Работа № 1. Качественные реакции на инсулин. 


Мы поможем в написании ваших работ!



ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Работа № 1. Качественные реакции на инсулин.



Инсулин является типичным гормоном белковой природы, содержащий сульфгидрильные группы цистеина, и дает цветную биуретовую реакцию на белок и реакцию Фоля на содержание SH-групп. Для реакций используют готовый препарат инсулина в ампулах.

а) Биуретовая реакция на пептидную связь.

Ход работы: В пробирку добавить 5 капель раствора инсулина, 10 капель раствора 10% раствора едкого натра и 1 каплю 1% раствора сульфата меди. Отметить появление сине-фиолетового окрашивания.

б) Реакция Фоля на серу содержащие аминокислоты.

Ход работы: В пробирку налить 5 капель раствора инсулина, добавить 5 капель 30% раствора едкого натра и 1 каплю 5% раствора уксуснокислого свинца. Отметить появление черного осадка.

Работа № 2. Качественные реакции на адреналин.

а) Реакция с хлорным железом.

Ядро пирокатехина адреналина образует с ионами железа соединения типа фенолята.

Ход работы: В пробирку поместить 3 капли 0,1% раствора адреналина, прибавить 1 каплю 1% раствора хлорного железа (FеСl3). Отметить появление изумрудно-зеленого окрашивания. При добавлении 1 капли концентрированного раствора аммиака окраска переходит в красную, а затем в коричневую.

 

б) Диазореакция.

При добавлении к раствору адреналина диазореактива образуется сложное соединение типа азокрасителя красного цвета.

Ход работы: Поместить в пробирку 3 капли 1% раствора сульфаниловой кислоты, 3 капли 5% раствора азотистокислого натрия (Nа NО2), 5 капель 0,1% раствора адреналина и 3 капли 10% раствора углекислого натрия. Отметить появление красной окраски.

 

Работа № 3. Качественная реакция на тироксин.

При разрушении тироксина щелочью образуется йодистый калий, из которого йодноватистый калий легко вытесняет свободный йод. Выделившийся йод дает с крахмалом характерное синее окрашивание.

Ход работы: Для щелочного гидролиза тиреоидина 5 таблеток тиреоидина тщательно растереть в фарфоровой ступке. Порошок переместить в колбочку для гидролиза, добавить 5 мл. 10% раствора едкого калия (КОН) и 5 мл. дистиллированной воды. Содержимое колбы кипятить 12-15 минут.

Для открытия йода к 1мл. гидролизата добавить по каплям 10% раствора серной кислоты (Н24) до кислой реакции по лакмусу, затем прибавить 3-4 капли 1% раствора крахмала и 5-10 капель 2% раствора йодноватистого калия (КIО3). Отметить появление синего окрашивания.

 

Работа № 4. Количественное определение адреналина (по Фолину).

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении интенсивности синего окрашивания, которое образуется при взаимодействии адреналина с реактивом Фолина.

Реактив Фолина состоит из солей фосфорновольфрамовой и фосфорномолибденовой кислот, которые при взаимодействии с адреналином восстанавливаются с образованием более низких окислов металлов, комплексы которых окрашиваются в синий цвет.

Ход работы: В 2 центрифужные пробирки (опыт и контроль) внести по 1мл 5% раствора трихлоруксусной кислоты. В опытную пробирку прилить 0,1мл сыворотки (плазмы) крови или 0,5мл слюны, в контрольную – такой же объем дистиллированной воды. Пробирки встряхнуть и центрифугировать при 2000 об./мин. В течение 5-6 минут. Надосадочную жидкость осторожно слить в чистые пробирки, добавить по 4мл. 10% раствора углекистого натрия (Nа2СО3) и 0,5мл. рабочего раствора Фолина. Разви-вается синяя окраска, интенсивность которого измерить в кювете на 10мм при красном светофильтре опыт против контроля.

Количество адреналина в пробе определить по калибровочному графику с содержанием в 10,15 и 20 мкг адреналина в 0,1мл воды и выражают на литр биологической жидкости.

У здорового человека в сыворотке (плазме) крови содержится 100-230 мкг/л, в слюне – 0-30 мкг/л адреналина. При эмоциональном или физическом напряжении, при феохромоцитоме (опухоль мозгового слоя надпочечников) содержание гормона многократно возрастает.

 

Эталоны ответов на тесты

Вид 1. Тест 1: А, Б, В, Е. Тест 2: Г.

Вид 2. Тест 1: 1-А, Г; 3-А, В, Г, Д; 4-Б; 5-Б.

Тест 2: 1-А; 2-В; 3-А; 4-А; 5-А.

Вид 3. Тест 1: 1→3→5→4→2→7→6.

Тест 2: 3→1→2→5→4→6.

Вид 4. Тест 1: В (+, +, -). Тест 2: Е (-, -, -).

 



Поделиться:


Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 1344; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы!

infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.236.214.123 (0.021 с.)