Микробиологическая диагностика.

Бактериологический метод диагностики – выделение и идентификация культуры. На наличие возбудителей указывает появление мелких колоний, окружённых зоной альфа-гемолиза. Дальнейшую дифференциальную диагностику обычно проводят по отсутствию способности расти в жидких средах, содержащих 6,5% NаС1, и гидролизовать эскулин в присутствии солей жёлчных кислот; также дифференцирующим признаком считают отсутствие чувствительности к оптохину (последний не ингибирует рост бактерий). Дополнительным признаком служит чувствительность большинства изолятов к пенициллину.

ЭНТЕРОКОККИ

Морфология

Энтерококки — овальные бактерии размером 0,6-2,0x0,6-2,5 мкм; в мазках из культур, выращенных в жидких средах, они располагаются парами или короткими цепочками. Энтерококки не образуют капсул; некоторые виды ограниченноподвижны, имеют небольшие жгутики. Бактерии расщепляют углеводы с образованием кислоты без газа; каталаза-отрицательны, растут при температуре 10-45 "С (оптимум 37 °С), обитатели кишечника различных позвоночных. У человека наиболее часто поражения вызывают E.faecalis, E.faecium и Е. durans.

Роль в патологии

Энтерококки входят в состав микробных биоценозов полости рта, кишечника и мочеполовой системы взрослых. Большинство инфекций носит эндогенный характер. Показана возможность нозокомиальной передачи микроорганизмов; частота подобных инфекций возрастает на фоне широкого применения цефалоспоринов широкого спектра действия.

Клинические проявления

Энтерококки часто вызывают поражения мочеполовой системы у пациентов с установленными катетерами; подобные поражения у клинически здоровых лиц наблюдаются значительно реже, вызывают эндокардиты, бактериемию, способны вызывать пищевые отравления и дисбактериозы кишечника.

Микробиологическая диагностика

Выделение возбудителя обычно не представляет затруднений, так как энтерококки хорошо растут на простых питательных средах. Через 18-24 ч они образуют сероватые колонии диаметром 0,4-1 мм. На кровяном агаре энтерококки могут приводить к образованию зоны неполного гемолиза. Селективно-дифференциальными средами для энтерококков служат среды Диф-3 и Диф-5.

Нa среде Диф-3, содержащей теллурит калия, энтерококки образуют характерные чёрные колонии, что обусловлено способностью бактерий восстанавливать теллур.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.

Иммунохимические исследования. При отдельных нозологических формах стрептококковой инфекции устанавливают наличие специфических антигенов в крови больного с помощью РСК, реакции преципитации и др.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.

Рис.2.

 

. Микробиологическое исследование при стрептококковой инфекции

 

Гной, раневое отделяемое, экссудат, мокрота, моча и др.

I этап Бактериоскопическое Бактериологическое исследование исследование

Мазок, окраска по методу Грама

определение антител к О-стрептолизину

Предварительный ответ

Первичный посев

на кровяной агар

Ориентировочное заключение

в чашку Петри

для получения

изолированных колоний

Экспресс-методы диагностики

| 1

Биохимические Иммунохимичес-
и молекулярно- кие исследования:
биологические определение
исследования: ПЦР антигенов

стрептококков

Предварительный ответ

Предварительный ответ

II этап

 

Учет результатов посева по культуральным признакам

 

Предварительный ответ

Характер колоний

Мазок, окраска по методу Грама

Гемолиз

 

III этап

Пересев типичных колоний на скошенный агар (получение чистой культуры)

 

Идентификация чистой культуры

 

 

Определение чувствительности к антибиотикам

 

Серологическая идентификация и серотипирование (определение серогруппы)

Коринебактерии

Род Corynebacterium семейства Corynebacteriaceae. Большинство видов, принадлежащих к роду,являются патогенными и условно-патогенными микроорганизмами.

Возбудитель дифтерии - Corynebacterium diptheriae

Эпидемиология. Резервуар инфекции — больной человек, реконвалесцент, бактерионоситель. Основной путь передачи — воздушно-капельный, возможно заражение через предметы, используемые больным, иинфицированные пищевые продукты (обычно молоко). На игрушках сохраняется до 2 нед, в пыли — до 5 нед, в воде и молоке — до 6-20 сут, на рассеянном свету остаётся жизнеспособным до 8ч. Дезинфектанты и антисептики инактивируют бактерии в течение 5-10 мин. Пик заболеваемости приходится на осенне-зимние месяцы.

Морфология

Дифтерийная палочка представлена тонкими, слегка изогнутыми или прямыми палочками размером 1-12x0,3-0,8 мкм, образуют неподвижные прямые или слегка изогнутые палочки, окружённые микрокапсулой, не образуют спор. Часто они утолщены на концах и напоминают булаву [от греч. согупе, булава], характерен выраженный полиморфизм – встречаются кокковидные, толстые колбовидным утолщением на концах, нитевидные, ветвящиеся и другие формы. На поверхности бактерий имеются фимбрии, облегчающие адгезию к эпителию слизистой оболочки. У С. diphtheriae выделяют три биовара — gravis, mitis и intermedius. Бактерии биовара gravis — короткие неправильной формы, с небольшим количеством метахроматических гранул. Биовар mitis образуют длинные изогнутые полиморфные палочки, содержащие лютиновые зёрна. Бактерии биовара intermedius имеют поперечные перегородки, разделяющие клетку на несколько сегментов.

С. diphtheriae хорошо окрашивается осными анилиновыми красителями, грамположительны. В мазках С. diphtheriae располагаются в виде «растопыренных пальцев», «иероглифов», латинской буквы V.

Культуральные свойства. Дифтерийная палочка хорошо растёт при 36-37°С; оптимальное значение рН 7,4-8,0. Питательные среды должны содержать аминокислоты, витамины, ионы (Са²⁺, Mg²⁺, Fe²⁺ и др.), играющие роль ростовых факторов. На сывороточных средах (среде Лёффлера) дают рост уже через 10-12 ч. Наибольшее распространение получили среды с теллуритом, так как возбудитель резистентен к высоким концентрациям теллурита калия или натрия, ингибирующим рост сопутствующей микрофлоры. На таких средах возбудитель образует сероваточёрные колонии в результате восстановления теллурита до металлического теллура. жидких средах образуют помутнение и осадок.

Биохимическая активность. С. diphtheriae сбраживает с образованием кислоты глюкозу, мальтозу, галактозу, декстрин; не разлагает сахарозу, лактозу, маннит. Способность разлагать крахмал и гликоген варьирует у различных штаммов, что используют для внутривидовой дифференциации. Дифтерийная палочка не гидролизует мочевину и не образует индол. Отсутствие способности ферментировать сахарозу и разлагать мочевину — дифференцирующий признак, отшчащий дифтерийную палочку от других коринебактерий. Другой дифференцирующий признак - способность разлагать цистеин. С. diphtheriae продуцирует каталазу, гиалуронидазу, нейраминидазу, ДНКазу, уреазу и др. Цистиназная активность — дифференцирующий признак С. diphtheriae. Дифтерийная палочка лизирует эритроциты морской свинки и кролика. Биовары возбудителя дифтерии существенно различаются по культуральным и биохимическим свойствам. Среди дифференциально-диагностических биохимических тестов наиболее часто учитывают различия вспособности разлагать углеводы и мочевину. Дифтерийная палочка образует бактериоцины (корицины), обладающие узким спектром действия. Бактериоцины образуют как токсигенные, так и нетоксигенные штаммы.

Факторы патогенности

Экзотоксин термолабильный, высокотоксичный полипептид, имеющий фрагменты А (проявляет ферментативную активность) и В (взаимодействует с клеточными рецепторами, облегчая проникновение фрагмента А). С. diphtheriaeпродуцирует мощный экзотоксин — основной фактор патогенности. Нетоксигенные штаммы не вызывают развитие заболевания.

Идентификацию биоваров дифтерийной палочки проводят по способности разлагать глюкозу мальтозу, сахарозу, крахмал и мочевину. Бактерии биоваров gravis и i ntermedius разлагают глюкозу, мальтозу и крахмал. Бактерии биовара mitis разлагают лишь глюкозу и мальтозу. Все биовары дифтерийной палочки не разлагают мочевину, восстанавливают нитраты в нитриты. Дифтерийный токсин катализирует перенос АТФ-рибозы от цитоплазматического никотин-амиддинуклеотида (НАД) к фактору элонгации 2. Токсин ингибирует белковый синтез, в том числе в миокарде, приводя к структурным и функциональная нарушениям, способным вызвать смерть больного. При воздействии токсина на нервную ткань происходит демиелинизация нервных волокон, параличи и парезы.

Способность к токсинообразованию проявляют лишь лизогенные штаммы Corynebacterim diphtheriae, инфицированные бактериофагом (β-фаг), несущим ген tox, кодирующий структуру токсина.

Антигенная структура. У С. diphtheriae выделяют О- и К-антигены. Липидные и полисахаридные термолабильные фракции 0-Аг коринебактерий преимущественно представлены межвидовыми антигенами. Поверхностные термолабильные К-Аг (нуклеопротеиды, белки) обеспечивают видовую специфичность и проявляют выраженную иммуногенностъ. С помощью анти-К-сывороток дифтерийные бактерии разделяют на серологические варианты (около 58). Биовар mitis включай 40 сероваров, gravis — 14, intermedius— 4. В отечественной практике используют диагностические агглютинирующие, неадсорбированные сыворотки; в том числе полигрупповые и к сероварам для РА на стекле и в пробирках.

Патогенез поражений. Входные ворота для возбудителя — слизистые оболочки глотки, иногда глаз, половых органов (у женщин), повреждённые кожные покровы. Дифтерийная палочка колонизирует ткани в месте внедрения, вызывая развитие местного фибринозного воспаления. В однослойном цилиндрическом эпителии дыхательных путей формируется крупозное воспаление, на многослойном плоском эпителии образуется жёлто-серая фибринозная плёнка, плотноспаянная с прилежащими тканями. Разрастание плёнок и переход процесса на воздухоносные пути могут вызвать асфиксию. Возможные системные проявления обусловлены действием токсина, поражающего нервную систему (преимущественно периферические симпатические узлы), сердце и сосуды, надпочечникии почки. Ферменты патогенности С. diphtheriae (гиалуронидаза, нейраминидаза, фибринолизин) обеспечивают проникновение возбудителя в различные ткани, включая кровоток.

Продолжительность инкубационного периода заболевания составляет 2-12 сут. В зависимости от локализации процесса выделяют поражения ротоглотки (наиболее часто), дыхательных путей, носа и редкой локализации (глаза, наружные половые органы, кожа, раневые поверхности).