Взятие материала при аутопсии

Основным условием для получения достоверных результатов микробиологического исследования и их грамотной интерпретации является раннее (не позднее 12 часов после смерти больного) взятие материала (даже при хранении трупа при пониженной температуре). Материал для микробиологического исследования берет персонал морга (врач и его помощник) с соблюдением пра­вил асептики. Пробы крови получают из левого желудочка сердца шприцемили пастеровской пипеткой. Пункцию и биопсию проводят после обработки исследуе­мого участка 3% перекисью водорода с последующим уда­лением антисептика стерильным физиологическим раствором. 2—3 кусочка органов или тканей, величиной по 0,5—1 см³, помещают с соблюдением правил асептики в стерильные чашки Петри или в пробирки. Гной из вскрытых полостей, спинномозговую жидкость и т.д. отсасывают шприцем ив количестве 1-5 мл поме­щают в стерильные пробирки. Поверхностные секреты со­бирают бактериологическим тампоном.

Материал, взятый от трупа больного с гнойно-воспалительной патологией, вызванной условно-патогенными бакте­риями, должен быть доставлен в лабораторию в течение часа. В направлении дополнительно указывают дату и время смерти.

Взятие, условия хранения и доставки венозной крови для проведения ИФА и ПЦР.

Взятие венозной крови производится натощак, в утренние часы. Отбор производится в центрифужные одноразовые пробирки, для ПЦР - со специальными реагентами. Для ИФА берется 5 мл крови, для ПЦР - 2,5 мл. Пробирки с кровью должны быть промаркированы, упакованы, плотно закрыты и должны быть доставлены в лабораторию в течение 1 часа. Если доставка крови в лабораторию осуществляется в течение дня, то она хранится при температуре +4-+6⁰ С, затем в специальных транспортных контейнерах (в ледяной бане) доставляется в лабораторию.

Взятие материала для ПЦР исследований при урогенитальных инфекциях.

Поскольку урогенитальные инфекции нередко вызываются внутриклеточными паразитами, размножающимися в клетках цилиндрического эпителия уретры или цервикального канала, в исследуемом материале должно быть значительное содержание этих клеток при минимальном количестве слизи и примеси крови. Неправильный отбор материала при этих инфекциях нередко приводит к ложноположительным и ложноотрицательным результатам.

Отбор осуществляется специальным зондом, который вводится в уретру (на глубину 1,0 1,5 см у женщин и на 3-4 см у мужчин) или в цервикальный канал (на глубину 0,5 -1,5 см) после удаления слизи. При наличии эрозии цервикального канала необходима его обработка стерильным физиологическим раствором. Материал берут на границе здоровой и измененной ткани. При введении и извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание стенок влагалища.

Зонд опускают в пробирку с транспортной средой, где его несколько раз вращают, а затем удаляют из пробирки. Пробирку закрывают и маркируют. Транспортировку биологического материала для ПЦР производят только в сумке-холодильнике. Если пробирку с биологическим материалом невозможно доставить в лабораторию ПЦР в течение 2 часов, то ее следует заморозить при температуре -20⁰ С. В замороженном виде проба для ПЦР может храниться не более 2 недель.

Приложение 2

ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ И ДОСТАВКИ БИОЛОГИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ ДЛЯ

ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Любые пробы (в том числе нестерильные, например, фекалии) для вирусологического исследования берут, соблюдая правила асептики, с целью предотвращения его дополнительного загрязнения посторонней микрофлорой. Взятые для исследования материалы рекомендуется помещать в стеклянные флаконы или посуду из нетоксичной пластмассы с завинчивающейся пробкой. Пробы следует сохранять влажными и на холоду, не замораживая, поскольку ряд вирусов (в частности, возбудители респираторных вирусных инфекций) характеризуется низкой выживаемостью во внешней среде. Для сохранения жизнеспособности вирусов некоторые про­бы (мазки из носоглотки, соскобы кожных поражений) погружа­ют в стабилизирующую среду, состоящую из нейтрального изотонического раствора, белка и антибиотиков. Можно также пользоваться раствором Хенкса или средами для тканевых культур (гидролизат лактальбумина, среды 199, Игла и т.д., содержащие 10% про­гретой сыворотки крупного рогатого скота или бычьего альбумина) с антибиотиками (200-1000 ЕД пенициллина, 200-1000 мг стрептомицина и 50-100 ЕД нистатина), подавляющими рост бактерий и грибов, которые приводят к аутолизу белков и разрушению вирусов.

КРОВЬ.

Для выделения вирусов и сероло­гического исследования берут 10 мл крови. Сыворотку крови, взятую для серологических исследований, в случае ее возможной нестерильности, можно заморозить, что предотвращает бактери­альный рост и сохраняет ранние макроглобулиновые антитела. Первую пробу крови для серологического исследования берут на 3-4 дни болезни, вторую – на 10-15. Так как при некоторых вирусных инфекциях антитела накапливаются медленно, целесообразно взять третью пробу на 25-30-й день.

МАТЕРИАЛ ИЗ ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ.

Мазки из глотки берут ватным тампоном, не касаясь языка и щек, тщательно протирая заднюю стенку глотки, после чего опускают тампон в стаби­лизирующую среду. У детей в возрасте до 2 лет вирусы можно выделять из носоглоточного секрета. Из него де­лают также мазки для исследования методом иммунофлюоресценции.

СПИННОМОЗГОВАЯ ЖИДКОСТЬ.

Вирусы из спин­номозговой жидкости выделяют при при менингитах, реже при энцефалитах.

ФЕКАЛИИ.

Кусочки кала, массой 4-8 г, помещают в сухой стериль­ный флакон. Можно также исследовать ректальные мазки, однако частота выделения вируса из них ниже, чем из кала.

СОСКОБЫ И МАЗКИ С КОНЪЮНКТИВЫ.

Соскобс конъюнктивы снимают тонким стерильным шпателем после локальной легкой анестезии и делают мазок на предметном стекле. Для выделения ви­руса производят смыв с конъюнктивы стабилизирующей средой или берут пробу тампоном, помещая его затем во флакон со средой.

КОЖНЫЕ ПОРАЖЕНИЯ.

Исследованию подвергают поврежденные участки (везикулярная жидкость, корочки, кусочки опухоли и т.п.).

ТРУПНЫЙ МАТЕРИАЛ.

Желательно брать как можно скорее, так как содержание вируса в тканях после смерти резко снижается в результате их аутолиза, вызванного размножением бактерий. Образцы для выделения виру­са берут, соблюдая правила асептики, одновременно помещая их в формалин для выполнения гистологических исследований.

ТРАНСПОРТИРОВКА.

Доставка проб в лабораторию должна осу­ществляться в максимально короткий срок, так как содержание вируса в отсутствие живых клеток быстро снижается. Повторное замораживание и оттаивание губительны для ряда вирусов (особенно возбудителей респираторных вирусных инфекций), поэтому при транспортировании образцы помещают в контейнеры с температурой 2-4⁰ С. Если время доставки превышает 30-40 мин и пробы не могут быть тотчас исследованы, материал замораживают при -80°С в сухом льду или помещают в жидкий азот при –180⁰ С.

 

 

 

а	б
Рис. 1. Стафилококк - Staphylococcus aureus. а –мазок из исследуемого материала, б - мазок из чистой культуры. Окраска по Граму. Скопления кокков в виде гроздьев винограда. х900

 

а	б
Рис. 2. Стрептококк (Streptococcus pyogenes). а –мазок из исследуемого материала, б - мазок из чистой культуры.Окраска по Граму. Грамположительные кокки, расположенные в виде цепочек. х900

 

 

Схема 3. Микробиологическая диагностика анаэробных инфекций