Цитомегаловирусная инфекция (cmv). Igg (aviditi)

 

Подготовка - натощак.

Метод - ИФА.

Материал - сыворотка.

 

Возбудитель цитомегаловирусной инфекции принадлежит к семейству Herpes-viridae (вирус герпеса человека 5 типа), подсемейству бета, роду Cytomegalovirus.Цитомегаловирусная инфекция с разнообразными клиническими проявлениями, выраженность которых зависит от иммунного статуса больного. Инфицирование ЦМВ распространено повсеместно (АТ выявляют у 80% старше 30 лет), но клинические проявления наблюдают сравнительно редко.

Резервуар инфекции – инфицированный человек. Возбудитель передается через плаценту, контактным путем (при прохождении плода через родовые пути), при кормлении, а также при гемотрансфузиях и при половых контактах. Клинические проявления обусловлены нарушениями или несостоятельностью иммунного реагирования. Заболевания регистрируют у детей в возрасте до 2 лет, пожилых, больных с неопластическими процессами, СПИДом, после трансплантации органов и пациентов, получающих глюкокортикоиды.

ЦМВ поражает практически все органы и ткани, вызывая либо бессимптомное носительство, либо клинически выраженные состояния. Характерная особенность возбудителя – способность к образованию гигантских, или цитомегалических, клеток (25-40 мкм), содержащих тельца включений. При трансплацентарном заражении наблюдают поражения печени, селезенки, глаз, ЦНС, дыхательного тракта и др. ЦМВ способен инфицировать иммунокомпетентные клетки и латентно в них персистировать.

Перинатальные инфекции отмечают у 1% новорожденных. Чаще инфекция протекает субклинически; в редких случаях наблюдают тяжелое заболевание, часто с летальным исходом. Для подострой формы характерна атипичная интерстициальная пневмония. Для острой формы типичны поражения многих внутренних органов, включая головной мозг, почки, печень и органы кроветворения. Латентное персистирование может активироваться беременностью, множественными гемотрансфузиями или нарушениями иммунитета. У беременных и пациентов с иммунодефицитами чаще развивается мононуклеозоподобный синдром, также возможны диссеминированные, угрожающие жизни состояния (например, энцефалиты).

В серологической диагностике по-настоящему полезно выявление антител класса IgM и IgG. Наличие антител IgM свидетельствует о свежем инфицировании или реактивации латентной и персистентной инфекции. Однако повышение антител класса IgM может не выявляться в течение первых 4 недели после начала заболевания. В то же время до 2 лет после выздоровления титры могут оставаться высокими. В связи с этим однократное определение уровня антител IgM бесполезно при оценке остроты инфекции. Важно наблюдать за изменением уровня антител IgM (нарастание их уровня или снижение). Наличие антител IgM у беременных является показанием для кордоцентеза и исследования крови плода на наличие антител IgM. При наличии антител IgM он считается инфицированным.

Известно, что 15-20% вирусных гепатитов обусловлено поражением печени ЦМВ. Кроме того, продукты генов ЦМВ способны трансактивировать экспрессию HBs-и Cor-антигенов вирусного гепатита В. Поэтому, возможно, ЦМВ играет этиологическую роль в возникновении карцином печени. Установлена связь ЦМВ-инфекции с развитием сахарного диабета. ЦМВ поражает многие типы клеток крови и может персистировать в моноцитах, макрофагах, мегакариоцитах, что в ряде случаев приводит к тромбоцитопении.

Группой наибольшего риска для ЦМВ-инфекции являются лица с искусственной или естественной иммуносупрессией – ВИЧ-инфицированные, реципиенты органов, тканей, клеток, онкологические больные.

При оценке результатов выявления антител IgM следует учитывать, что наличие циркулирующих ревматоидных факторов может привести к ложноположительным результатам исследования.

Антитела IgG появляются в период реконвалесценции и у переболевших сохраняются до 10 лет. Частота выявления антител класса IgG может достигать 100% среди различных групп нвселения.

 

 

ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПАРОТИТ (Mumps virus). IgM

 

Подготовка - натощак.

Метод - ИФА.

Материал - сыворотка.

Антитела IgM в норме отсутствуют.

 

Эпидемический паротит, или «свинка», - острая инфекция с преимущественным поражением околоушных слюнных желез, часто сопровождающаяся эпидемическими вспышками. Возбудитель эпидемического паротита относится к миксовирусам.

Основной резервуар вируса эпидемического паротита – больной человек, также известны случаи заболевания собак, заразившихся от хозяев. Возбудитель передается воздушно-капельным путем. Заболевание регистрируется в течение всего года с увеличением заболеваемости в осенне-зимние месяцы. Наиболее подвержены заболеванию дети 5-10 лет; мальчики болеют чаще, чем девочки. Вирус эпидемического паротита чувствителен к действию высоких температур, инсоляции и дезинфектантов. Антигенная структура стабильна; известен один серовар вируса эпидемического паротита (иммуногенные свойства проявляют белок NP и поверхностные NH-и F-гликопротеины).

Первоначально возбудитель размножается в эпителии носоглотки, затем проникает в кровоток и в период вирусемии проникает в различные органы – околоушные железы, яички, яичники, поджелудочную, щитовидную железы, головной мозг и другие органы.

Инкубационный период эпидемического паротита составляет 14-21 суток; типичная форма заболевания проявляется как одно- или двусторонний паротит, сопровождающийся лихорадкой. Инфицирование слюнных желез происходит путем гематогенного распространения вируса (вирусемии), возникающего через 3-5 суток после появления первых симптомов. Вирусемия приводит к диссеминированию вируса по всему организму; возможны серозные менингиты, эпидидимоорхиты (регитрируют у 20-35% мальчиков в постпубертатном периоде) и др. Выздоровление сопровождается развитием стойкой невосприимчивости к повторным заражениям.

Основным методом лабораторной диагностики эпидемического паротита является определение антител классов IgM к вируса паротита в сыворотке. Антитела IgM появляются в острый период инфекции (в первые дни заболевания) и сохраняются до 2 лет. Антитела IgM к вирусу паротита применяют для диагностики острого периода паротита.

 

 

ЭХИНОКОККОЗ (Echinococcosis). IgG

 

Подготовка - натощак.

Метод - ИФА.

Материал - сыворотка.

Антитела в норме отсутствуют.

 

Эхинококкоз, тканевой гельминтоз, вызываемый личиночными стадиями E.granulosus или E.multilocularis. У человека E.granulosus вызывает образование кист главным образом в печени и легких, а E.multilocularis - образование многокамерных (альвеолярных) очагов поражения, обладающих способностью к инвазивному росту в прилегающих тканях. Эозинофилия отмечается менее чем в 25% случаев.

После хирургического удаления кист определение антител к эхинококку в сыворотке служит для контроля за радикальностью проведенной операции. Исчезновение антител через 2-3 месяца после операции говорит о радикальности удаления кисты, снижение уровня антител и последующий рост их уровня в послеоперационном периоде – о рецидиве кисты.

Определение антител к эхинококку необходимо для диагностики эхинококкоза при абсцессах печени, кистах печени, почек, головного мозга, легких.

 

 

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА

ВИРУСНЫЕ ИНФЕКЦИИ

 

ГЕПАТИТ D (HDV). HDV

 

Метод: Гель-электрофорез

Материал: Сыворотка, плазма, микробиоптаты печени.

В норме в материале отсутствует.

 

Вирус гепатита D является уникальным патогеном, занимающим промежуточное положение между вирусами и вириоидами. По своим свойствам HDV близок к сателлитным вирусам и вироидам, но в отличие от последних, у него кроме нуклеиновой кислоты есть собственный антиген. По данным современной классификации вирусов HDV не принадлежит ни к одному семейству и выделен в «блуждающий» род Deltavirus. Вирус гепатита D является «дефектным», что обусловлено отсутствием собственной оболочки вокруг вирусной РНК. Для этой цели вирус гепатита D использует HBsAg, посредством которого и происходит адгезия к мембране гепатоцита, а также способность к эффективной репликации.

Пути передачи HDV-инфекции аналогичны путям передачи гепатита В. Человек может инфицироваться парентеральным, половым путем, возможна вертикальная передача от матери плоду. При одновременном инфицировании вирусами HBV и HDV заболевание может развиться у лиц не страдавших ранее вирусным гепатитом В.

Таким образом, HDV – это всегда микст-инфекция с HBV, которая может быть в форме коинфекции или суперинфекция. Коинфекция HDV развивается при одновременном заражении вирусами гепатита В и D лиц, не страдавших ранее гепатитом дельта. При этом развивается острый гепатит смешанной этиологии, с появлением серологических маркеров двух инфекций и активной репликацией вирусов. Коинфекция носит характер острого циклично протекающего заболевания с высоким риском развития фульминантного гепатита. Суперинфекция HDV развивается при заражении вирусом гепатита-дельта лиц, страдавших хронической или затяжной HBV-инфекцией. Течение хронического гепатита при этом становится более агрессивным с высоким риском развития цирроза печени. При этом активная репликация HDV может подавлять репликацию вируса гепатита В и соответственно снижать концентрацию ДНК HBV и синтез HBsAg, уменьшая их концентрацию ниже детектируемого уровня. Эпидемиология, клиника, лечение, диагностика и профилактика HDV соответствует HBV.

Лабораторное обследование на наличие вируса гепатита D обязательно всем пациентам только после обнаружения маркеров HBV-инфекции. Необходимо помнить, что серологический спектр маркеров HBV-инфекции зачастую обеднен, что обусловлено феноменом вирусной интерференции (ингибирование репликации вируса гепатита В вирусом гепатита D).

При всех вариантах течения HDV-инфекции (ко- или супер-) метод ПЦР позволяет определить вирусную РНК в крови пациента. Поэтому данный метод исследования использоваться для контроля эффективности терапии и прогноза течения и исхода болезни. Клинически важно определить имеющуюся микст-инфекцию гепатитов В и D, так как это определяет прогноз течения и исхода вирусного гепатита. HDV усиливает некротический эффект при HBV, а, стало быть, повышает риск развития фульминантной формы болезни у или усиления цирротических процессов в печени у больного хроническим вирусным гепатитом В, снижает вероятность благоприятного ответа на противовирусную терапию.

 

 

ГЕПАТИТ G (HGV). HGV

 

Метод: Гель-электрофорез

Материал: Сыворотка, плазма, микробиоптаты печени.

В норме в материале отсутствует.

 

Вирус гепатита G – это РНК-содержащий вирус из семейства Flaviviridae, рода Hepacivirus.

Гепатит G – антропонозная кровяная инфекция. Источником инфекции являются больные острым и хроническим гепатитом G и «здоровые носители». РНК HGV обнаруживается в сыворотке и плазме крови, в мононуклеарных клетках периферической крови, слюне и сперме. Механизм передачи вируса – парентеральный. Основными факторами передачи вируса является кровь и ее препараты. Парентеральный механизм передачи реализуется и при использовании нестерильных шприцов. HGV, подобно вирусам HCV и HBV, может распространяться половым путем.

В настоящее время доказано генетическое разнообразие вируса, имеющего 5 генотипов. ВГG протекает чаще всего в иннапаратных или субклинических формах, что приближает его к HCV-инфекции. Хотя данный вирус выделен из крови и биоптатов печени больных хроническим гепатитом, что практически доказывает патогенность вируса, имеющиеся в настоящее время факты заставляют некоторых гепатологов критически отнестись к способности HGV-инфекции вызывать поражения печени. Это обусловлено рядом обстоятельств: так, вирус гепатита G чаще всего встречается в форме микст-инфекции с HCV или HBV (в виде ко- или суперинфекции); у 2% клинически здоровых доноров в крови определяется РНК вируса гепатита G; до сих пор не уточнено место репликации вируса (предполагается, что в сердцевинном белке имеется дефект, поэтому для его репликации требуется вирус гепатита C); не наблюдается корреляция между уровнем вирусемии и активностью АлАТ. Вместе с тем, не вызывает сомнения что выявление HGV- инфекции у пациента является важным фактором в клиническом понимании и оценке статуса больного с ВГ.

На сегодняшний день главным методом диагностики гепатита G является ПЦР, а маркером РНК HGV. Так как серологические методы исследования (ИФА) еще не доступны широкой клинической практике (разрабатываются тест-системы для выявления антител класса IgG к Е-2 белку HGV), метод ПЦР остается единственным способом доказать наличие инфицирования этим вирусом. Многие авторы считают обязательным обследование на HGV- инфекцию методом ПЦР:

· всех серонегативных больных острым или хроническим вирусным гепатитом;

· пациентов с маркерами HCV-инфекции, особенно готовящихся к проведению противовирусной терапии;

· доноров крови;

· органы или ткани, предназначающиеся для трансплантации.

 

ГЕПАТИТ А (HAV). HAV

 

Метод: Гель-электрофорез

Материал: Сыворотка, плазма.

В норме в материале отсутствует.

 

Вирус гепатита А - это просто организованный РНК-вирус, относящийся к семейству Picornaviridae роду Hepatovirus.

Вирусный гепатит А - остро протекающее заболевание, характеризующееся преимущественным поражением печени и отсутствием тенденции к хронизации в динамике заболевания. Выраженность клинических проявлений заболевания варьирует в широких пределах: от бессимптомных форм, и форм протекающих без желтушного синдрома, которые регистрируются преимущественно у детей до клинически выраженных форм, протекающих с высокой лихорадочной реакцией и серьезными поражениями паренхимы печени. Источником инфекции являются больные как с выраженными, так и с бессимптомными формами инфекции. Передача возбудителя происходит фекально-оральным путем (через воду, пищевые продукты, грязные руки, различные предметы).

Вирус гепатита А обладает гепатотропизмом. После заражения репликация вирусов происходит в кишечнике, а оттуда через портальную вену они проникают в печень и реплицируются в цитоплазме гепатоцитов. Повреждение гепатоцитов возникает не за счет прямого цитотоксического действия, а в результате иммунопатологических механизмов.

ПЦР позволяет выявлять HAV-РНК практически с первых дней после заражения. РНК вируса гепатита А может выявлено в крови и фекалиях больных. Обнаружение HAV-РНК однозначно указывает не только на наличие вируса, но и его активную репликацию. Сроки выявления РНК вируса, как правило, совпадают со сроками выявления HAV-Ag. Как и HAV-Ag, РНК вируса является прямым показателем инфекционной опасности. В крови РНК обнаруживается у большинства больных в острый период инфекции, что подтверждает возможность посттрансфузионного и других парентеральных путей заражения ГА. В целом, индикация HAV-РНК может явиться арбитражным методом подтверждения диагноза и оценки активности инфекционного процесса.

 

ГЕПАТИТ В (HBV). HBV

 

Метод: Flash

Материал: Цельная кровь, сыворотка, плазма, микробиоптаты печени.

В норме в материале отсутствует.

 

ВГВ является сложноорганизованным ДНК-содержащим вирусом и относится к семейству Hepadnaviridae роду Orthohepadnavirus.

Гепатит В - антропонозная инфекция, преимущественно с парентеральным механизмом заражения, которая может протекать в форме вирусного носительства, острой и хронической форм и характеризуется поражением печени с возможным развитием острой печеночной недостаточности, хронического гепатита, цирроза печени и первичного рака печени (гепатоцеллюлярной карциномы).

Инфицирование организма человека происходит при непосредственном проникновении HBV в кровь (при каких либо инвазивных вмешательствах и при переливании крови и ее препаратов), или через слизистые и кожные покровы во время родов, при половых и тесных бытовых контактах. Попав в печень, HBV проникает в гепатоцит, где начинает интенсивно размножаться.

Развитие инфекционного процесса может происходить двумя путями: репликативным и интегративным. Репликативная форма инфекции ведет к развитию острого или хронического гепатита и циррозу печени, тогда как интегративная - к развитию «здорового» вирусоносительства, неактивного хронического гепатита, циррозу печени и первичной гепатокарциномы.

Серологическая диагностика и прогноз HBV-инфекции основан на выявлении антигенов вируса и антител к нему. Но, как оказалось, в популяции вируса гепатита В встречается достаточно мутантных штаммов (HBеAg-негативных), которые не улавливаются обычными серологическими тестами. Поэтому метод ПЦР для диагностики HBV-инфекции является крайне важным.

ПЦР позволяет определять в исследуемом материале ДНК вируса гепатита В как качественно, так и количественно. Качественное определение вируса гепатита В в материале (цельная кровь, сыворотка, плазма, биоптаты печени) подтверждает наличие вируса в организме больного и тем самым устанавливает патогенез заболевания. Количественный метод определения содержания ДНК вируса в плазме дает важную информацию об интенсивности развития заболевания, об эффективности лечения и о развитии резистентности к антивирусным препаратам. ПЦР при ВГВ безусловно необходим для суждения о вирусной репликации. Вирусную ДНК в сыворотке крови обнаруживают у 50% больных при отсутствии HBеAg. Выявление ДНК HBV в крови имеет большое значение для прогноза острого ВГВ. Установлено, что персистирование ДНК HBV более 8 недель после дебюта заболевания указывает на хронизацию процесса, тогда как элиминация ДНК вируса в течение первых 2 недель болезни коррелирует с полным выздоровлением.

Таким образом, определение ДНК HBV в материале является важнейшим анализом, который в совокупности с другими лабораторными исследованиями позволяет диагностировать инфекцию, определять характер инфекционного процесса, выступать в качестве критерия в проведении терапии и оценки ее эффективности.