Робота 5 Колориметричний метод кількісного визначення рівня гемоглобіну в крові (метод Салі)

Метод Салі застосовується для визначення кількості гемоглобіну в крові.

Принцип методу полягає в наступному. При додаванні до крові соляної кислоти гемоглобін перетворюється на хлористоводневий гематин коричневого кольору, інтенсивність якого прямо пропорційна вмісту гемоглобіну. Отриманий розчин хлористоводневого гематину розводять водою до кольору стандарту.

Цей метод визначення кількості гемоглобіну дає результати з точністю до 10 %. Помилка пов’язана із самою технікою визначення і можливими суб’єктивними помилками у визначенні кольору. Однак метод дуже поширений, оскільки зручний і простий.

Для визначення використовують гемометр Салі. Це штатив з трьома пробірками. У крайніх запаяних пробірках міститься 1% розчин хлористоводневокислого гематину. Середня пробірка має поділки від 0 до 23 х 10 г/л і призначена для визначення гемоглобіну в досліджуваній крові.

У нормі кількість гемоглобіну становить у чоловіків 140 – 160 г/л , у жінок – 120 – 140 г/л.

 

Рисунок 29 -Гемометр Салі: а – пробірки зі стандартним розчином солянокислого гематину; б – пробірка для визначення гемоглобіну

 

Мета роботи - визначити й оцінити кількість гемоглобіну в крові досліджуваного.

Для роботи потрібні: гемометр Салі, піпетка, скляна паличка, 0,1N розчин хлористоводневої кислоти, дистильована вода, 96% спирт етиловий, вата, гумова груша.

Хід роботи

• За допомогою піпетки налити в середню пробірку гемометра 0,1N розчин хлористоводневої кислоти до нижньої позначки (0,2 мл).
• У капіляр для визначення гемоглобіну до позначки набрати кров (0,02 мл).
• Обтерти ватою кінчик капіляра.
• Помістити капіляр в пробірку з кислотою і обережно, щоб не утворилася піна, випустити кров із капіляра на дно пробірки.
• Не виймаючи капіляр із пробірки, промити його кислотою з верхніх шарів.
• Перемішати кров з кислотою,струшуючи пробірку.
• Поставити пробірку в гемометр.
• Залишити гемометр на 4-5 хв. За цей час кислота, зруйнувавши оболонку еритроцитів, перетворить гемоглобін на хлористоводневокислий гематин, що має характерний коричневий колір.
• У середню пробірку додати краплями дистильовану воду доти, доки колір розчину у середній пробірці не стане таким, як у стандартних пробірках.
• Зафіксувати рівень розчину у середній пробірці за нижнім меніском.
• Для отримання величини в г/л значення у г% необхідно помножити на 10

Рекомендації щодо оформлення результатів роботи

ü Замалювати гемометр Салі.

ü Розрахувати кількість гемоглобіну в крові досліджуваного. Результати навести в абсолютних одиницях.

Приклади розрахунку

Гемометр має поділки в абсолютних одиницях гемоглобіну.

Результат – 15 г%.

Розрахунок: 15 г % * 10 = 150 г/л.

У висновках відповісти на такі запитання: чи нормальна кількість гемоглобіну в досліджуваній крові і про що це свідчить?

 

 

Робота 6: Розрахунок кольорового показника

У гематологічній клініці розраховують 5 індексів червоної крові: кольоровий показник, середній вміст гемоглобіну в еритроциті, середню концентрацію гемоглобіну в еритроциті, середній об’єм еритроцита, середній діаметр еритроцита. Обов’язковим у загальному клінічному аналізі має бути визначення кольорового показника.

Величина цього показника відтворює відносний вміст гемоглобіну в кожному окремому еритроциті. За нормального насичення еритроцитів гемоглобіном кольоровий показник перебуває в межах 0,85 – 1,15. Збільшення чи зменшення його свідчить про порушення насичення еритроцитів гемоглобіном. Для розрахунку кольорового показника крові користуються номограмою, що зображена на рисунку 30.

 

 

А б в

Рисунок 30 – Номограма для визначення кольорового показника:

а – значення кольорового показника;

б –значення вмісту гемоглобіну за методом Салі (%);

в – кількість еритроцитів в 1 л крові

 

Для отримання кількості гемоглобіну у % проводиться такий перерахунок. Наприклад, у крові 14 г% гемоглобіну:

16,7 г% - 100%

14 г% - х х = 14 ×100 / 16,7 = 84%.

 

Мета роботи - визначити і оцінити відносний вміст гемоглобіну в еритроциті.

Хід роботи. Визначивши кількість еритроцитів у 1 мкл крові й кількість гемоглобіну, розрахувати кольоровий показник (КП).

Якщо кількість гемоглобіну визначена у г/л, то КП розраховують за формулою

КП =(кількістьHb(г/л)*3): (перші 3 цифри числа еритроцитів).

Наприклад, якщо кількість гемоглобіну становить 140 г/л, еритроцитів – 4,2 * 10¹² (4 200 000 000 000),то КП = (140 х 3): 420 = 1.

Рекомендації щодо оформлення результатів роботи. Розрахувати кольоровий показник на підставі даних попередніх праць.

У висновках відповісти на такі запитання: Який ступінь насичення еритроцитів гемоглобіном? Про що це свідчить?