Микробиологическая диагностика столбняка.

Для обнаружения столбнячной палочки обычно исследуют шовный и перевязочный материал, а в случае неясного течения болезни гной, кровь, кусочки тканей, выделения из матки, секционный материал. Выполняются следующие методы исследования:

Бактериоскопический метод. Не позволяет дать заключение о наличии клостридий столбняка в материале, поскольку в нем могут отсутствовать споры или находиться бактерии, сходные по морфологии с Clostridium tetani.

Бактериологический метод. Клиническая картина столбняка (высокая интоксикация, тонические и клонические судороги) весьма типична, поэтому бактериологическое исследование имеет ограниченное применение. Кроме того, бактериологический метод при столбняке не дает своевременных результатов. Это исследование проводят обычно при неясном течении болезни. Материал для исследования засевают на среду Китт-Тароцци, инкубируют при 37⁰ С в течение 3-4 суток, отмечая придонный рост бактерий. Пересевы осуществляют на сахарный МПА в чашке Петри и в пробирке с последующим выращиванием посевов в анаэростате. Нежные прозрачные колонии пересевают для получения чистой культуры на среду Китт-Тароцци, затем определяют морфологические (прямая палочка с шаровидной спорой на конце в виде барабанной палочки – рис. 6), биохимические свойства (характерна низ­кая ферментативная активность – табл. 5), токсинообразование.

Рис. 6. Палочка столбняка (Clostridium tetani).Окраска по Граму.Грамположительные спорообразующие бациллы, напоминающие барабанную палочку

 

Возможно выявление столбнячного токсина в исследуемом материале с помощью РНГА. С этой целью к исследуемому материалу добавляют эритроциты, нагружен­ные антителами к столбнячному токсину. Положительная реакция характеризуется выпадением эритроцитов с в виде осадка с фестончатыми краями.

Биопроба. Смесь исследуемого материала с антитоксической противостолбнячной сывороткой вводят внутримышечно белой мыши. Контролем служит мышь, которой вводят исследуемый материал без сыворотки. При наличии токсина у опытной мыши через 1-2 дня появляется ригидность мышц хвоста и задних конечностей, хвост принимает вид дуги и животное погибает. В опыте нейтрализации мышь выживает. В настоящее время в реальной практике биопроба не используется.

Самостоятельная работа студентов.

1. Морфологические свой­ства Clostridium tetani (окраска по Граму). Возбудитель столбняка выглядит в виде прямой палочки с шаровидной спорой, расположенной на конце, напоминая барабанную палочку.

2. Биохимические свойства Clostridium tetani (демонстрация – см. табл. 5).

3. Выявление столбнячного токсина в РНГА. К исследуемому материалу добавлены эритроциты, нагружен­ные антителами к столбнячному токсину. Положительная реакция характеризуется выпадением осадка эритроцитов с фестончатыми краями.

4. Ознакомление с биопрепаратами, применяемыми для специфической профилактики и терапии столбняка:

- адсорбированный столбнячный анатоксин. Получают путем обезвреживания столбнячного токсина формалином. Входит в состав ассоциированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины, дифтерийно-столбнячного анатоксина; выпускается также в виде монопрепарата. Применяется для профилактики;

- противостолбнячная сыворотка. Получают из сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином. Применяют для пассивной профилактики и лечения столбняка;

- иммуноглобулин донорский противостолбнячный. Полу­чен из гамма-глобулиновой фракции сыворотки крови доноров, ревакцинированных столбнячным анатоксином. Применяется для пассивной иммунизации при экстренной профилактике или для лечения начавшегося заболевания.

Микробиологическая диагностика неклостридиальной анаэробной инфекции

Анаэробную инфекцию могут вызывать не только клостридии, но представители других родов, чаще всего бактероиды (Bacteroides fragilis, другие виды бактероидов, входящих в состав нормальной микрофлоры организма человека), реже - превотеллы, порфиромонады, фузобактерии, пептококки и пептострептококки. Для диагностики инфекции, вызванной бактероидами, применяются следующие методы микробиологического исследования.

Бактериоскопический метод имеет ориентировочное значение и заключается в микроскопии мазков из патологического материала, окрашенных по Граму. Бактероиды – грамотрицательные неспорообразующие полиморфные палочки.

Бактериологический метод. Материал засевают на кровяной агар Цейсслера или селективные среды (кровяной агар с желчью и канамицином), посевы инкубируют при 37⁰ С в бескислородной или газовой атмосфере, состоящей из смеси азота, водорода, кислорода. Через 2-3 дня на поверхности агара образуются небольшие выпуклые серовато-белые колонии с ровными краями. Идентификацию культуры проводят в соответствии с признаками, указанными в табл.4.

Педиатрические аспекты темы

1. Столбняк у детей наблюдается в двух формах: а) травматический столбняк стартах детей, б) столбняк новорожденных. Столбняк новорожденных возникает в результате проникновения столбнячной палочки в пупочную рану в условиях неасептического ухода. Заболевание протекает крайне тяжело с летальным исходом в течение первых 3-5 суток с явлениями пневмонии, диспепсии, тяжелых судорог и сердечных расстройств.

2. При выборе площадки для размещения детского сада и яс­лей необходимо исследовать анаэробный титр почвы. Показатели, превышающие допустимые санитарные нормы, свидетельствуют о за­грязнении почвы анаэробами, среди которых могут находиться и Сlostridium te-tani

После изучения темы студент должен знать: таксономию, морфологические и биологические свойства возбудителей раневой анаэробной инфекции, а также патогенез, эпидемиологию, основные клинические проявления и иммунитет; основные методы диагностики, специфической профилактики и лечения этих инфекций.

Изучив тему, студент должен уметь: выполнить микробиологическое исследование с целью диагностики раневой анаэробной инфекции, оценить результаты микробиологических анализов при этих инфекциях.