Фиксация животных при проведении исследований.

Кролики отличаются от других лабораторных животных спокойствием и относительно слабым сопротивлением при фиксации. Для фиксации их привязывают к специальным станкам или столам. Следует иметь в виду, что при сильном запрокидывании головы у кроликов легко наступает смерть от удушья. Помощник может зафиксировать кролика двумя руками: левой рукой за кожу спины в области затылка, правой – за кожу в области крестца. Кролика можно опеленать куском прочной материи. Удобен также способ фиксации с помощью индивидуального иммобилизационного станка, ящика с круглой прорезью в передней стенке.

Фиксация морских свинок не представляет затруднений. Левой рукой животное удерживают за спину и грудь так, чтобы большой и указательный пальцы охватывали шею, а другие пальцы передней руки обездвиживали передние конечности и ограничивали движения головы, правой рукой снизу удерживают заднюю часть тела и обездвиживают животом вверх.

Фиксация белых крыс обычно является наиболее сложной. Животное берут за кожу спины или хвост. Помощник левой рукой берет крысу за кожу в области затылка и фиксирует этим голову и передние конечности, а правой рукой удерживает задние конечности и хвост. После этого животному придают нужное положение. Для фиксации крыс предложен ряд приспособлений – сетки, цилиндры, гильзы.

У белой мыши захватывают кожу спины на затылке большим и указательным пальцами левой руки, а остальными пальцами этой же руки удерживают задние конечности и хвост. Эти же манипуляции можно выполнять раздельно двумя руками. Фиксированное животное располагают в нужном положении.

Методы заражения лабораторных животных.

Применяют следующие методы заражения животных: накожный, внутрикожный, подкожный, внутримышечный, внутривенный, пероральный, интраназальный, внутриполостной (в брюшную полость, в грудную полость, в переднюю камеру глаза), внутриорганный (в мозг, в лёгкие).

Способ заражения зависит от вида материала, вида животного, тропизма микроба.

Участок кожи, где проводится манипуляция, обрабатывают в такой последовательности:

· выщипывают или выстригают (выбривают) шерсть;

· удаляют остатки шерсти депилятором;

· участок кожи подвергают антисептической обработке одним из способов (спиртом, спиртом в смеси с эфиром 1:1, 10% настойкой йода).

Материал вводят с соблюдением правил асептики. При болезненных вмешательствах предварительно проводят анестезию.

Накожный метод. На кожу спины или живота, освобождённую от шерсти, наносят царапины скарификационной иглой. Материал берут стеклянной палочкой и втирают досуха.

Внутрикожный метод. Местом введения обычно выбирают кожу спины или живота. Шерсть на этом месте за два дня до опыта удаляют депилятором. Используют очень тонкие и острые иглы с пологим скосом. Иглу вводят в кожу под очень острым углом скосом вверх. Инъецируют до 0,1 мл раствора. Образовавшееся вздутие («лимонная корочка») не исчезает 3–5 минут.

Подкожный метод. Иглу шприца вводят в основание кожной складки предполагаемого места инъекции. После прокола кожи направление иглы меняют и медленно вводят жидкость – мышам не более 1,0 мл, морским свинкам и крысам –1,5 мл, кроликам –3,0 мл, место введения обрабатывают антисептиком. Следят за тем, чтобы введенный материал не вытекал наружу.

Внутримышечный метод. Лучшим местом введения считается участок с развитым мышечным слоем в области верхней трети задней лапы животного. Острие иглы направляют почти перпендикулярно участку.

Внутривенный метод. Инъекцию производят в краевую вену уха кроликов, яремную вену морских свинок, хвостовую вену крыс или мышей. Обрабатывают кожу над веной. Для лучшего наполнения вены ее пережимают ниже будущего введения или кожу обогревают теплой (55⁰С) водой. Материал вводят медленно.

Пероральный метод. Объём жидкости, вводимой перорально, зависит от вида и возраста животного.

Кроликов и морских свинок пеленают и располагают в положении, близком к вертикальному. Материал вводят принудительно с помощью тонкого эластичного зонда. Процесс введения зонда требует навыков. Перед введением зонда животному вставляют роторасширитель с отверстием в середине. Продвижение зонда по пищеводу обычно не вызывает затруднений, если его конец смазан вазелином, а у животного вызывают глотательные движения закапыванием в рот нескольких капель воды. Через воронку или шприц жидкость вливают в желудок.

Крыс или мышей помощник фиксирует в вертикальном положении, рот открывают браншами пинцета. Жидкость можно вводить двумя способами: а) шприцем со специальной изогнутой иглой, конец которой утолщен в виде шарика с боковым отверстием; б) шприцем с обычной иглой, на которую насажен тонкий эластичный зонд.

Интраназальный метод. Животное фиксируют, с помощью эфира или хлороформа вызывают состояние лёгкого наркоза. Материал вводят в нос животному маленькими каплями шприцем и иглой с насаженным тонким зондом. Материал можно капать непосредственно на нос животного, контролируя его попадание в носовые ходы.

Внутрибрюшинный метод. Инъекцию производят в задней трети живота. Место введения обрабатывают антисептиком до и после инъекции. Животное располагают вниз головой или в наклонном положении. Несколько отступив от средней линии, брюшную стенку прокалывают, вводят иглу под тупым углом к стенке. Игла должна быть с притупленным концом во избежание повреждения внутренних органов.

Этап ЭСМИ.

А. Наблюдение за животным. В период наблюдения за животным должен быть обеспечен надлежащий уход; методика наблюдения зависит от ожидаемого эффекта:

а) при определении вирулентности, токсигенности, токсичности наблюдают появление инфильтратов или учитывают гибель животного;

б) при этиологической диагностике наблюдают за возникновением признаков заболевания; берут материал для бактериологического и серологического исследования, соблюдая правила асептики; ставят аллергические пробы.

Б. Гибель (умерщвление) животного и вскрытие трупа.

Между смертью и вскрытием трупа животного должно проходить как можно меньше времени, так как кишечная флора даже при температуре холодильника проникает в ткани, кровь, органы через 20–27 часов. Более целесообразно умерщвлять животное в агональный период.

Животные, которые подвергались в эксперименте воздействиям, поведшим за собой понижение жизнеспособности, подлежат умерщвлению гуманным методом (эвтаназии). Эвтаназия не должна выполняться в помещении, в котором находятся другие лабораторные животные. Умерщвление часто осуществляется путём декапитации с использованием специальных гильотин, путём передозировки наркотических веществ (эфира, хлороформа, барбитуратов), электрическим током, воздушной эмболией (внутривенным введением воздуха), полным обескровливанием при использовании различных методов обезболивания.

При вскрытии труп кролика фиксируют на специальной доске за вытянутые лапы. Трупы морских свинок, крыс, мышей можно прикалывать старыми инъекционными иглами к парафиновой пластине в эмалированном лотке. Всю шерсть животного смачивают дезинфектантом (спирт, 5% карболовая кислота, 5% хлорамин). Кожу разрезают по средней линии живота от симфиза до подбородка. На уровне передних и задних лап делают боковые разрезы. Кожу отсепаровывают, отворачивают в стороны и прикалывают к пластине.

Ход вскрытия зависит от задач исследования: изучают паталогоанатомическую и патоморфологическую картину, делают посев органов для выявления обсеменённости и выделения чистой культуры, из внутренних органов готовят мазки-отпечатки.

Вскрытие начинают с грудной полости, вырезая грудину. Если в грудной полости есть экссудат, из него делают мазки и посев. Кровь из сердца забирают проколом пастеровской пипеткой с оттянутым капиллярным концом. Проводят осмотр органов грудной полости и при необходимости забирают из них кусочки ткани. Далее вскрывают брюшную полость. При наличии экссудата его засевают в питательную среду. Затем тщательно осматривают и исследуют органы брюшной полости. Взятие материала из паренхиматозных органов проводят следующим образом: поверхность органа прижигают нагретым в пламени спиртовки скальпелем; прижжённый участок органа прокалывают стерильной пастеровской пипеткой с оттянутым концом или стерильной петлей; взятый материал засевают.

Все этапы работы с лабораторными животными регистрируют в специальном журнале с графами:

· Вид лабораторного животного.

· Цель заражения.

· Время заражения.

· Материал, примененный для заражения.

· Изменение поведенческих реакций животного после заражения.

· Время гибели (умерщвления) животного.

· Изменения, обнаруженные при вскрытии.

· Материал, взятый для посева.

· Свойства микроорганизма.

· Вид микроорганизма.

После вскрытия труп животного сжигают, автоклавируют или кипятят 1–2 часа в растворе фенола; инструменты дезинфицируют, очищают, затем стерилизуют. Трупы животных, павших от особо опасных инфекций, вскрывают в специальных помещениях с соблюдением особых мер предосторожности.

4этап ЭСМИ. Идентификация выделенной культуры и заключение по результатам исследования.

Оценка ЭСМИ.

Достоинства метода:

· относительно высокая чувствительность;

· высокая специфичность;

· ранний метод исследования.

Недостатки метода:

· длительность;

· не всегда доступен;

· опасность инфицирования;

· дорогостоящий.

Таблица 17