Методические указания по обнаружению металлических ядов в патологическом материале с помощью экспрессных методов исследования. Метод осадочной хроматографии на бумаге

Приготовление реактивов. Раствор дитизона в бензоле: 5 мг дитизона растворяют в 10 мл бензола. Раствор пригоден для работы в течение одного дня.

Фильтровальная бумага, пропитанная раствором тиомочевины. Полоски фильтровальной бумаги размером 5х30 см пропитывают 4%-ным раствором тиомочевины и сушат на воздухе. Такие полоски бумаги можно хранить в плотно закрытой банке 3 мес.

Раствор рубеановодородной кислоты. 0,1 г рубеановодородной кислоты растворяют в 10 мл ректификованного спирта. Раствор сохраняется б дней.

Фильтровальная бумага, пропитанная кремнекислым натрием. Полоски фильтровальной бумаги размером 5х30 см пропитывают 4%-ным раствором кремнекислого натрия и высушивают на воздухе. Хранят в плотно закрытой банке. Срок хранения 1 год.

Йодистая медь: 5,3 г йодистого калия растворяют в 10—15 мл дистиллированной воды, к полученному раствору прибавляют 40 мл 10%-ного раствора сернокислой меди, образующийся осадок отфильтровывают и промывают дистиллированной водой до полного обесцвечивания промывных вод. Фильтр с осадком прокалывают иглой, смывают осадок дистиллированной водой в колбу и доводят до объема 50 мл. Взвесь йодистой меди пригодна для работы в течение 6 мес.

Раствор родизоновокислого натрия. 0,05 г родизоновокислого натрия растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Раствор пригоден для работы в течение 3 дней.

Фильтровальная бумага, пропитанная виннокислым натрием: полоски фильтровальной бумаги размером 5х30 см пропитывают 4%-ным раствором виннокислого натрия и сушат на воздухе. Хранят в плотно закрытой банке до 1 г.

Буферный раствор с рН 2,8.

Раствор А: 35,628 г двуметаллического фосфорнокислого натрия (Na2HPO4·12Н2О) растворяют в воде и доводят до 1 л.

Раствор Б: 21,008 г лимонной кислоты растворяют в воде и доводят до 1 л. Для получения бу-ферного раствора с рН 2,8 смешивают 1,58 мл раствора А с 8,42 мл раствора Б. Исходные растворы сохраняют в течение 1 мес.

Бромно-ртутные бумажки: из беззольной фильтровальной бумаги вырезают кружочки по размерам трубки насадки на колбочку прибора Зангера-Блека. Бумажные кружочки пропитывают 5%-ным спиртовым раствором бромной ртути, сушат на воздухе и хранят в плотно закрытой склянке из темного стекла до 6 мес.

Свинцово-ацетатная вата: гигроскопическую вату пропитывают в 5%-ном растворе уксуснокислого свинца и сушат. Хранят в плотно закрытой склянке до 1 г.

Раствор молибденовокислого аммония: 5 г молибденовокислого аммония растворяют в 100 мл воды, добавив 35 мл азотной кислоты с удельным весом 1,22 (43%-ный раствор). Срок хранения 3 мес.

Раствор уксуснокислого бензидина: 0,05 г основного бензидина растворяют в 10 мл концентрированной уксусной кислоты (80%) и доводят водой до 100 мл. Срок хранения 10 дней.

В целях ускорения токсикологических исследований при проведении лабораторной диагностики отравлений металлическими ядами (медью, ртутью, цинком, барием и свинцом) разработаны экспрессные (ускоренные) методы обнаружения этих ядов в патологическом материале и других объектах.

Для обнаружения с помощью экспрессных химических методов бария, свинца, цинка, меди и ртути (каждого в отдельности) требуется около 1 ч, включая разрушение патологического материала и других исследуемых объектов, а для исследования на фосфид цинка по фосфору и цинку — 2 ч.

Обнаружение металлических ядов — цинка, меди, бария и свинца — основано на применении метода осадочной хроматографии на бумаге. Цинк определяют по реакции с дитизоном, медь — рубеановодородной кислотой, барий и свинец — родизоновокислым натрием.

Обнаружение ртути проводят с помощью реакции с йодистой медью капельным методом на бумаге.

Метод осадочной хроматографии на бумаге позволяет обнаруживать искомый катион, находящийся в смеси с другими катионами, без выделения его в чистом виде. Присутствие других катионов в количествах, превышающих в 100 раз количество искомого катиона, не мешает его обнаружению методом осадочной хроматографии на бумаге (ртути — капельной реакцией с йодистой медью на бумаге).

Для определения цинка, меди и ртути применяют экспрессный способ неполного разрушения патологического материала концентрированной серной кислотой и пергидролем; для выделения бария и свинца применяют способ разрушения патологического материала концентрированной соляной кислотой и хлоратом калия. В обоих случаях разрушение навески (20—25 г) патологического материала для получения минерализата проводят за 30—40 мин.

Подготовка материала для исследования. Из патологического материала (содержимое желудка, зоба, кишечника со стенками, кусочки паренхиматозных органов, рвотные массы) отделяют 20—25 г для исследования на медь, ртуть и цинк, часть материала сохраняют для исследования на барий и свинец, на другие яды и для контроля. Если материал был консервирован спиртом или содержит много воды (рвотные массы, силос), то пробу помещают в фарфоровую чашку и подсушивают на кипящей водяной бане (для удаления избытка воды).

Для исследования на цинк, ртуть и медь разрушение материала проводят концентрированной серной кислотой и пергидролем. 20—25 г патологического материала помещают в колбу Кьельдаля объемом 250—300 мл, заливают 10—12,5 мл пергидроля, 1—2 мин перемешивают и прибавляют 6—7 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое колбы разогревается и наступает бурная реакция. Когда реакция затихнет, колбу осторожно нагревают на электроплитке и прибавляют по 1—2 мл пергидроля до тех пор, пока содержимое колбы сделается прозрачным (полного разрушения органического материала при этом не происходит — остаются неразрушенными жир и продукты распада белков). Для разрушения 20—25 г материала требуется примерно 25—40 мин.

Для исследования на барий и свинец разрушение патологического материала проводят концентрированной соляной кислотой и хлоратом калия (бертолетовой солью), чтобы избежать образования труднорастворимых сернокислых солей бария и свинца, выпадающих в осадок. Навеску материала в 20—25 г помещают в колбу Кьельдаля, заливают концентрированной соляной кислотой, нагревают и прибавляют небольшими порциями хлорат калия, пока жидкость не станет прозрачной. Разрушение 20—25 г материала происходит в течение 30—40 мин.

Обнаружение цинка. Часть минерализата (1—2 мл) разбавляют 1:1 дистиллированной водой, берут 2—3 капли и нейтрализуют концентрированным аммиаком (по лакмусу), одну каплю нейтрализованного раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанной тиомочевиной и высушенной, и держат 1 мин над горлом склянки с концентрированным аммиаком, высушивают на воздухе и опрыскивают из пульверизатора раствором дитизона в бензоле. При наличии цинка на бумаге появляется пятно розовато-красного или красно-малинового цвета. В контрольном опыте вместо минерализата берут дистиллированную воду и проделывают все операции основного опыта. Пятно на бумаге не должно окрашиваться в розовый или красно-малиновый цвет. Нормально присутствующий в органах цинк при этих условиях не обнаруживается.

Обнаружение меди. 2—3 капли минерализата нейтрализуют концентрированным раствором аммиака, каплю нейтрализованного раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанной раствором кремнекислого натрия и высушенной, держат над горлом склянки с концентрированным аммиаком, подсушивают и опрыскивают из пульверизатора раствором рубеановодородной кислоты. В присутствии меди пятно окрашивается в темно-зеленый цвет. В случае сомнительной реакции на медь с целью повышения чувствительности метода следует взять 3—5 мл минерализата и выпарить в фарфоровой или кварцевой чашке на электроплитке с добавлением нескольких капель пергидроля для обесцвечивания темнеющей жидкости и проделать реакцию на медь, как указано выше.

Обнаружение ртути. На беззольную фильтровальную бумагу наносят каплю взвеси йодистой меди, выжидают 2—3 мин и наносят на это место каплю минерализата. В присутствии ртути появляется красное или красно-оранжевое окрашивание.

Реакция высокочувствительная, ею можно обнаруживать 0,25 мкг ртути в одной капле.

Обнаружение бария. 3—5 капель минерализата нейтрализуют концентрированным аммиаком, одну каплю жидкости наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанную 4%-ным раствором виннокислого натрия и высушенной, подсушивают на воздухе и опрыскивают из пульверизатора раствором родизоната натрия, а затем буферным раствором с рН 2,8. В присутствии бария пятно окрашивается в оранжево-красный цвет. Присутствие в минерализате цинка, меди, ртути и железа в 100-кратном количестве по отношению к барию не мешает его обнаружению этим методом. Для дифференциации бария от свинца на оранжево-красное пятно от родизоновокислого бария наносят каплю 10%-ного раствора сернокислого натрия, оранжево-красная окраска исчезает; если же присутствует свинец, окраска пятна не меняется.

Обнаружение свинца. Каплю горячего минерализата (при охлаждении минерализата хлористый свинец выпадает в осадок) наносят на полоску бумаги, пропитанной 4%-ным раствором виннокислого натрия и высушенной, держат над горлом склянки с раствором крепкого аммиака до полной нейтрализации соляной кислоты, подсушивают и опрыскивают из пульверизатора раствором родизоната натрия, а затем буферным раствором с рН 2,8. В присутствии свинца пятно окрашивается в фиолетовый цвет, а при незначительном количестве свинца — в красно-оранжевый.

Для дифференциации бария от свинца на оранжево-красное пятно, образовавшееся от родизоновокислого бария, наносят каплю 10%-ного раствора сульфата натрия. Оранжево-красная окраска исчезает. Если же присутствует свинец, цвет пятна не меняется.