Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Работа № 1. Пробы коллоидоустойчивости белков сыворотки крови.
А. Тимоловая проба Принцип метода. Метод основан на образовании плохо растворимого глобулино-тимололипидного комплекса при взаимодействии сыворотки крови с тимоло-вероналовым буфером. Ход работы. К 6 мл тимоло-вероналового буфера (рН 7,6) прибавить 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови и через 30 минут отколориметрировать при красном светофильтре в кюветах толщиной 10 мл против тимоло-вероналового буфера. Расчет произвести по калибровочному графику. В норме интенсивность помутнения колеблется в пределах от 0 до 4 условных единиц. Б. Проба Вельтмана Принцип метода. Метод основан на нарушении коллоидоустойчивости белков сыворотки крови в присутствии раствора хлористого кальция при нагревании. Ход работы. К 0,1 мл негемолизированной сыворотки крови прилить 4,9 мл воды, перемешать и нагреть над пламенем спиртовки до однократного закипания пробы. Охладить смесь и посмотреть ее содержимое на свет. Если в пробирке нет единичных хлопьев коагулированного белка, добавить еще 0,1 мл 0,5% раствора хлористого кальция и вновь прокипятить. Процедуру повторять до тех пор, пока не выпадут хлопья. В норме коагуляции наступает при добавлении 0,4 - 0,5 мл раствора хлористого кальция. Клинико-диагностическое. Осадочные пробы широко распространены в клинической практике. Данная группа проб основана на исследовании изменений коллоидной устойчивости белков сыворотки крови при патологических состояниях, сопровождающихся диспротеинемией (воспалительные заболевания, заболевания печени и почек и др.). Лабильность сывороточных белков, определяемая в первую очередь соотношением крупно- и мелкодисперсных фракций (альбумины/глобулины) и снижением коллоидоустойчивости при действии различных денатурирующих агентов, может быть связана с относительным увеличением глобулинов при уменьшении альбуминов. Большое значение имеет и относительное увеличение γ-глобулинов в глобулиновой фракции. Работа № 2. Количественное определение активности альдолазы в сыворотке крови (метод Брунса в модификации Е.Н. Валуйской и В.И. Товарницкого). Принцип метода. Альдолаза расщепляет фруктозо-1,6-дифосфат, продукты расщепления которого образуют с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде соединения, окрашенное в малиной цвет. Фруктозо-1,6-дифосфат инкубируется в буферном растворе с исследуемой пробой и гидразинсульфатом для связывания образующихся фосфотриоз. Белки осаждаются трихлоруксусной кислотой и в фильтрате фотометрически определяется окрашенное производное фосфотриоз. Интенсивность окраски пропорциональна активности альдолазы.
Ход работы. В центрифужную пробирку поместить 0,5 мл исследуемой сыворотки крови, 0,5 мл 0,5 % раствора NaHCO3, 0,12 мл гидразинсульфата, 0,12 мл 0,002 М раствора монойодуксусной кислоты, 0,12 мл дистиллированной воды и 0,12 мл раствора фруктозо-1,6-дисфосфата. Смесь в пробирке перемешеть и поместить в термостат на 1 час при 38°С. После этого в пробирку добавить 1,5 мл 10 % раствора трихлоруксусной кислоты и содержимое пробирки отцентрифугировать 10 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость 0,5 мл перенести в чистую пробирку, добавить в нее 0,5 мл 3 % раствора NаОН и оставить на 10 мин при комнатной температуре. После этого добавить 0,5 мл 0,1 % раствора 2,4-динитрофенилгидразина и поставить в термостат при 38°С. По истечении 10 мин к содержимому пробирки добавить 3,5 мл 3% раствора NаОН и колориметрировать на ФЭКе в кювете толщиной 5 мм с зеленым светофильтром против воды. Расчет. Активность альдолазы сыворотки крови выражают в условных единицах экстинкции, умноженных на 100. В норме активность альдолазы в сыворотке крови составляет 3-13 единиц и выше. Клинико-диагностическое значение. Активность альдолазы в сыворотке крови увеличивается при инфекционном гепатите, токсических поражениях печени и некоторых других заболеваниях.
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 458; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.139.70.131 (0.004 с.) |