Методы выделения токсических веществ, основанные на изолировании их подкисленной водой

Метод выделения алкалоидов и других токсических веществ из биологического материала, основанный на изолировании их водой, подкисленной щавелевой кислотой. При изолировании алкалоидов и других токсических веществ подкисленной водой в несколько раз сокращается время анализа. Для выделения токсических веществ с помощью этого метода не требуется применение этилового спирта. Однако описанный выше метод изолирования токсических веществ непригоден для выделения из биологического материала соединений, нерастворимых в подкисленной воде. Кроме этого, данный метод ограниченно пригоден для выделения токсических веществ из загнившегося биологического материала.

При проведении химико-токсикологического анализа с целью определения наличия лекарственных веществ различных групп рекомендуется использовать метод изолирования с использованием щавелевой кислоты (метод Васильевой).

При направленном анализе, когда целью исследования является обнаружение какого либо конкретного вещества или группы веществ, рекомендуется выбирать методику изолирования и дальнейшего исследования по частным методикам (некоторые из которых приведены ниже по тексту).

Предварительная обработка образцов

Хотя многие методики изолирования могут выполняться непосредственно на биологических материалах, часто требуется та или иная форма предварительной обработки образцов. В случае плазмы и сыворотки простая форма предварительной обработки предусматривает осаждение белка вихревым перемешиванием, например с водным раствором трихлоруксусной кислоты, с последующим центрифугированием и отделением чистого супернатанта. Применяют также гидролиз некоторых соединений, в том числе конъюгированных метаболитов (сульфаты и глюкурониды), который осуществляется нагреванием с кислотой или обработкой препаратом фермента. Это позволяет либо получить способное реагировать соединение для анализов (как, например, в случае бензодиазепинов и парацетамола), либо повысить чувствительность тестов (в случае слабительных средств и морфина).

Трупный материал. Кровь: 80мл крови смешивают с 80мл концентрированной соляной кислоты и нагревают на водяной бане 1час с обратным холодильником. Затем полученную смесь охлаждают до комнатной температуры, далее как описано в п.п. 2.2.1.2., п.п. 2.2.1.3.

Трупный материал. Ткани и органы (в случае бензодиазепинов и парацетамола): 25 грамм ткани головного мозга, 25 грамм ткани желудка, 25 грамм ткани печени, 25 грамм ткани селезёнки, 25 грамм ткани почки, 25 грамм ткани тонкой кишки, 25 грамм толстой кишки и весь кожный лоскут помещают в круглодонные колбы, каждый орган отдельно, вносят двойное количество 6н. раствора соляной кислоты и проводили гидролиз на глицериновой бане с обратным холодильником при 120°С в течение часа. По окончании гидролиза холодильник промывают 5 мл 2 н. раствора соляной кислоты, промывные воды присоединяют к гидролизатам из каждого органа отдельно. Горячие гидролизаты фильтруют через ватмановский фильтр (белая лента). Остатки на фильтре трижды промывают 2 н. раствором соляной кислоты. Гидролизаты и промывные воды из каждого органа отдельно объединяют. Из полученных вытяжек проводят экстрагирование диэтиловым эфиром трижды порциями 20, 15, 15 мл. Органическую фазу из каждого органа отдельно профильтровывают через воронку с безводным сульфатом натрия. Полученные экстракты из каждого органа отдельно объединяют, доводят объемы до 50мл в мерных колбах далее как описано в п.п. 2.2.1.3.

Кровь живых лиц. Методика изолирования: 5мл крови смешивают с 8мл 40% раствора бисульфита натрия, добавляют 2мл 15% раствора соляной кислоты, смесь нагревали на кипящей водяной бане в течение 30минут, а затем охлаждают. К жидкости добавляют 3мл 50% раствора трихлоруксусной кислоты. Через 10 минут надосадочную жидкость отфильтровывают в делительную воронку, нейтрализуют раствором аммиака 25% до реакции рН 6-7 по универсальному индикатору. Жидкость насыщают кристаллическим бикарбонатом натрия (0,3г на 30мл жидкости) и экстрагируют смесью бутанол-хлороформ (1:9) три раза по 20мл, в течение 5минут каждый раз. Экстракт профильтровывают через слой безводного сульфата натрия и концентрируют.