Метод разведений в жидких средах

Характеристика метода. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации.

Особенности метода. Готовят 8 - 12 серийных двукратных разведений антибиотика в пробирках с бульоном Мюллер-Хинтона.

Техника проведения. Готовят суспензию тест-микроорганизмов 10⁶ КОЕ/мл, вносят суспензию в соотношении 1:1 в Мюллер-Хинтон бульон с различными концентрациями антибиотика (посевная доза 5х10⁵), инкубируют при 35⁰С 18–24 часа.

Принцип учета. Микроорганизмы растут на среде, вызывая ее помутнение, если концентрация антибиотика ниже ингибирующей, и не растут - если больше (среда прозрачна).

Оценка чувствительности. Определяют МИК тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

Оценка метода. Метод трудоемкий, требует затрат большого количества сред, посуды, времени. Основной метод регионального или национального мониторинга антиботикорезистнтности.

Е-тест (эпсилометрический метод)

Характеристика метода. Количественный. Определяет активные препараты и их ингибирующие концентрации.

Особенности метода. Используют стандартные пластиковые полоски с нанесенным на них экспоненциально убывающим градиентом концентрации антибиотика, например от 256 до 0,016 мкг/мл.

Техника проведения. Готовят суспензию тест-микроорганизмов в концентрации 10⁸ КОЕ/мл, погружают в нее стерильный тампон, равномерно штриховыми движениями распределяют суспензию по поверхности среды Мюллер-Хинтона или АГВ (рН 7,2±0,1), поверхность среды высушивают. На чашку диаметром 90 мм наносят не более 2 полосок E-теста (на чашку диаметром 150 мм - не более 6), инкубируют при 35⁰С 16–18 часов.

Принцип учета. Антибиотик из Е-теста центробежно диффундирует в среду, в месте его активного действия рост микроорганизмов подавляется и образуется эллипсоидная (каплевидная) зона задержки роста. Так как концентрация антибиотика в полоске убывает, то получается не концентрическая, а эллипсоидная зона задержки роста. Место пересечения основания эллипса со шкалой концентраций E-теста соответствует МИК антибиотика (рис. 46).

 

Рис. 46. Метод Е-тестов

Оценка чувствительности. Ингибиция роста микроорганизма вокруг полоски-носителя происходит только в той зоне, где концентрация антибиотика выше МИК. Определяют МИК тест-культуры и сравнивают со стандартными величинами МИК. Относят тест-культуру к чувствительным, умеренно чувствительным или резистентным.

Оценка метода. Простой, не трудоемкий, позволяет тестировать привередливые микроорганизмы (стрептококки, пневмококки, гемофилы, гонококки, анаэробы). Не получил широкого распространения из-за дороговизны.

Ускоренный метод

Характеристика метода. Полуколичественный или количественный. Позволяет получить результат через 4-6 часов. Основан на выявлении начальных стадий роста бактерий.

Особенности метода. Используют индикаторы окислительно-восстановительного потенциала (ОВП) - хлорид тетразолия или индикаторы рН среды (в том числе флюоресцентные), которые позволяют выявлять рост микроорганизмов на ранних стадиях.

Техника проведения. Определение чувствительности проводят либо диско-диффузионным методом, либо методом разведений в бульоне (см. выше). При использовании диско-диффузионного метода через 4-6 часов агар с культурой и нанесенными дисками обрабатывают индикатором окислительно-востановительного потенциала - хлоридом тетразолия. В случае использования метода разведений в бульоне изначально в жидкую среду с антибиотиками добавляют индикатор рН и сбраживаемые углеводы, при этом рН среды устанавливают нейтральной 7,2±0,2. За счет индикатора среда приобретает определенный цвет.

Принцип учета. После обработки ОВП индикатором в местах роста микроба среда окрашивается в красный цвет, при отсутствии роста микроба цвет среды не изменяется. В случае использования индикатора рН, если антибиотик не активен, то микроорганизмы растут и выделяют кислые метаболиты, индиктор рН меняет цвет. Если антибиотик активен, то микроорганизмы погибают и среда не изменяет свой цвет.

Оценка чувствительности. Оценка результатов проводится по диаметру неокрашенных зон вокруг дисков. В жидких средах по изменению цвета среды в пробирках определяют МИК антибиотика.

Оценка метода. Простой, ориентировочный.

Автоматизированнный метод с использованием автоматических