Лабораторная диагностика отдельных микозов

Лабораторная диагностика глубоких (системных) микозов

Возбудителями глубоких микозов, встречающихся в определенных природных очагах, являются почвенные грибы, вызывающие в ряде случаев развитие тяжелых системных форм инфекции.

Криптокккоз

Возбудителем криптококкоза (европейского бластомикоза) яв­ляется Cryptococcum neoformans, поражающий преимущественно у лиц с иммунодефицитами (как правило, при СПИДе) ткань мозга, легкие, кожу, подкожную клет­чатку и слизистые оболочки. Наиболее часто криптококкоз протекает в виде хронического менингита с частыми ремиссиями и обострениями, иногда переходящего в энцефалит. При генерализации процесса прогноз обычно неблагоприятный. Заболевание встречается редко, но распространено повсеместно. Воз­будитель обитает в почве, в гнездах птиц, на растениях, в пищевых продуктах. Заражение происходит при вдыхании грибка с пылью.

Материалом для исследования при криптококкозе являются мокрота, гной, спинномозговая жидкость, кусочки ко­стей, биоптататов тканей из очагов поражения и секционный материал. Применяются следующие методы лабораторного исследования.

Микроскопический метод - исследование неокрашенных препаратов из материала от больного, в которых возбудитель выглядит в виде округлых или яйцевидных дрожжевых клеток размером 2х5, реже -10-20 мкм, покрытых толстой слизистой капсулой желтоватого цвета, иногда с одной длинной почкой (рис 33 а). Иногда толщина капсулы (до 50мкм) значитель­но превосходит размеры самой клетки гриба. Капсулу можно выявить также методом Гинса-Бурри. Реже исследуют гистологические препараты, окрашен­ные гематоксилином. Тканевая форма криптококка морфологически мало отличается от культуральной.

Микологический метод - посевисследуемого материала на среду Сабуро и другие среды для выращивания грибов. вы­ращивают при 25 — 30 °С. Через 1-5 суток выращивания при температуре 25-30⁰ С на среде Сабуро вырастают блестящие, слизисто-сальные, сметанообразной консистенции колонии беловатого, желтоватого или коричневого цвета с куполообразной гладкой поверхностью (рис. 33 б), реже — морщинистые или мелкозернистые. Идентификацию С. neoformans проводят по морфологическим, культуральным свойствам, способности расти при 37 °С, а также по биохимическим свойствам. Криптококки образовуют уреазу, фенолоксидазу, не растут в присутствии циклогексими­да, неспособны ферментировать углеводы.

 

А б

Рис. 33.Возбудитель криптококкоза (Cryptococcum neoformans) . а – в исследуемом материале, б – колонии на питательной среде.

Серологический метод -имеетвспомогательное значение, т.к. с помощью РА, РНГА, РП, РСК, РИФ антитела при криптококкозе обнару­живаются в невысоких титрах и непостоянно.

Биопроба - внутрибрюшинное или внутримозговое заражение мышей материалом от больных. Через 2-4 недели животных забивают с целью выделения чистой культуры гриба из внутренних органов. Выделенные культу­ры идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для диагностики криптококкоза.

Североамериканский бластомикоз (болезнь Джилкрайста—Стокса)

Возбудителем этого микоза является Blastomyces dermatitidis - диморфные грибы, вызывающие местное или системное хронически проте­кающее заболевание с гнойным поражением органов дыхания, кожи, подкожной клетчатки, костей, внутренних органов. Заболевание эндемично для США, Канады, встречается в странах Африки, реже - в Австралии, Индии, Латинской Америке, Европе. Возбудитель обитает в почве, заражение происходит при вдыхании спор гриба с пылью. Исследованию подвергают гной из свищей и абсцессов, спинномозговую жидкость, мокроту, мочу, пунктат лимфатических узлов и т.д.

Возбудитель североамериканского бластомикоза является диморфным грибом, который в тканях развивается в виде дрожжеподобных почкующихся клеток, а в культурах при 20⁰ С - в мицелиальной и дрожжевой формах.

Микроскопический метод – выявление в нативном препарате из материала от больного (или в гистологических препаратах, окрашенных по Романовскому—Гимзе) дрожжеподобных почкующихся округлых или овальных клеток, размером 8—15 мкм, с двойной обо­лочкой и единственной почкой, располагающейся на широком основании. Вместо образования почки клетка может вытягиваться и принимать вид языка колокола.

Микологический метод –посев насреду Сабуро, сахарный или сусло-агар с последующим выращиванием в течение 4-6 недель при температуре 20-25⁰ С в результате чего образуется мицелиальная форма гриба. Колонии гриба сначала круглые и гладкие, складчатые, дрожжеподобные, затем они последовательно покрываются белым, желтым и бурым пушком с короткими шипами. При микроскопии культур обнаруживают круглые почкующиеся дрожжевые клетки, большое количество септированных нитей мицелия с многочисленными боковыми конидиями круглой, овальной, иногда грушевидной формы, диаметром 3-5мкм. В старых культурах можно найти хламидоспоры, диаметром 7-18мкм.. Мицелиальная форма легко превращается в дрожжеподобную при выращивании при 37⁰ С, а дрожжевая при 20⁰ С в мицелиальную. На кислых средах вырастает мицелиальная, а на щелочных — дрожжевая форма гриба

Идентификация возбудителя североамериканского бластомикоза основывается на способности гриба трансформироваться в дрожжевую фор­му при температуре культивирования 37⁰ С и вырабатывать экзоантиген мицелиальной формы гриба, определяемый с помощью реакции иммунодиффузии с диагностической сывороткой и концентрированным экстрактом бульонной или агаровой культуры возбудителя. Для целей идентификации используются также методы генодиагностики.

Серологическое исследование. Для серодиагностики применя­ют РСК и реакцию иммунодиффузии.

Аллергологическое исследование -внутрикожные пробы с бластомицином – аллергеном, полученным из экстракта клеток возбудителя. Диагностическая ценность пробы невысока из-за перекрестных реакций.

Биопроба - заражение белых мышей с последующим посевом пора­женных тканей на питательные среды с целью выделения чистой культуры гриба и ее идентификации.

Генодиагностика - ПЦР для быстрого обнаружения ДНК возбудителя в исследуемом материале.