Определение группы крови при помощи стандартных сывороток и цоликлонов

Техника выполнения:

1. Возьмите чистую маркированную тарелку или планшет. Если тарелка не маркирована, карандашом «стеклограф» проведите две пересекающиеся линии, делящие тарелку на четыре части.

2. Карандашом «стеклограф» на тарелке обозначьте группу крови слева направо: O (I); A (II); B (III); AB (IV).

3. Под соответствующим обозначением на тарелку нанесите по 2 капли стандартной изогемагглютинирующей сыворотки I, II, III групп двух различных серий.

4. Наденьте перчатки. Обработайте кожу подушечки пальца (ногтевой фаланги) пациента антисептиком и проколите ее копьем скарификатора. Выдавите кровь и заберите пипеткой или краем предметного стекла.

5. Нанесите каплю крови рядом с каплей сыворотки и легким покачиванием тарелки (планшета) или стеклянной палочкой с закругленным концом смешайте испытуемую кровь со стандартными гемагглютинирующими сыворотками в соотношении 1:10.

6. Тарелку (планшет) слегка покачивайте, затем оставьте под наблюдением. Через 3 мин в капле смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглютинация, добавьте по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и, слегка покачивая, смешайте.

7. По истечении 5 мин оцените результат исследования и дайте заключение о групповой принадлежности исследуемой крови.

 

Рис.59. Оценка результатов реакции агглютинации со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками

При отсутствии агглютинации во всех трех группах исследуемая кровь соответствует группе Oab (I).

При отсутствии аггютинации с гемагглютинирующей сывороткой второй группы крови исследуемая кровь принадлежит ко второй группе Ab (II).

При отсутствии агглютинации с сывороткой третьей группы крови исследуемая кровь принадлежит к третьей группе Ba (III).

При наличии агглютинации во всех трех группах продолжите исследование со стандартной сывороткой группы AB (IV), в которой агглютинации не должно быть; тогда исследуемая кровь принадлежит к четвертой группе AB (IV).

Определение группы крови

С помощью цоликлонов анти-А и анти-В

Техника выполнения:

1. Тарелку разделите стеклографом на две части, каждую из которых маркируйте буквами А и В.

2. В каждую часть тарелки нанесите по две больших капли (0,1 мл) цоликлона (анти- А и анти- В, соответственно маркировке частей тарелки).

3. Рядом с каплями цоликлонов поместите каплю исследуемой крови в 10 раз меньше капли цоликлона (0,02-0,03 мл).

4. Стеклянной палочкой или уголком предметного стекла смешайте каплю крови с каплей цоликлона.

 

Рис.60. Определение группы крови с помощью цоликлонов

5. Оцените результаты исследования через 3 мин. Хотя четкая агглютинация с цоликлонами обычно наступает в первые 30 сек., возможно и более позднее наступление агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

При отсутствии агглютинации с обоими цоликлонами – это группа крови Oab (I).

При наличии агглютинации с анти- А -цоликлоном – группа крови Ab (II).

При наличии агглютинации с анти- В- цоликлоном – группа крови Ba (III).

Наличие агглютинации с обоими цоликлонами свидетельствует о том, что необходимо исключить неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Проведите контрольное исследование данной крови с изотоническим раствором хлорида натрия; отсутствие агглютинации с этим раствором подтверждает, что исследуемая кровь группы AB (IV).

 

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС – ФАКТОРА.

СИСТЕМА АНТИГЕНОВ

СИСТЕМА АНТИГЕНОВ Rh

Практическое значение при переливании крови имеют шесть антигенов системы Rh: три разновидности Rh- антигена - Rh^o (D), rh^’ (C), rh”(E). Антигены этой системы имеются в эритроцитах, тромбоцитах, лейкоцитах и жидкостях организма. Наиболее антигенными свойствами обладает антиген D(Rh^o).

Среди европейцев 85% населения являются носителями резус-антигена, т.е. резус-положительными, а 15% не имеют резус-антигена, т.е. резус-отрицательными.

Резус-отрицательными донорами считаются лица, в эритроцитах которых не содержится ни один из антигенов Rh^o(D), rh^’ (C) и r”(E). Резус-положительными считаются лица, у которых в эритроцитах обнаруживается антиген Rh^o (D), rh^’ (C) или rh”(E). Лица, в эритроцитах которых имеются антигены rh^’ (C) и rh”(E), будучи донорами, относятся к резус-положительным, но будучи реципиентами, считаются резус-отрицательными, так как не имеют антигена Rh^o (D), который легко определяется в условиях стационара в связи с наличием универсальной антирезусной сыворотки Rh^o(D).

Женщины с резус-отрицательной кровью могут быть иммунизированы резус-положительным плодом.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА Rh^о (D)

Rh^o (D)- фактор определяется с помощью универсального стандартного реагента в пробирке без подогрева.

 

Рис.61. Определение резус-фактора универсальным реагентом антирезус анти-Rh(D) в пробирке без подогрева

Оснащение:

1. Пробирки – 3 шт.

2. Стандартный универсальный реагент антирезус анти- Rh^o(D).

3. Физиологический раствор хлорида натрия.

4. 33% раствор полиглюкина.

5. Исследуемая кровь.

6. Перчатки.

Техника выполнения:

1. Наденьте перчатки.

2. Возьмите стандартную универсальную сыворотку антирезус анти- Rh^o(D) введите в две пробирки по 2 большие капли (0,1 мл), в третью пробирку (контрольную) введите 2 капли (0,1 мл) изотонического раствора хлорида натрия и 1 каплю (0,05 мл) 33% раствора полиглюкина.

3. Во все пробирки введите по 1 небольшой капле (0,05 мл) исследуемой крови.

4. Содержимое пробирок перемешайте, вращая пробирки почти до горизонтального положения несколько раз.

5. Через 3 мин в пробирки с реагентом и кровью добавьте по 2-3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешайте содержимое двух-трехкратным вращением пробирок (не встряхивать!).

6. При наличии агглютинации в виде крупных хлопьев (агглютинатов) из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости исследуемую кровь нужно считать резус-положительной.

7. При отсутствии агглютинации (в пробирке сохраняется розовое окрашивание, гомогенное, без хлопьев), исследуемая кровь является резус-отрицательной.

8. В контрольной пробирке агглютинации не должно быть, так как не содержит антител антирезус.

 

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ПРИНАДЛЕЖНОСТИ