Некоторые резистентные формы микроорганизмов, получающие эпидемическое распространение.

Антибиотикорезистентные S. pneumoniae (АРП) - пневмококки, резистентные к антибактериальным препаратам трех и более классов (например, к пенициллину, ко-тримоксазолу и макролидам).

Бактерии, продуцирующие β-лактамазы расширенного спектра действия (БЛРС), способны инактивировать β-лактамные антибиотики различных классов, включая пенициллины и цефалоспорины I-IV поколений, кроме цефамицинов (цефокситин, цефотетан) и карбапенемов.

Бактерии, продуцирующие β-лактамазы широкого спектра действия, способны инактивировать пенициллины, включая аминопенициллины (ампициллин, амоксициллин), антисинегнойные пенициллины (карбенициллин, пиперациллин и др.), цефалоспорины I и отчасти II (цефаклор) поколений.

Ванкомицинорезистентные энтерококки (VRE) – Enterococcus spp. для которых МИК для ванкомицина составляет 32 мг/л и более.

Метициллинорезистентный S. aureus (MRSA) – S. aureus, резистентные к метициллину (оксациллину), которые содержат ген mecA, обусловливающий продукцию измененного пенициллинсвязывающего белка - ПСБ-2. ПСБ-2 плохо связывает β-лактамные антиботики и они не транспортируются в бактерии. MRSA устойчивы ко всем β-лактамным антибиотикам и обычно резистентны к антибиотикам других классов, поэтому их называют «множественно-резистентные стафилококки».

S.aureus с промежуточной резистентностью к ванкомицину или S.aureus с промежуточной резистентностью к гликопептидам – S.aureus, которые характеризуются значениями МИК ванкомицина 8–16 мг/л.

БИОЛОГИЧЕСКИЙ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ) МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ

Биологический (экспериментальный) метод исследования (ЭСМИ) - совокупность способов искусственного воспроизведения клинической картины инфекционных болезней или их синдромов на лабораторных животных.

Цели ЭСМИ.

1. Выделение и идентификация чистой культуры микроорганизмов, если её невозможно получить на питательных средах:

а) из-за большого количества в материале посторонней микрофлоры, обладающей ингибиторным действием (например, выделение возбудителя чумы из разлагающихся трупов грызунов);

б) для выделения микроорганизмов, которые на питательных средах не растут (риккетсии, вирусы).

2. Определение вирулентности и патогенности микроорганизмов.

3. Индикация и идентификация экзотоксинов.

4. Изучение патогенеза инфекционных болезней при воспроизведении экспериментальных инфекций.

5. Производство биологических препаратов (профилактических, диагностических и лечебных сывороток, вакцин, культур тканей).

6. Проверка безвредности и эффективности лечебных препаратов (химиопрепаратов, иммунопрепаратов).

7. Лабораторные животные служат донорами крови для приготовления кровяных питательных сред и проведения исследований, связанных с использованием крови и её ингредиентов.

Этапы ЭСМИ.

Этап ЭСМИ. Взятие и обработка материала.

К выполнению экспериментальных исследований на животных допускаются лица, имеющие высшее медицинское, медико-биологическое, фармацевтическое, ветеринарное, зоотехническое или биологическое образование, после того как они освоили правила обращения с лабораторными животными и приобрели практические навыки.

Материал для исследования забирается в асептических условиях, в стерильную посуду, гомогенизируется и используется для заражения возможно быстрее.

Этап ЭСМИ. Выбор и заражение лабораторного животного.

Выбор лабораторного животного. В медико-биологических исследованиях используется около 250 видов животных.

Нелинейные животные. Одни виды постоянно разводят в лабораториях, питомниках и предприятиях по производству биопрепаратов, это так называемые лабораторные животные: белые мыши, белые крысы, морские свинки, кролики, хомяки, кошки, собаки, обезьяны, бараны, лошади. Других животных периодически отлавливают для эксперимента (полевки, песчанки, суслики, хорьки, сурки, лемминги). От общего числа лабораторных животных на долю белых мышей приходится около 70%, белых крыс – 15%, морских свинок –9%, кроликов – 2%.

Линейные животные. Методом тесного инбридинга (внутриродственного скрещивания) удалось вывести более 200 линий мышей, свыше 20 линий крыс, 7 линий морских свинок, несколько линий кроликов. Среди диких животных чистых линий не существует. На выведение линий затрачивается не менее 8–10 лет тщательно выполняемой работы. С целью выведения определённой линии лабораторных мышей, крыс или других животных осуществляют братско-сестринское скрещивание на протяжении более 20 последовательных поколений и лишь тогда достигают 100% гомозиготности. Линейные (инбредные) животные ценны тем, что являются генетически однородными и отличаются от нелинейных животных постоянными реакциями на воздействие физиологических, химических и патогенных факторов. Каждой линии присущи свои передающиеся по наследству особенности и свойства (повышенная или пониженная чувствительность к возбудителям инфекционных заболеваний, опухолям). По рекомендации международного комитета по стандартизации генетической номенклатуры названия линий пишутся заглавными латинскими буквами. В заглавии линии заложено её происхождение, год создания какой-либо особенности животных данной линии. Напр., среди белых мышей наиболее распространены линии A, CBA, BALB, BAJJ, C57BL, C57BR, C58, C3H.

Линейные лабораторные животные очень чувствительны к неблагоприятным факторам окружающей среды, поэтому условия содержания их должны быть лучше, чем нелинейных животных.

Потомство линейных животных, у которых в силу различных причин прекращено разведение методом инбридинга теряет линию, так как у них накапливаются мутации, а гомозиготность понижается. Уменьшение гомозиготоности при этом прогрессирует от поколения к поколению, а специфические для данной линии признаки могут быть потеряны, ослаблены или извращены.

Животные-гнотобионты и животные-гнотофоры. Как линейные, так и нелинейные животные являются носителями возбудителей многих вирусных, бактериальных, грибковых заболеваний, которые затрудняют выполнение точных исследований. В процессе эксперимента, особенно длительного, присутствующие в организме животного возбудители могут активироваться и извратить характер реакции на испытуемый агент. В связи с этим возникла потребность получения лабораторных животных, лишённых микроорганизмов (гнотобионтов) или имеющих в организме контролируемую микрофлору (гнотофоры). Животных-гнотобиотов получают от беременных самок, которым проводят кесарево сечение в определённый период перед родами. Новорожденных помещают на утеплённые подстилки в клетки. Корм, воду, подстилку и другие материалы, необходимые для обеспечения жизнедеятельности безмикробных животных, подвергают стерилизации в автоклавах. Животных-гнотобиотов содержат в стерильных условиях в течение всей их жизни. В гнотобиотических изоляторах получены безмикробные мыши, крысы, морские свинки, хомячки, кролики, кошки, собаки, ягнята, козлята, поросята, обезьяны.

Выбор вида, линии, возраста и пола животных диктуется целями исследований. Отобранных животных тщательно осматривают, больных выбраковывают. Перед проведением эксперимента все животные должны быть выдержаны в виварии на 2-х недельном карантине.

Животные, взятые в эксперимент, должны быть здоровы, чувствительны к предполагаемому возбудителю, однородны по породе, линии, массе, возрасту, полу, упитанности, промаркированы.

Основные способы маркировки лабораторных животных:

– татуировка ушей тушью у животных, имеющие большие непигментированные ушные раковины (кролики, свинки, крысы, мыши);

– мечение мышей и крыс краской (насыщенным раствором пикриновой кислоты, 0,5% раствором генцианвиолета, фуксином, эозином);

– с помощью колец или жетонов из мягкой белой жести, которые закрепляют на ушах или лапках (так маркируют новорожденных лабораторных животных).