Лабораторная диагностика ботулизма

Ботулизм - острая пищевая интоксикация, протекающая с преимущественным поражением центральной и вегетативной нерв­ной системы ботулиническим токсином - силь­нейшим биологическим ядом, вырабатываемым палочкой ботулизма (Clostridium botulinum) и относящемся к особо опасным патогенным биологи­ческим агентам. Ботулизм может быть связан также с вегетацией возбудителя в ране или кишечнике.

Материалом для исследования являются кровь, моча, испражнения, промывные воды желудка, остатки пищи (мясные, рыбные, фруктовые, овощные, грибные консервы, колбасы и др.). Обычно у больного с подозрением на ботулизм исследуют на наличие токсина кровь, а на наличие возбудителя - испражнения.

Биопроба. Проводится реакция нейтрализации на белых мышах с целью обнаружения ботулотоксина в исследуемом материале. Обнаружение токсина палочки ботулизма и его типа имеет важное значение для назначения пациенту антитоксической противоботулинистической сыворотки - един­ственного эффективного средства специфической терапии и экстренной профи­лактики ботулизма. Реакцию ставят со смесью антитоксических противоботулинистических сывороток, а также с моновалентными сыворотками типов А, В, Е. При наличии в исследуемом материале ботулотоксинамыши контрольной группы погибают с явлениями параличей (парез конечностей, осиная талия и т.д.). При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши остаются живыми.

Экспресс-диагностика ботулизма проводится с помощью РНГА с антительными эритроцитарными диагностикумами для обнаружения ботулотоксина в исследуемом материале.

Бактериологический метод. Исследуемый материал засе­вают в 4 флакона со средой Китта –Тароцци; один флакон прогре­вают при температуре 60⁰ С в течение 15 мин (для селекции С. botulinum типа Е), другой - при 80⁰ С в течение 20 мин. Накопление куль­тур клостридий ботулизма типов Е и F происходит при 28 °С, а клостридий типа А и В - при 35 °С в течение 48 ч. Для активации токсина Е к питательной среде добавляют трипсин.

Через 24 — 48 ч инкубирования учитывают характер роста посевов (помутнение и газообразование), готовят мазки в окраске по Граму. При наличии типичных бактерий в виде «теннисных ракеток» со спорами (рис.15) делают пересев на кровяной сахарный МПА, на котором С. botulinum образует колонии неправильной формы с гладкой или шероховатой поверхностью и зоной гемолиза. В глубине столбика сахарного МПА колонии палочки ботулизма имеют вид пушинок или чечевичек.

 

Рис. 15. Палочка ботулизма - Clostridium botulinum. Окраска по Граму. Грамположительные спорообразующие палочки в виде «теннисной» ракетки. х900

 

Идентификация чистой культуры проводится на основании изучения биохимических свойств (посев в сре­ды «пестрого» ряда), изучают другие дифференциальные призна­ки (см. табл.). Антигенные свойства культуры изучают с помощью РА с типовыми сыворотками. Выявля­ют также ботулинический токсин в фильтрате бульонной культуры и его тип с помощью реакции нейтрализации на белых мышах.

Самостоятельная работа студентов

1. Изучить морфологические свойства С. botulinum в демонстрационном микропрепарате, окрашенном по Граму. Возбудитель ботулизма представляет собой крупную палочку со спорами, расположенными субтерминально (вид «теннисной ракетки»).

2. Бактериологический метод. Изучить культуральные свойства ферментативную актив­ность возбудителя ботулизма (демонстрация).

3. Экспресс-метод. Ознакомиться с выявлением ботулотоксина в сыворотке крови больного: РНГА с эритроцитами, нагруженными анти­телами моновалентных антитоксических противоботулинистических сывороток типов А, В, Е.

4. Биопроба. Обнаружение ботулотоксина в пище, послужившей причиной пищевого отравления: реакция нейтрализации на белых мышах. Одну группу мышей (контроль) заражают подкожным введением фильтрата пищи, послужившей причиной отравления. Другой мыши (опыт) вводят смесь исследуемого материала и типовых противоботулинических сывороток. При наличии ботулотоксина мыши контрольной группы погибают с явлениями параличей (осиная талия и т.д.), животные в контрольной группе выживают.

5. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики ботулизма:

- противоботулинистические сыворотки типов А, В, Е, F, полученные из сыворотки крови гипериммунизированных ботулинистическим анатоксином лошадей; применяются для лечения и постановки реакции нейтрализации на животных при диагностике ботулизма;

- ботулинистический трианатоксин адсорбированный, очищенный. Получают обезвреживанием ботулинистического токсина формалином, применяют для активной иммунизации.

Лабораторная диагностика пищевых интоксикаций стафилококковой этиологии

Материалом для исследования служат рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты, послужившие причиной отравления.

Экспресс-методы предназначены дляобнаружения энтеротоксина стафилококка в исследуемом материале с помощью РП в геле, латекс-агглютинации, ИФА с сыворотками против энтеротоксинов стафилококка.

Бактериологический метод направлен на выделение чистой культуры стафилококка с последующей постановкой проб на наличие энтеротоксина.

Биопроба. Ставится путем скармливания исследуемого материала или выделенной культуры стафилококка котятам-сосункам, у которых стафилококковый энтеротоксин вызывает через 30-60 минут рвоту и понос.