Вирус гепатита С в материале в норме отсутствует.

В отличие от серологических методов диагностики ВГС, где обнаруживают антитела к ВГС, ПЦР позволяет установить наличие непосредственно РНК ВГС и количественно выра­зить его концентрацию в исследуемом материале. Тест имеет видовую специфичность и вы­сокую чувствительность — 10 молекул РНК ВГС в исследуемом материале достаточно для его выявления. Обнаружение антител к вирусу гепатита С подтверждает лишь факт инфи­цирования пациента, но не позволяет судить об активности инфекционного процесса (о реп­ликации вируса), о прогнозе заболевания. Кроме того, антитела к вирусу гепатита С обнару­живают как в крови больных острым и хроническим гепатитом, так и у тех пациентов, кто болел и выздоровел, а нередко антитела в крови находят только спустя несколько месяцев после появления клинической картины заболевания, что затрудняет диагностику. Обнару­жение вируса гепатита С в крови с использованием ПЦР — более информативный метод диагностики. Выявление ПЦР РНК вируса гепатита С свидетельствует о виремии, позволяет судить о репликации вируса в организме и является одним из критериев эффективности про­тивовирусной терапии. Обнаружение РНК вируса гепатита С с помощью ПЦР на ранних этапах развития вирусной инфекции на фоне полного отсутствия каких-либо серологи­ческих маркеров может служить самым ранним свидетельством инфицирования. Однако изолированное выявление РНК вируса гепатита С на фоне полного отсутствия каких-либо других серологических маркеров не может полностью исключить ложноположительный ре­зультат ПЦР. В таких случаях требуются всесторонняя оценка клинических, биохимических и морфологических исследований и повторное неоднократное подтверждение наличия ин­фекции ПЦР.

Важное значение имеет метод ПЦР у больных хроническим вирусным гепатитом С, так как у большинства из них отсутствует корреляция между наличием вирусной репликации и активностью печеночных ферментов. В таких случаях только ПЦР позволяет судить о нали­чии вирусной репликации, особенно если конечный результат выражается количественно. В большинстве случаев исчезновение из сыворотки крови РНК вируса гепатита С наблюда­ется позже нормализации содержания печеночных ферментов, поэтому их нормализация — не основание для прекращения противовирусного лечения.

Практически важно для выявления РНК вируса исследовать методом ПЦР не только сыворотку крови, но и лимфоциты, гепатобиоптаты. Вирусы удается обнаружить в 2—3 раза чаще в ткани печени, чем в сыворотке крови [Серов Н.А и др., 1998]. При оценке результа­тов исследования сыворотки крови на РНК вируса гепатита С следует помнить, что виремия может быть флюктуирующей (как и изменения активности ферментов). Поэтому после по­ложительных результатов исследования ПЦР можно получить отрицательный результат и на­оборот. В таких случаях для разрешения возникающих сомнений лучше исследовать гепато­биоптаты.

Обнаружение РНК вируса гепатита С в материале с помощью ПЦР необходимо для:

— разрешения сомнительных результатов серологических исследований;

— дифференциации гепатита С от других форм гепатита;

— выявления острой стадии заболевания по сравнению с перенесенной инфекцией или
контактом; определения стадии инфицированности новорожденных от серопозитив-
ных по вирусу гепатита С матерей;

— контроля эффективности противовирусного лечения.

Все вышеизложенные особенности оценки результатов и подходов к диагностике вируса гепатита С с помощью ПЦР относятся и к другим инфекциям.

Обнаружение вируса гепатита В

Вирус гепатита В в материале в норме отсутствует.

ПЦР позволяет определять в исследуемом материале (кровь, пунктат печени) ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Качественное определение виру­са гепатита В в материале подтверждает наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает патогенез заболевания. Количественный метод определения содержания ДНК вируса гепатита В в исследуемом материале дает важную информацию об интен­сивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности

к антивирусным препаратам. Для диагностики вирусного гепатита методом ПЦР в сыво­ротке крови в настоящее время применяют тест-системы, чувствительность которых со­ставляет 50—100 копий в пробе, что позволяет детектировать вирус при его концентрации 5-Ю³—10⁴ мл [Барановский П.М. и др., 1998]. ПЦР при вирусном гепатите В безусловно необходима для суждения о вирусной репликации. Вирусную ДНК в сыворотке крови об­наруживают у 50 % больных при отсутствии HBeAg. Материалом для выявления ДНК вируса гепатита В могут служить сыворотка крови, лимфоциты, гепатобиоптаты. Оценка результатов исследования на ДНК вирусного гепатита В во многом аналогична описан­ному для гепатита С.

Обнаружение ДНК вируса гепатита В в материале с помощью ПЦР необходимо для:

— разрешения сомнительных результатов серологических исследований;

— выявления острой стадии заболевания по сравнению с перенесенной инфекцией или
контактом;

— контроля эффективности противовирусного лечения.

Обнаружение вируса иммунодефицита человека

Вирус иммунодефицита человека в материале в норме отсутствует.

Метод ПЦР для обнаружения РНК ВИЧ может быть качественным и количественным. Качественное обнаружение РНК вируса иммунодефицита человека с помощью ПЦР исполь­зуют для:

— неонатального скрининга;

— подтверждения результатов скринингового серологического исследования;

— скрининга пациентов с высоким риском;

— разрешения сомнительных результатов по иммуноблотинговому исследованию;

— контроля эффективности противовирусного лечения;

— определения стадии заболевания СПИД (переход инфицированности в заболевание).

Прямое количественное определение РНК ВИЧ с помощью ПЦР позволяет более точно, чем определение содержания СО4⁺-клеток, предсказать скорость развития СПИД у лиц, инфицированных ВИЧ, следовательно, более точно оценить их выживаемость. Высокое содержание вирусных частиц обычно коррелирует с выраженным нарушением иммунного статуса и низким содержанием СО4⁺-клеток. Низкое содержание вирусных частиц обычно коррелирует с более благополучным иммунным статусом и более высоким содержанием СО4⁺-клеток. Содержание вирусной РНК в крови позволяет предсказать переход заболева­ния в клиническую стадию. При содержании РНК-1 ВИЧ >74 100 копий/мл почти у всех па­циентов развивается клиническая картина СПИД [Senior D., Holden E., 1996]. Вероятность развития СПИД в 10,8 раза больше у лиц с содержанием ВИЧ-1 в крови >10 000 копий/мл, чем улиц с содержанием ВИЧ-1 в крови <10 000 копий/мл. При инфекции ВИЧ прогноз не­посредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Обнаружение цитомегаловируса

Цитомегаловирус в исследуемом материале в норме отсутствует.

Обнаружение частиц вируса в крови больного с помощью ПЦР используют для диагнос­тики цитомегаловирусной инфекции и контроля эффективности противовирусного лечения. В отличие от серологических методов диагностики цитомегаловирусной инфекции, где вы­являют антитела к ЦМВ, ПЦР позволяет установить наличие непосредственно ЦМВ и коли­чественно выразить его концентрацию в сыворотке крови. Выявление ЦМВ имеет большое значение в диагностике перинатальной патологии. Внутриутробная и перинатальная переда­ча ЦМВ может иметь тяжелые последствия. Цитомегаловирусная инфекция во время бере­менности часто протекает в субклинической форме и сопровождается невыраженными симптомами. ПЦР в таких случаях позволяет выявить этиологический фактор заболевания. Материалом для исследования могут служить клетки осадка мочи (новорожденных детей), эпителий цервикального канала больных женщин, околоплодные воды, соскобы с конъюнк­тивы глаз и урогенитального тракта, слюна, пунктаты печени.