Определение группы крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее оснащение: два комплекта стандартных сывороток 0(I), А(II), В(III) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки АВ(IV) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку); флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой; чисто вымытая сухая тарелка; предметные стекла; стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца; стерильные шарики; спирт. Определение проводят в помещении с хорошим освещением и температурой от +15 до +25 °С.

Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой маркировкой: 0(I) — бесцветная, А(II)—голубая, В(III) — красная, АВ(IV) — желтая. Соответствующая цветовая маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки 0(I) полос нет, сыворотки А(II) —две полосы синего цвета, сыворотки В(III)—три полосы красного цвета и сыворотки АВ(IV) — четыре полосы желтого цвета. Сыворотки хранятся при температуре от +4 до + 10°С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнение являются признаками непригодности сыворотки. Титр сыворотки должен быть не менее 1:32, а активность — высокой: первые признаки агглютинации должны появляться не позднее 30 с. Сыворотки с просроченными сроками хранения к использованию не пригодны.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направлении по часовой стрелке обозначают квадраты 0(I), А(II), В(III). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий 0 (I), А(II), В(III) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла вносят последовательно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вносимой крови должна быть в 5—10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглютинации.

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен. Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками 0(I), А(II), В(III) групп (рис.2.5):

 

Рис. 2.5. Виды реакций агглютинации со стандартными сыворотками 0(I), А(II), В(III) групп

1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь 0(I) группы.

2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой А(II) группы обеих серий и положительная с сыворотками 0(I) и В(III) групп. Исследуемая кровь А(II) группы.

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой В(III) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой 0(I) и А(II) групп. Исследуемая кровь В(III) группы.

4. Сыворотки 0(I), А(II), В(III) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит АВ(1V) группе. Но, прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой АВ(IV) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к АВ(IV) группе. Выявление других комбинаций указывает на неправильное определение групповой принадлежности крови больного.

Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследование, с указанием даты исследования.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях, когда при фактическом наличии агглютинации она не выявляется или выявляется агглютинация при ее фактическом отсутствии.

Невыявленная агглютинация может быть обусловлена: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.

Чтобы избежать ошибок, необходимо использовать активные, с достаточно высоким титром сыворотки при соотношении объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:5, 1:10. Исследование проводят при температуре не выше 25 °С, оценивать результаты следует не ранее чем через 5 мин от начала исследования.

Выявление агглютинации при ее фактическом отсутствии может быть обусловлено подсыханием капли сыворотки и образованием «монетных» столбиков эритроцитов или проявлением холодовой агглютинации при проведении исследования при температуре окружающей среды ниже 15 °С. Добавление капли изотонического раствора хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке и проведение исследований при температуре выше 15 °С позволяют избежать указанных ошибок. Ошибки в определении группы крови всегда связаны с нарушением методики исследования, поэтому необходимо тщательное соблюдение всех правил исследования.

Во всех сомнительных случаях необходимо произвести повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий или с помощью стандартных эритроцитов.

Определение резус-фактора

Все методы определения резус-фактора делятся на серологические способы, генетический анализ и экспресс-методы, применяемые в клинике не требующие специального лабораторного оснащения.

Используются два экспресс-метода:

1. Экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом D в пробирке без подогрева.

2. Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (Цоликлон анти-D Супер). Этот метод в настоящее время ведущий.