Гепатит в (hbv). Hbv, количественный

 

Метод: Real-Time

Материал: Плазма

В норме в материале отсутствует.

 

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Гепатит В - антропонозная инфекция, преимущественно с парентеральным механизмом заражения, которая может протекать в форме вирусного носительства, острой и хронической форм и характеризуется поражением печени с возможным развитием острой печеночной недостаточности, хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени (гепатоцеллюлярной карциномы).

Инфицирование организма человека происходит при непосредственном проникновении HBV в кровь (при каких либо инвазивных вмешательствах и при переливании крови и ее препаратов), или через слизистые и кожные покровы во время родов, при половых и тесных бытовых контактах. Попав в печень, HBV проникает в гепатоцит, где начинает интенсивно размножаться.

Развитие инфекционного процесса может происходить двумя путями: репликативным и интегративным. Репликативная форма инфекции ведет к развитию острого или хронического гепатита и циррозу печени, тогда как интегративная - к развитию «здорового» вирусоносительства, неактивного хронического гепатита, циррозу печени и первичной гепатокарциномы.

Серологическая диагностика и прогноз HBV-инфекции основан на выявлении антигенов вируса и антител к нему. Но, как оказалось, в популяции вируса гепатита В встречается достаточно мутантных штаммов (HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Поэтому метод ПЦР для диагностики HBV-инфекции является крайне важным.

ПЦР позволяет определять в исследуемом материале ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Качественное определение вируса гепатита В в материале (цельная кровь, сыворотка, плазма, биоптаты печени) подтверждает наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает патогенез заболевания. Количественный метод определения содержания ДНК вируса в плазме дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. ПЦР при ВГВ безусловно необходим для суждения о вирусной репликации. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBеAg. Выявление ДНК HBV в крови имеет большое значение для прогноза острого ВГВ. Установлено, что персистирование ДНК HBV более 8 недель после дебюта заболевания указывает на хронизацию процесса, тогда как элиминация ДНК вируса в течение первых 2 недель болезни коррелирует с полным выздоровлением.

Таким образом, определение ДНК HBV в материале является важнейшим анализом, который в совокупности с другими лабораторными исследованиями позволяет диагностировать инфекцию, определять характер инфекционного процесса, выступать в качестве критерия в проведении терапии и оценки ее эффективности.

 

 

ГЕПАТИТ С (HCV). HCV

 

Метод: Flash

Материал: Сыворотка, плазма.

В норме в материале отсутствует.

 

Вирус гепатита С - это РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, рода Hepacivirus.

Гепатит С – антропонозная инфекция. Природный резервуар HCV не установлен. Источником инфекции являются больные острым и хроническим гепатитом С, главным образом, особы с бессимптомным течением болезни (они составляют 60 – 70 %), у которых гепатит С не диагностируется. Механизм передачи HCV – парентеральный (искусственный и естественный). Искусственный парентеральный механизм передачи имеет место при всех инвазивных процедурах медицинского и немедицинского характера. Естественные пути передачи вируса гепатита С зарегистрированы, но не играют такой существенной роли как при заражениях гепатитом В (описаны случаи внутрисемейного распространения, когда заражение происходило при использовании общих зубных щеток, лезвий для бритья и др.). Риск половой передачи вируса небольшой и составляет 3 – 6 %. Перинатальная передача вируса HCV, как и HBV, возможна, но встречается редко и имеет место у 5,7% детей, рожденных матерями-носителями (при высокой вирусемии или в случае если мать ВИЧ-инфицированна).

По данным ВОЗ 3% населения в мире инфицированы вирусом гепатита С (ВГС). Особенностью ВГС-инфекции является высокая частота хронизации (до 85%), часто бессимптомное течение заболевания с труднопредсказуемым исходом. Тяжелыми последствиями хронического гепатита С могут быть цирроз печени и гепатоцеллюлярная карцинома. Возможны внепеченочные проявления HCV-инфекции.

Патогенез гепатита С недостаточно изучен. Харакетрной особенностью HCV-инфекции является то, что у 20% случаев она протекает как острый гепатит, у 70-80 %, как хронический гепатит. С HCV-инфекцией связывают 40% цирроза печени в терминальной стадии и 60% случаев гепатоцеллюлярной карциномы. Попав непосредственно в кровь, вирус проникает в гепатоцит, который и стает его главным местом репликации. У больных ВГС вирусный антиген постоянно выявляется в цитоплазмме гепатоцитов. Кроме гепатоцитов, HCV может поражать мононуклеары крови, где также возможна его репликация. HCV постоянно присутствует в крови больного человека. Орпеделено три разновидности вирусемии. Транзиторная вирусемия имеет место при остром течении ВГС с выздоровлением, непродолжительная – с дальнейшей элименацией вируса из организма. Персистирующая вирусемия наблюдается во всех случаях хронического ВГС и продолжается на протяжении всего времени болезни. Повторная вирусемия наблюдается у больных в начале заболевания с дальнейшим исчезновением вируса из крови, а потом через несколько месяцев в крови больного снова выявляется РНК HCV. Инфицирование HCV гепатоцита не приводит к интеграции его генома в геном клетки, как это имеет место при HBV-инфекции. До сих пор не решен вопрос о механизме разрушения гепатоцитов при HCV. Одни исследователи считают, что HCV вызывает цитопатическое действие гепатоцита, другие связывают разрушение гепатоцитов со специфическим и неспецифическим иммунным ответом организма. Исследования последних лет выявили присутствие в печени вирусспецифичных Т-лимфоцитов, высокого уровня виррусемии и развитие молниеносной формы гепатита на фоне иммуносупрессивной терапии Naoumov N.V. et al, 1999 считают, что Т-клеточный иммунитет является основным фактором, который влияет на клиническое течение и дальнейшие последствия HCV-инфекции. Не исключено, что оба механизма разрушения гепатоцитов может действовать одновременно или с преобладанием того или другого на разных стадиях инфекционного процесса.

Важное место в продолжительной персистенции HCV в организме пренадлежит высокой генетической изменчивости вируса, что и обеспечивает ускользание от негативного влияния иммуной системы.

Учитывая неуклонный рост заболеваемости вирусным гепатитом С, проблема этиологической диагностики этого заболевания становится все более актуальной. Сегодня наиболее распространенным методом диагностики вирусного гепатита С является иммуноферментный анализ (ИФА), направленный на выявление специфических антител в сыворотке крови. Однако, даже при использовании тест-систем 3-го поколения, считающихся наиболее чувствительными и специфичными, не всегда удается своевременно поставить диагноз. Это обусловлено существованием так называемого «серологического окна» - периода между моментом инфицирования и появлением специфических антител. Этот период может длиться от 2 недель до 6 месяцев. Кроме того, наличие антител к вирусу гепатита С не свидетельствует о наличии заболевания. Одним из основных маркеров активности патологического процесса является репликация вируса, для доказательства которой необходимо выявление самого вируса или его компонентов.

Метод полимеразной цепной реакции, позволяющий специфично выявлять нуклеиновые кислоты микроорганизмов, является одним из наиболее эффективных методов детекции репликации ВГС.

Использование тест-систем для выявления РНК-HCV на основе ПЦР позволяет выявлять инфекцию на самом раннем периоде заболевания (РНК-HCV обнаруживается в сыворотке крови уже в течение первой недели после инфицирования). Качественный ПЦР-анализ на РНК ВГС необходим также для мониторинга противовирусной терапии, так как исчезновение вирусной РНК в процессе лечения является одним из критериев его эффективности.

Определение концентрации РНК (вирусной нагрузки) необходимо для выбора схемы противовирусной терапии, прогноза и мониторинга ее эффективности. Высокие показатели вирусной нагрузки (более 2 000 000 копий РНК/мл или приблизительно 500 000 МЕ/мл) являются показателем неблагоприятного прогноза в отношении эффективности терапии. Поэтому пациентам с высокой вирусной нагрузкой рекомендуется назначение более агрессивного и продолжительного курса терапии. Через немколько недель после начала противовирусной терапии можно прогнозировать исход лечения. Согласно рекомендациям консенсусной конференции 2002 года необходимо оценивать ранний вирусологический ответ путем измерения вирусной нагрузки до начала лечения и через 12 недель после начала лечения.