градуировки различают пипетки концевые и неконцевые. В концевых пипетках вся рабочая емкость вместе с оттянутым носиком отградуирована и рассчитана на измеряемые объемы жидкости. В неконцевых пипетках оттянутый носик и прилегающая к нему часть не градуированы и представляют собой «мертвый объем», не входящий в объем измеряемой жидкости.

Наиболее точными из всех видов мерной посуды являются мерные колбы. Они представляют собой обычно круглую плоскодонную колбу с длинным узким горлом, на котором нанесена кольцевая метка, ограничивающая точно измеренный объем. Выпускаются мерные колбы емкостью от 25 до 2000 мл. Их нельзя нагревать, так как это приводит к деформациям стекла и изменению первоначального объема. Не рекомендуется также в мерных колбах долго хранить приготовленные растворы.

При работе с любой мерной посудой важно уметь правильно выполнять сам процесс отсчета измеряемого объема жидкости. Если работа ведется с водными растворами (смачивают стекло и образуют вогнутый мениск), отсчет ведут по нижнему уровню мениска. Жидкости, не смачивающие стекло, образуют выпуклый мениск, и отсчет производится по верхнему уровню мениска. В клинических лабораториях часто приходится измерять объемы окрашенных непрозрачных жидкостей, смачивающих стекло (кровь, молоко и др.), когда нижний уровень мениска не виден. Для таких жидкостей отсчет ведут по верхней кромке мениска. Во всех случаях сосуд с измеряемой жидкостью следует располагать так, чтобы мениск жидкости находился на уровне глаз.

Посуда специального назначения бывает различных типов. Среди наиболее часто используемых в клинико-диагностических лабораториях следует назвать чашки Петри, пастеровские пипетки, капельницы, эксикаторы и пр.

Эксикатор служит для предохранения от увлажнения гигроскопичных веществ. Представляет собой толстостенный двухкамерный сосуд с притертой крышкой. В нижнюю камеру помещают какое-либо вещество, поглощающее влагу (концентрированная серная кислота, прокаленный хлорид кальция, силикагель). Дном верхней камеры служит фарфоровая пластина с отверстиями. На ней размещают сосуды с препаратами. Притертые поверхности крышки и эксикатора смазывают вазелином. При закрывании крышки ее слегка поворачивают для лучшего притирания. Иногда в лабораториях используют эксикаторы с противоположной целью – для создания влажной камеры. В этом случае на дно нижней камеры наливают воду, а на фарфоровую пластину помещают препараты, которые следует предохранить от высыхания (например, агаровые гели).

Правила ухода за лабораторной посудой

Чистота посуды в значительной степени влияет на качество проводимых исследований. Вся посуда, контактировавшая с биологическим материалом, подвергается очистке от остатков материала и дезинфицируется в соответствии с действующими правилами санитарно-противоэпидемического режима. Значительные механические загрязнения удаляются разнообразными ершами, которые также затем обеззараживаются.

Обычно хорошая очистка достигается уже после замачивания посуды в моющем комплексном растворе. Затем посуда промывается проточной водой и ополаскивается дистиллированной водой. С хорошо вымытой посуды вода стекает струйками, не задерживаясь в виде капель. После сушки она абсолютно прозрачная и не имеет подтеков. Высушивают посуду в сухожаровых шкафах. Можно сушить и на любых приспособлениях, где обеспечивается свободный отток воды с посуды.

Для некоторых исследований предъявляются очень высокие требования к чистоте посуды. Тогда используют более эффективные химические методы очистки. Из них наиболее распространенным является мытье хромовой смесью.

Хромовую смесь готовят следующим образом: растворяют 25 г двухромовокислого калия (К₂Сr₂О₇) в 150 мл концентрированной технической серной кислоты. Полученную смесь интенсивно взбалтывают и перед употреблением выдерживают сутки. Хранят хромовую смесь в сосуде из темного стекла. При стоянии смесь расслаивается на жидкую часть и осадок. Полного растворения бихромата калия не происходит. Правильно приготовленная смесь имеет темно-оранжевую окраску. В случае непригодности цвет изменяется на темно-зеленый. Посуду, подлежащую очистке, выдерживают в хромовой смеси не менее 2 часов, но обычно замачивают на ночь. Посуда должна быть полностью погружена в смесь. Очищенную посуду тщательно промывают проточной водой и дистиллятом. Работать с хромовой смесью следует в резиновых перчатках, прорезиненном фартуке и в защитных очках. Смесь, попадая на кожу или слизистые оболочки, может вызвать сильные ожоги. Не применяют хромовую смесь, если посуда загрязнена парафином, минеральными маслами. Необходимо избегать попадания в хромовую смесь спиртов, которые приводят ее в негодность.

Можно для очистки посуды использовать хромовый раствор. Готовят его по следующей прописи: растворяют 20 г бихромата калия в 100 мл концентрированной азотной кислоты. В данном случае осадок бихромата не выпадает, так как образуется истинный раствор. Такой раствор по моющим свойствам превосходит хромовую смесь.

Каждый способ мытья посуды имеет свои преимущества и недостатки. Мытье хромпиком обеспечивает высокую степень чистоты. Кроме того, мытье хромпиком с последующим высушиванием в горячем сушильном шкафу значительно уменьшает микробную обсемененность посуды и способствует лучшей сохранности реактивов. В то же время данный метод достаточно трудоемок и требует соблюдения определенных мер предосторожности. С моющими средствами работать значительно удобнее, но они часто адсорбируются на стекле, что требует дополнительного многократного промывания водой. Поэтому для каждого вида анализов подбирается адекватный, не слишком трудоемкий, но достаточно надежный метод мытья посуды.

Сушка посуды осуществляется в специальных сушильных шкафах. В ряде случаев лабораторная посуда нуждается в стерилизации. Наиболее широко используется стерилизация автоклавированием при 120⁰С, давление 1 атм. Некоторые из видов пластмасс (например, полипропиленовая посуда) также выдерживают эти режимы обработки. При планировании работы в лаборатории следует предусмотреть возможности стерилизации пластмассовой посуды.

 

2.2. Средства пробоподготовки в лаборатории. Дозирующие устройства

Отмеривание растворов является одной из наиболее часто выполняемых лабораторных процедур. При этом от точности дозирования существенно зависят результаты исследования. В современных лабораториях для отмеривания растворов широко применяют разнообразные дозирующие устройства – дозаторы (пипетки), дилютеры и диспенсеры. Дилютеры – дозирующие устройства с одновременным разбавлением дозируемых жидкостей. Диспенсеры – устройства, обеспечивающие многократную выдачу доз при однократном взятии дозируемого раствора. Дозирующие устройства можно подразделить на несколько групп.

1. По способу забора и выдачи доз их подразделяют на пипеточные, клапанные и перистальтические дозаторы.

Пипеточные – это бесклапанные дозаторы, где забор и выдача пробы осуществляются через один и тот же наконечник дозатора. Забор дозирующей жидкости осуществляется в съемную насадку – наконечник, что обеспечивает высокую чистоту при выполнении операции дозирования, практически исключает загрязнение последующей пробы предыдущей. Перемещение дозируемой жидкости в насадке осуществляется путем передачи через воздушный тракт разрежения или давления воздуха, создаваемого в поршневой или плунжерной паре пипетки. Многие пипеточные дозаторы имеют устройства для сброса наконечников. Для повышения точности дозирования в конструкции корпуса некоторых пипеток предусмотрены теплоизолирующие кожухи, уменьшающие влияние температуры руки оператора на воздушный тракт дозатора.

Пипеточные дозаторы нашли самое массовое применение в лабораторной практике. Они наиболее часто используются в следующих режимах: прямое дозирование, обратное дозирование, многократное дозирование (см. пипеточный диспенсер) и режим разведения (см. пипеточный дилютер).

Прямое дозирование – наиболее распространенный режим дозирования, при котором весь забранный объем жидкости сбрасывается за один полный ход поршня. Этот режим в большей степени подходит для дозирования водных растворов.

Обратное дозирование – используется для дозирования очень малых объемов, а также при работе с вязкими и пенящимися жидкостями. При этом в наконечник набирается несколько больший, по сравнению с дозируемым, объем жидкости. Остающийся в наконечнике некоторый объем жидкости нивелирует погрешность, связанную с образованием пены или мениска.

Клапанный дозатор имеет входной канал, куда поступает дозируемая жидкость, и выходной канал, через который выдается доза.

Перистальтические дозаторы чаще всего применяются в качестве дозатора-насоса подачи проб и реагентов в проточных анализаторах, как составная часть последних.

2. По способу установки дозы дозирующие устройства подразделяют на дозаторы с фиксированным объемом дозы и дозаторы с регулируемыми переменными объемами дозы.

3. По количеству каналов дозирования дозаторы разделяются на одноканальные и многоканальные. Одноканальные дозаторы не привязаны к форме носителя проб и реакционной смеси, в связи с чем они универсальны. Многоканальные дозаторы ориентированы на специальные носители, так как имеют фиксированное количество каналов с определенным расстоянием между наконечниками. Они наиболее удобны при работе с микропланшетами и стрипами.

4. По способу управления дозирующие устройства можно разделить на дозаторы с ручным приводом, автоматическим приводом и автоматическим приводом с микропроцессорным управлением – электронные дозаторы, среди которых наибольшее распространение получили электронные пипетки.

Следует помнить, что дозаторы относятся к измерительным устройствам и, следовательно, должны подлежать метрологической проверке.

 

Центрифугирование

Центрифугирование позволяет произвести разделение жидкого и твердого вещества, либо различных частиц по их поведению в центробежном поле. Разделение обусловлено тем, что частицы, имеющие разную плотность, форму или размеры, осаждаются с разной скоростью.

В клинических лабораториях центрифугирование применяется очень широко для подготовки биоматериалов к исследованию, а также на различных этапах аналитической процедуры.

Условия воздействия на разделяемые компоненты часто выражают как скорость вращения центрифуги (об/мин). Однако более правильным является учет силы, воздействующей на биоматериал, находящийся в центрифуге (так называемой относительной силы центрифугирования). Ее выражают в величине ускорения силы тяжести (g) и рассчитывают по формуле:

g = 1,118 х10^-5 х r х n²,

где 1,118 х10^-5 – коэффициент для расчета,

r – расстояние от центра ротора до дна сосуда, установленного в центрифугу;

n – скорость вращения ротора (об/мин)

Для упрощения работы можно пользоваться специальными номограммами (рисунок 2.1).

 

 

 

Рис. 2.1 – Номограмма для расчета центробежного ускорения

Для определения g соединяют прямой линией значения радиуса и скорости вращения ротора на крайних шкалах (А и С). Точка пересечения этой прямой со средней шкалой дает искомую величину центробежного ускорения.

 

В клинико-диагностических лабораториях наиболее широко используются центрифуги с угловым ротором с максимальной скоростью вращения до 10000 об/мин (типа ОПн-8) и центрифуги с так называемым «лепестковым» ротором со скоростью вращения до 3000 об/мин. В центрифугах с «лепестковыми» роторами (горизонтального типа) расстояние r обычно больше, чем в центрифугах с угловым ротором, так как пробирки в такой центрифуге при центрифугировании принимают горизонтальное положение.

Время центрифугирования для полного отделения частиц от жидкой фазы и необходимая величина g зависит от высоты столбика жидкости в пробирке, размера отделяемых частиц и ряда других условий.

Для безопасного и качественного центрифугирования необходимо соблюдение ряда условий. Наполненные жидкостью центрифужные пробирки должны быть попарно уравновешены. Уравновешивание их производится на специальных весах. Уравновешенные пробирки располагают в противоположно расположенных гнездах центрифуги. Затем центрифугу закрывают предохранительной крышкой и включают. После выключения необходимо дать центрифуге остановиться самой, и только после этого вынуть пробирки. Центрифуга должна располагаться на ровной поверхности. При появлении сильной вибрации при включении центрифуги ее необходимо тут же отключить от сети.

При работе с термолабильными ингредиентами может потребоваться центрифугирование при низкой температуре. Для этого применяют центрифуги с охлаждением (так называемые «рефрижераторные»). Системой охлаждения обычно снабжают и центрифуги с высокой скоростью вращения (25000 об/мин и более) для предотвращения нагревания, возникающего вследствие трения при вращении ротора.

Центрифуги специального назначения имеют различные конструктивные варианты исполнения под те или иные специальные задачи или виды исследований. К таким центрифугам относятся центрифуги с нагревательной рубашкой, микроцентрифуги, центрифуги со специальными роторами для стрипов и другие.