Визначення груп крові за системою аво(н) за допомогою стандартних сивороток.

Хід роботи: на чашку Петрі нанести краплю тестованої крові та по одній краплі стандартних сироваток I, II, III груп, що містять відповідно агглютиніни: I група – α, β, II - β, III - α. Окремими кутами чистого предметного скла додати кров в кожну краплю стандартної сироватки у співвідношенні 1:10 і обережно перемішати.

Реакція аглютинації настає через 2 - 5 хвилин. За наявності аглютинації крапля стає прозорою, а еритроцити склеюються у вигляді грудочок. Група крові встановлюється залежно від наявності або відсутності аглютинації.

Якщо аглютинації немає у всіх трьох краплях, це свідчить про відсутність агглютиногенів в еритроцитах досліджуваної крові і, отже, вона належить до I (O) групи. Якщо аглютинація відбулася з сироватками I і III груп, що містять відповідно аглютиніни α, β та α, то еритроцити досліджуваної крові містять аглютиногени А і ця кров належить до II (А) групи.

Якщо аглютинація відбулася з сироватками I і II груп, що містять відповідно аглютиніни α, β та β, то еритроцити досліджуваної крові містять агглютиноген В і вона належить до III (В) групи.

Якщо аглютинація відбулася з сироватками I, II, III, груп, що містять відповідно аглютиніни α, β; β і α, то еритроцити досліджуваної крові містять як аглютиноген А, так і аглютиноген В. Отже, досліджувана кров належить до IV (АВ) групи.

Визначте та запишіть до якої групи крові належить кров, яку Ви досліджували.

Кольоровий показник характеризує міру насичення гемоглобіном кожного еритроцита. Розраховується наступним чином:

КП = (кількість гемоглобіну в грамах на літр * 30) розділити на перші 4 цифри кількості еритроцитів.

Визначити гематокритний показник, зробити висновок

. Гематокритний показник (гематокрит) характеризує відсотковий об’єм формених елементів (а саме еритроцитів) у крові. Розрізняють венозний, капілярний та артеріальний гематокрит, оскільки об’єм формених елементів, насамперед еритроцитів, неоднаковий у різних відділах кровоносного русла.

 

Найнижчий гематокрит в артеріальній крові.

 

Мета роботи - визначити відсотковий об’єм формених елементів (а саме еритроцитів) у крові капілярів і оцінити його величину.

 

Для роботи необхідно: гематокритний капіляр або мікропіпетка, центрифуга на 8000 об/хв, пластилін, водний розчин гепарину (з активністю 5000 ОД/мл), 96% спитр, 2% розчин йоду спиртовий, вата, гумова груша.

 

Хід роботи

 

Градуйовану на 100 поділок гематокритну піпетку промити розчином гепарину.

 

Продути піпетку гумовою грушею.

 

Висушити піпетку і заповнити кров’ю на 7/8 довжини.

 

Отвір піпетки заклеїти пластиліном і центрифугувати протягом 5 хв. при 8000 об/хв.

 

Після центрифугування визначити відсоток формених елементів стосовно загального об’єму крові, тобто гематокритну величину.

 

Визначення загальної кількості лейкоцитів в крові.

Хід роботи: скляну камеру для підрахунку формених елементів крові помістити під мікроскоп і розглянути на ній сітку Горяєва спочатку при малому, а потім при великому збільшенні. Накрити камеру покривним склом і притерти його краї до скла камери до появи веселкових кілець.

У консервовану кров занурити кінчик капіляру Салі та набрати кров до мітки (0,02 мл). Стежити аби в капіляр не потрапили бульбашки повітря. Обтерти кінець капіляра фільтрувальним папером і, для руйнування еритроцитів, перенести його в конічну пробірку з 0,4 мл 5,0% розчином оцетової кислоти, підфарбованої метиленовою синню, вилити в пробірку вміст капіляру та перемішати скляною паличкою.

Для підрахунку формених елементів узяти скляною паличкою краплю суспензії лейкоцитів, нанести на середній майданчик камери з краю покривного скла. Якщо на сітку потрапило повітря або на бічних майданчиках виявився надлишок розчину, камеру необхідно промити дистильованою водою, досуха витерти марлею і заповнити знову.

Заповнену лейкоцитарною суспензією камеру поставити під мікроскоп і приступити до підрахунку лейкоцитів. Підрахунок вести краще при малому об'єктиві (Х8), але використовувати при цьому окуляр X 15.

Аби отримати точні дані, необхідно підрахувати кількість лейкоцитів в 25 великих квадратах, які знаходяться в різних місцях сітки, наприклад, по діагоналі. Для цього на аркуші паперу намалювати 25 великих квадратів, що складає 400 маленьких, і вписувати знайдене число лейкоцитів. Щоб уникнути двократного підрахунку клітин, рахуються лейкоцити всередині кожного квадрата (400 маленьких квадратів), а також на верхньому і лівому його кордонах (правило Єгорова).

Результат:

Знайдену кількість лейкоцитів підставляють у формулу:

Х = [(Л * 4000 * 20) / 400] * 10⁶

де Х — шукане число лейкоцитів в 1 л цілісної крові;

Л — сума лейкоцитів в 400 маленьких квадратах;

1/4000 мкл/мм³ — об'єм одного маленького квадратика;

20 — міра розведення крові;

10⁶ — коефіцієнт для перерахунку в міжнародну систему СІ.

Визначення групи крові за допомогою моноклониальных реагентів.
Надіти рукавички. Розкрити флакони з моноклониальными реагентами (анти-А - червоний, анти-В синій).

У дві лунки завдати по 1 краплі (0,05 мл) реагентів: в першу – реагент анти-А, в другу – реагент анти-В. Окремим кінцем скляної палички або окремою піпеткою для кожної лунки перенести краплю крові (0,005 мл) у 10 разів менше краплі реагенту з пред-метного скла в лунку і змішати з краплею реагенту до гомогенного плями.

Оцінка результатів:
1. За відсутності аглютинації з двома реагентами група крові 0(I) – перша.
2. При наявності аглютинації з реагентом анти-А група крові А(II) – друга.
3. При наявності аглютинації з реагентом анти-В-група крові В(III) – третя.
4. При наявності аглютинації з двома реагентами група крові АВ(IV) – четверта, що повинно бути підтверджено аглютинацією з реагентом анти-АВ і відсутністю неспецифічних аглютинації з ізотонічним розчином натрію хлориду.

Визначення Rh-фактора за допомогою моноклонального

Реагенту анти-D.

Хід роботи: на чашку Петрі піпеткою нанести роздільно по 2 дві краплі реагенту анти-D і краплю крові донора. Скляною паличкою змішуємо кров донора з реагентом анти-D і протягом 5 хвилин спостерігаємо результат. Якщо сталася аглютинация кров донора є резус-позитивною, при відсутності – кров резус-негативна.

Лейкоцитарная формула – процентное соотношение различных форм лейкоцитов в сыворотке крови и подсчет их числа в единице объема.