Микробиологическая диагностика проказы

Материалом для исследования являются соскоб со слизистой оболочки носа, кожные лепрозные узлы, пунктат лимфатичес­ких узлов, мокрота и др.

Микроскопический метод является основным в лабораторной диагностике проказы, так как доступных методов культивирования возбудителя проказы не разработано. Единственным методом культивирования возбудителя проказы является заражение экзотических животных – броненосцев. В мазках из патологического материала, взятого от больного проказой, палочка проказы (Mycobacterium leprae) приокраске по методу Циля-Нильсенаокрашивается в рубиново-красный цвет и располагается в виде пачек сигар.

При проказе можно поставить кожную аллергическую пробу с лепромином (реакция Мицуды), однако диагностического значения эта реакция не имеет и применяется для характеристики клинического течения болезни.

Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

Возбудителями менингококковой инфекции являются менингококки (Neisseria meningitidis). Методы лабораторной диагностики менингококковой инфекции представлены в схеме 16. Учитывая высокую нежизнеспособность менингококка во внешней среде, исследование на менингококк выполняют как можно быстрее.

Схема 16. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции

 

 

 

 

 

 

 

Микроскопический метод. Мазки из осадка спинномозговой жидкости окрашивают по методу Грама и микроскопируют. При наличии гноя и обнаружении внутри лейкоцитов грамотрицательных диплокок­ков в виде «бобов» или «кофейных зерен», обращенных вогнутой

стороной друг к другу, позволяет сделать положительное заключение о наличии у пациента менингококковой инфекции (рис. 22).

 

А б

Рис. 22. Менингококк (Neisseria meningitides) в спинно-мозговой жидкости больного эпидемическим цереброспинальным менингитом (а) и в чистой культуре (б). Окраска по Граму. х630

 

Микроскопическое исследование мазков из носоглотки бактерионосителей дает возможность выявить наряду с менингококком стафилококки, стрептококки и непатогенные нейссерии (Moraxella spp. и др.), дифференциро­вать которые по морфологическим и тинкториальным свойствам практически невозможно.

Бактериологический метод. Исследуемый материал засевают петлей на чашки с сывороточным МПА, содержащим антибиотики (ристомицин, ванкомицин, колистин и ниста-

тин) для подавления роста сопутствующей микрофлоры (преимущественно кокков). Асцитическая жидкость в качестве добавки к питательным средам в настоящее время не

применяется, так как в результате лечения больных в ней накапливаются вещества, ингибирующие рост микроорганизмов (в том числе менингококка). Ме­нингококк на сывороточном МПА вырастает при температуре 37⁰ С в атмосфере с повышенным содержанием СО₂ (используют СО₂ инкубатор, газогенераторные пакеты или эксикатор с зажженной свечой) через 48 часов, колонии величиной с булавочную головку, прозрачные, с голубоватым оттенком и ровными краями. В мазках из чистой культуры менингококка (рис.21) микрокартина иная (полиморфные дипло- и тетракокки), чем в мазках из спинно-мозговой жидкости.

Типичные для менингококка колонии пере­севают в пробирку со скошенным сывороточным МПА для выделения чистой культуры. Идентификацию чистой культуры менингококка, ее дифференциацию от сап­рофитных нейссерий, обитающих в носоглотке, проводят на основании изучения комплекса биологических свойств (табл. 18).

 

 

Таблица 18. Основные биологические свойства нейссерий

Свойства	Виды нейссерий
	N.meningitidis	N.subflava	N.flava	N.mucosa	N.sicca
Рост на МПА	-	+	+	+	+
Потребность в СО2	+	-	-	-
Желтый пигмент	-	+	+	±	±
Ферментация: глюкозы мальтозы сахарозы фруктозы лактозы	К+ К+ - - -	К+ К+ К± К± -	- - - - -	К+ К+ К+ К+ -	К+ К+ К+ К+ -
Образование полисахарида из сахарозы	-	±	+	+	+
Нитратредуктаза	-	-	-	+	-
РА с менингококковыми сыворотками сероваров А., В, С	+	-	-	-	-

 

 

Обозначения: (+) – наличие признака, (-) – отсутствие признака, (±) – непостоянный признак, К – образование кислоты

Специфичес­кий полисахаридный менингококковый антиген можно выявить в спинномозговой жидкости с помощью метода встречного иммуноэлектрофореза в геле. С этой целью в агаровом геле на стеклянных пластин­ках, размером 9x12 см, вырезают два параллельных ряда лунок диаметром 3 мм. В лунки одного ряда вносят исследуемый ликвор, в лунки другого - преципитирующие сыворотки против менингококков разных серогрупп. Пластинки помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 40-45 мин при комнатной температуре. Положительный результат характеризуется появлением 1-2 полосок преципитации между лунками со спинномозговой жидкостью и соответствующей антисывороткой.

Генодиагностика. Исследуемый материал используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР, что дает основание в случае получения положительного результата поставить предварительный диагноз.

Серодиагностика. Для ретроспективного подтверждения диа­гноза используют РНГА с парными сыворотками.

Экспресс-методы диагностики. Для выявления антигенов менингококков в мазках из исследуемого материала использу­ют ИФМ, а также непрямую латекс-агглютина­цию и РНГА с антительными диагностикумами.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопический метод. Изучение морфологии менинго­кокка в мазках из ликвора больного с подозрением на менингококковую инфекцию (демонстрация). Типично наличие грамотрицательных диплококков, располагающихся внутри лейко­цитов.

2. Бактериологический метод. Учет культуральных свойств менингококка на сывороточном МПА с ристомицином. Колонии ме­нингококков прозрачные с голубым оттенком, ровные, мелкие (с булавочную головку). Изучить биохимические свойства менингококка в соответствии с таблицей.

3. Учесть демонстрационную РНГА с парными сыворотками больного (7 и 14 дни болезни) с подозрением на менингококковую инфекцию.

4. Биопрепараты для диагностики и профилактики менингококковой инфекции:

· отечественная химическая вакцина полисахаридная менингококковая вакцина групп А и С. Применяется по эпидемиологическим показаниям. В России зарегистрирована также кубинская В+С менингококковая вакцина, состоящая из белков менингококков группы В и полисахаридов менингококка группы С, а также полисахаридная вакцина МенингоА+С фирмы Пастер Мерье Коннот;

· агглютинирующие и преципитирующие сыворотки против менингококка, применяются с диагностической целью для постановки РА с целью серологического типирования менингококка и встречного иммуноэлектрофореза для обнаружения менингококкового антигена в спинно-мозговой жидкости.

· эритроцитарные антительные менингококковые диагностикумы для обнаружения антигенов менингококка в спинномозговой жидкости с помощью РНГА.