Вирусологическая диагностика нейровирусных инфекций

Арбовирусные инфекции

Термин арбовирусы (ar thropod bo rne viruses – вирусы, передающиеся членистоногими) не является классификационным, а отражает одинаковый для этих вирусов путь передачи инфекции, характеризующейся природной очаговостью. Арбовирусы входят в состав нескольких семейств (Togaviridae, Flaviviridae, Bunyaviridae, Reoviridae, Rhabdoviridae, Picornaviridae, Iridoviridae, Poxviridae, Arenaviridae) и насчитывают более 500 патогенных для животных и человека вирусов, среди которых около 100 являются патогенными для человека.

К арбовирусным инфекциям относятся:

· системные лихорадки (флеботомная, Денге);

· геморраги­ческие лихорадки (желтая, Денге, Чикунгунья, крымская гемор­рагическая, омская геморрагическая, киассанурская лесная бо­лезнь);

· энцефалиты и энцефаломиелиты (клеще­вой энцефалит, американские, западный, восточный и венесу­эльский лошадиный энцефаломиелит, энцефалит Сан-Луи, до­лины Муррея, западно-нильский, японский, африканский) и др.

Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций имеет важное практическое значение, т.к. многие из них имеют одинаковые клинические проявления, нередко заболевание протекает в атипичной или стертой форме. Кроме того, сходные с арбовирусными инфекциями могут вызывать другие вирусы, бактерии, риккетсии, спирохеты. Исследование на арбовирусы проводится в специализированных лабораториях особо опасных инфекций.

Материалом для исследования являются кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы, моча, плевральная жидкость, органы трупа (мозг, печень, селезенка, легкие, почки). Лабораторная диагностика арбовирусных инфекций у человека включает экспресс-методы, вирусологический и серологический методы (схема 22).

Схема 22. Вирусологическая диагностика арбовирусных инфекций

Экспресс-диагностика – обнаружение специфических вирусных антигенов в материале от больного с помощью РИФ (лихорадка Денге, крымская геморрагическая, колорадская лихорадка), РНГА или РОНГА с эритроцитарным антительным диагностикумом (крымская ге­моррагическая лихорадка, лимфоцитарный хориоменингит), ИФА (японский энцефалит). РИФ применяют также для обнаружения вирусного антигена в слюн­ных железах переносчиков и в гемолимфе клещей (клещевой энцефалит).

Вирусологический метод в диагностическом отношенииимеет ограничения, связанные с длительностью его выполнения (до 3 недель).Вирус выделяют путем заражения новорожденных или взрослых белых мышей в мозг, внутрибрюшинно или подкожно, первично-трипсинированных или перевиваемых культур клеток (куриные фибробласты, клетки почек эмбриона свиньи, перевиваемые линии ВНК-21, СПЭВ, ПЭС, Vero, атак­же культуры тканей членистоногих - клещей, комаров). Реже заражают куриные эмбрионы в тело, амнион, желточный ме­шок, на ХАО. Заболевших в течение 2-3 недель мышей исследуют на наличие арбовирусов.

Индикацию вирусов проводят с помощью РГА (с гусиными эритроцитами), учета ЦПД, по образованию бляшек, гибели мышей и куриных эмбрионов. Идентификация выделенных вирусов осуществляется обычно с помощью РН, РТГА или РСК, реже - РИФ, РИА.

Серологический метод - исследование парных сывороток крови для выявления нарастания титра антител (в 4 раза и более) с помощью РТГА при наличии у арбовируса гемагглютинина, а при его отсутствии – РСК, РН, а также РИФ, РНГА, РОНГА, РРГ, ИФА, РИА.

Самостоятельная работа студентов

1. Учет РТГА, поставленной с сывороткой крови больного (диагноз: подозрение на клещевой энцефалит), для определения антител к вирусу клещевого энцефалита (демонстрация; положительная реакция характеризуется торможением гемагглютинации).

2. Учет РСК, поставленной с сывороткой крови больного (диагноз: подозрение на клещевой энцефалит), для определения антител к вирусу клещевого энцефалита (демонстрация; положительная реакция характеризуется задержкой гемолиза).

3. Изучить биопрепараты для профилактики, диагностики и ле­чения клещевого энцефалита:

· отечественная инактивированная культуральная сорбированная жидкая вакцина для профилактики клещевого энцефалита;

· отечественная инактивированная культуральная очищенная концентрированная вакцина для профилактики клещевого энцефалита;

· FSME immun-inject - инактивированная культуральная вакцина для профилактики клещевого энцефалита фирмы Иммуно (Австрия);

· Энцепур - инактивированная культуральная вакцина для профилактики клещевого энцефалита фирмы Кайрон Беринг (Германия);

· гетерологичный противоэнцефалитный иммуноглобулин;

· противоэнцефалитный иммуноглобулин, полученный из сыворотки крови иммунизированных убитой вакциной против клещевого энцефалита доноров, для профилактики и лечения;

· диагностикумиз вирусаклещевогоэнцефалита;

· типоспецифические диагностические сыворотки противвируса клещевого энцефалита.

Бешенство

Вирус бешенства относится к РНК-содержащим вирусам рода Lyssavirus, семейства Rhabdoviridae и поражает цен­тральную нервную систему с образованием в клетках головного мозга в области гиппокампа телец Бабеша-Негри, представляющих собой скопления вирусного антигена или самого вируса. Материалом для исследования являются спинномозговая жидкость, мокрота, моча, слюна, взятые на ранних стадиях болезни.

Экспресс-диагностика -обнаружение методом световой микроскопии телец Бабеша-Негри (наиболее распространенный метод) в мазках-отпечатках ткани гиппокампа, коры мозга и мозжечка, окрашенных по Романовскому-Гимзе, Туревичу или Муромце­ву. Тельца Бабеша-Негри представляют собой цитоплазматические включения в нейронах, сфе­рической или продолговатой формы, розовато-фиолетового цвета и размерами от 2 до10 мкм.

Вирусный антиген в мазках-отпечатках головного мозга, нижнечелюстных слюнных желез, слизистой оболочки полости рта выявляют обычно с помощью прямой РИФ. Вирус бешенства, имеющий характерную морфологию в виде пули можно выявить в препаратах мозга с помощью электронной микроскопии.

Вирусологический метод. Вирус бешенства можно выделить путем заражения новорожденных или взрослых белых мышей взвесью ткани голов­ного мозга и других органов, погибших от инфекции людей, а также ликвором и слюной больных. При наличии вируса в исследуемом материале у мышей появляются мышечный тре­мор, расстройства координации, возбуждение или параличи. Через 5 дней животные погибают. Мозг заболевших мышей иссле­дуют на наличие телец Бабеша-Негри или антигена вируса бе­шенства с помощью РИФ. Идентификацию проводят с помощью РН на мышах.

Серологический метод -выявление антител в сыво­ротке крови больных с помощью РН на мышах, РТГА, РСК, РИФ, ИФА.

При исследовании животного, нанесшего укус, определяют на­личие вируса или вирусного антигена в ткани слюнной железы с помощью РИФ и биологической пробы.

Самостоятельная работа студентов

1. Выявление включений - телец Бабеша-Негри в ткани мозга животного, погибшего от бешенства (демонстрация).

2. Изучить биопрепараты, используемые для спе­цифической профилактики и лечения бешенства:

· Рабивак – отечественная культуральная инактивированная сухая антирабическая вакцина;

· отечественная культуральная инактивированная очищенная концентрированная сухая антирабическая вакцина;

· культуральная инактивированная антирабическая вакцина фирмы Кайрон Беринг (Германия);

· отечественный гетерологичный антирабический иммуноглобулин;

· отечественный гомологичный антирабический иммуноглобулин;

· Имогам Рабис гомологичный антирабический иммуноглобулин с консервантом фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция);

· Имогам Раж -гомологичный антирабический иммуноглобулин без консерванта фирмы Пастер Мерье Коннот (Франция);